本文關(guān)鍵詞：中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及增殖能力的初步研究

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【摘要】：第一部分中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[目的] 探索中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞(middle ear cholesteatoma epithelial cells, MECEC)的原代培養(yǎng)方法和條件,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征,并對(duì)原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。[方法] 取乳突根治術(shù)時(shí)切取的中耳膽脂瘤組織,分離出膽脂瘤上皮后進(jìn)行組織塊培養(yǎng),對(duì)比單純有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)法(有血清培養(yǎng)組)、有血清和無(wú)血清培養(yǎng)基聯(lián)合培養(yǎng)法(聯(lián)合培養(yǎng)組)兩種培養(yǎng)條件下膽脂瘤上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的成功率,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)和細(xì)胞鑒定。[結(jié)果] 聯(lián)合培養(yǎng)組的細(xì)胞成功率較高(70.83%),細(xì)胞成典型的“鋪路石樣”生長(zhǎng)；有血清培養(yǎng)組的細(xì)胞成功率較低(33.33%),而且細(xì)胞中混有成纖維細(xì)胞,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。培養(yǎng)出的細(xì)胞可傳代1-2代,免疫熒光染色顯示細(xì)胞角蛋白陽(yáng)性,證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為上皮細(xì)胞。[結(jié)論] 用組織塊法,有血清和無(wú)血清培養(yǎng)基聯(lián)合培養(yǎng)比單純有血清培養(yǎng)基培養(yǎng),能更好,更成功地培養(yǎng)出中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞,我們可以用此方法建立一種簡(jiǎn)單易行的中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法。 第二部分中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞增殖能力的研究[目的] 通過(guò)觀察中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞(middle ear cholesteatoma epithelial cells, MECEC)和正常外耳道表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(normal external ear canalkeratinocytes,NEECK)在體外培養(yǎng)的生長(zhǎng)情況,以及測(cè)定兩者培養(yǎng)液上清中IL-6和MCP-1的分泌情況,比較MECEC和NEECK在體外培養(yǎng)后的增殖能力。 [方法] 將手術(shù)時(shí)從同一個(gè)病人身上取出的中耳膽脂瘤上皮組織和正常外耳道表皮組織,同時(shí)用組織塊法、有血清培養(yǎng)基和無(wú)血清培養(yǎng)基聯(lián)合培養(yǎng)的方法進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),觀察兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,測(cè)量從組織塊中心到其最遠(yuǎn)端爬出細(xì)胞的距離,并用ELISA法測(cè)定兩種細(xì)胞培養(yǎng)16天后細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IL-6和MCP-1的分泌情況。[結(jié)果] 中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞比正常外耳道表皮角質(zhì)化細(xì)胞生長(zhǎng)較快,從組織塊中心到其最遠(yuǎn)端爬出細(xì)胞的距離也較長(zhǎng)。用ELISA測(cè)得：膽脂瘤組(IL-6：1.54±0.72;MCP-1：1.44±0.20)同正常外耳道組(IL-6:0.40±0.05:MCP-1:0.60±0.30)相比,細(xì)胞培養(yǎng)液中的IL-6和MCP-1的分泌量前者均明顯高于后者,而且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 [結(jié)論] 1、與正常外耳道表皮角質(zhì)形成細(xì)胞相比,中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)生長(zhǎng)較快,從組織塊中心到其最遠(yuǎn)端爬出細(xì)胞的距離較長(zhǎng)。 2、與正常外耳道表皮角質(zhì)形成細(xì)胞相比,IL-6和MCP-1在中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中的分泌量較多,二者的分泌可能與中耳膽脂瘤的增殖有關(guān)。 3、我們根據(jù)中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞爬出的距離和IL-6、MCP-1在細(xì)胞培養(yǎng)液中分泌量,初步證實(shí)了中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)比正常外耳道表皮角質(zhì)形成細(xì)胞有較強(qiáng)的增殖能力。
【關(guān)鍵詞】：中耳 膽脂瘤 上皮 細(xì)胞培養(yǎng) IL-6 MCP-1 細(xì)胞增生
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R764.21
【目錄】：

• 主要縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分 中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定15-28
• 1 材料和方法15-19
• 1.1 材料15-16
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2 結(jié)果19-25
• 2.1 倒置顯微鏡下觀察中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)特征19-22
• 2.2 兩種培養(yǎng)條件下細(xì)胞培養(yǎng)成功率的比較22-23
• 2.3 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)23
• 2.4 細(xì)胞鑒定23-25
• 3 討論25-27
• 4 結(jié)論27-28
• 第二部分 中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞增殖能力的研究28-42
• 1 材料和方法29-31
• 1.1 材料29
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法29-31
• 2 結(jié)果31-35
• 2.1 中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞和正常外耳道表皮角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)后比較觀察31-33
• 2.2 ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6和MCP-1的分泌量33-35
• 3 討論35-41
• 4 結(jié)論41-42
• 總論42-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 綜述50-57
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 碩士期間發(fā)表文章57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：958336