本文關(guān)鍵詞：中耳膽脂瘤上皮細胞的體外培養(yǎng)及增殖能力的初步研究

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【摘要】：第一部分中耳膽脂瘤上皮細胞的原代培養(yǎng)及鑒定[目的] 探索中耳膽脂瘤上皮細胞(middle ear cholesteatoma epithelial cells, MECEC)的原代培養(yǎng)方法和條件,觀察細胞形態(tài)學(xué)特征,并對原代培養(yǎng)的細胞進行鑒定,為后續(xù)實驗研究奠定基礎(chǔ)。[方法] 取乳突根治術(shù)時切取的中耳膽脂瘤組織,分離出膽脂瘤上皮后進行組織塊培養(yǎng),對比單純有血清培養(yǎng)基培養(yǎng)法(有血清培養(yǎng)組)、有血清和無血清培養(yǎng)基聯(lián)合培養(yǎng)法(聯(lián)合培養(yǎng)組)兩種培養(yǎng)條件下膽脂瘤上皮細胞原代培養(yǎng)的成功率,并對細胞進行傳代培養(yǎng)和細胞鑒定。[結(jié)果] 聯(lián)合培養(yǎng)組的細胞成功率較高(70.83%),細胞成典型的“鋪路石樣”生長；有血清培養(yǎng)組的細胞成功率較低(33.33%),而且細胞中混有成纖維細胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。培養(yǎng)出的細胞可傳代1-2代,免疫熒光染色顯示細胞角蛋白陽性,證實培養(yǎng)的細胞為上皮細胞。[結(jié)論] 用組織塊法,有血清和無血清培養(yǎng)基聯(lián)合培養(yǎng)比單純有血清培養(yǎng)基培養(yǎng),能更好,更成功地培養(yǎng)出中耳膽脂瘤上皮細胞,我們可以用此方法建立一種簡單易行的中耳膽脂瘤上皮細胞培養(yǎng)方法。 第二部分中耳膽脂瘤上皮細胞增殖能力的研究[目的] 通過觀察中耳膽脂瘤上皮細胞(middle ear cholesteatoma epithelial cells, MECEC)和正常外耳道表皮角質(zhì)形成細胞(normal external ear canalkeratinocytes,NEECK)在體外培養(yǎng)的生長情況,以及測定兩者培養(yǎng)液上清中IL-6和MCP-1的分泌情況,比較MECEC和NEECK在體外培養(yǎng)后的增殖能力。 [方法] 將手術(shù)時從同一個病人身上取出的中耳膽脂瘤上皮組織和正常外耳道表皮組織,同時用組織塊法、有血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基聯(lián)合培養(yǎng)的方法進行細胞培養(yǎng),觀察兩種細胞的生長情況,測量從組織塊中心到其最遠端爬出細胞的距離,并用ELISA法測定兩種細胞培養(yǎng)16天后細胞培養(yǎng)液上清中IL-6和MCP-1的分泌情況。[結(jié)果] 中耳膽脂瘤上皮細胞比正常外耳道表皮角質(zhì)化細胞生長較快,從組織塊中心到其最遠端爬出細胞的距離也較長。用ELISA測得：膽脂瘤組(IL-6：1.54±0.72;MCP-1：1.44±0.20)同正常外耳道組(IL-6:0.40±0.05:MCP-1:0.60±0.30)相比,細胞培養(yǎng)液中的IL-6和MCP-1的分泌量前者均明顯高于后者,而且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 [結(jié)論] 1、與正常外耳道表皮角質(zhì)形成細胞相比,中耳膽脂瘤上皮細胞在體外培養(yǎng)時生長較快,從組織塊中心到其最遠端爬出細胞的距離較長。 2、與正常外耳道表皮角質(zhì)形成細胞相比,IL-6和MCP-1在中耳膽脂瘤上皮細胞培養(yǎng)液中的分泌量較多,二者的分泌可能與中耳膽脂瘤的增殖有關(guān)。 3、我們根據(jù)中耳膽脂瘤上皮細胞爬出的距離和IL-6、MCP-1在細胞培養(yǎng)液中分泌量,初步證實了中耳膽脂瘤上皮細胞在體外培養(yǎng)時比正常外耳道表皮角質(zhì)形成細胞有較強的增殖能力。
【關(guān)鍵詞】：中耳 膽脂瘤 上皮 細胞培養(yǎng) IL-6 MCP-1 細胞增生
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R764.21
【目錄】：

• 主要縮略詞表6-7
• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分 中耳膽脂瘤上皮細胞的原代培養(yǎng)及鑒定15-28
• 1 材料和方法15-19
• 1.1 材料15-16
• 1.2 實驗方法16-19
• 2 結(jié)果19-25
• 2.1 倒置顯微鏡下觀察中耳膽脂瘤上皮細胞的生長特征19-22
• 2.2 兩種培養(yǎng)條件下細胞培養(yǎng)成功率的比較22-23
• 2.3 細胞的傳代培養(yǎng)23
• 2.4 細胞鑒定23-25
• 3 討論25-27
• 4 結(jié)論27-28
• 第二部分 中耳膽脂瘤上皮細胞增殖能力的研究28-42
• 1 材料和方法29-31
• 1.1 材料29
• 1.2 實驗方法29-31
• 2 結(jié)果31-35
• 2.1 中耳膽脂瘤上皮細胞和正常外耳道表皮角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)后比較觀察31-33
• 2.2 ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中IL-6和MCP-1的分泌量33-35
• 3 討論35-41
• 4 結(jié)論41-42
• 總論42-45
• 參考文獻45-50
• 綜述50-57
• 參考文獻55-57
• 碩士期間發(fā)表文章57-58
• 致謝58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號：958336