本文關(guān)鍵詞：奧沙利鉑體外對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79增殖及凋亡的影響

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【摘要】：目的 1.探討奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79增殖抑制及誘導(dǎo)凋亡的影響。 2.探討siRNA下調(diào)人髓細(xì)胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1, Mcl-1)后增強(qiáng)奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79凋亡的敏感性的影響。 方法 1.MTT法檢測(cè)不同濃度(0、0.125、0.25、0.5、1、2μmol/L)奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y7924、48、72h后的增殖抑制作用,以明確其劑量-效應(yīng)關(guān)系; 2.碘化丙啶(PI)單染流式細(xì)胞儀檢測(cè)奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79作用24h后凋亡的影響； 3.半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)Caspase-3的活性變化； 4.PI/Annexin V雙染檢測(cè)奧沙利鉑(0.25μmol/L)對(duì)siRNA轉(zhuǎn)染下調(diào)Mcl-1人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79凋亡的影響,同時(shí)將未轉(zhuǎn)染和轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79作為空白和陰性對(duì)照； 5.Western blot檢測(cè)奧沙利鉑(0.25μmol/L)誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79不同時(shí)間(0、6、16、24h), Mcl-1的表達(dá)以及siRNA轉(zhuǎn)染下調(diào)Mcl-1人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79中Mcl-1的表達(dá)。 結(jié)果 1.奧沙利鉑抑制人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79增殖 MTT法顯示不同濃度的奧沙利鉑對(duì)視網(wǎng)膜母瘤細(xì)胞Y79的增殖抑制作用,實(shí)驗(yàn)中使用不同濃度奧沙利鉑(0、0.125、0.25.0.5、1、2μmol/L)處理人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79,使用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率。結(jié)果表明,隨著藥物濃度的增加,作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞的存活率下降。0.25μmol/L奧沙利鉑處理視網(wǎng)膜母細(xì)胞Y79的24、48、72h后細(xì)胞的存活率分別為(83.59±0.76)%、(77.30±1.24)%、(61.41±1.39)%；與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.奧沙利鉑誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79凋亡 0.25μmol/L奧沙利鉑刺激人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y7924h后,PI流式檢測(cè),誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79的凋亡率分別為(36.23±0.25)%(P0.05)。 3.奧沙利鉑誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79的Caspase-3激活作用 0.25μmol/L奧沙利鉑刺激人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79后,對(duì)Y79細(xì)胞Caspase-3激活有明顯的增強(qiáng)作用,為(5.76±0.25)%,與對(duì)照組(1.96士0.15)%比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 4.奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79中Mcl-1的表達(dá)的影響 實(shí)驗(yàn)中用0.25μmol/L奧沙利鉑刺激人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79后,培養(yǎng)6,16,24h后收集細(xì)胞,提取蛋白,用Western blot方法檢測(cè)Mcl-1蛋白的表達(dá)。從實(shí)驗(yàn)可以看出,奧沙利鉑可誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79中Mcl-1的表達(dá)增強(qiáng)。 5. pSH1Si-Mcl-1對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79Mcl-1表達(dá)的抑制作用 為觀察下調(diào)Mcl-1后人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79Mcl-1的表達(dá),實(shí)驗(yàn)中分別轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒和不同序列的pSH1Si-Mcl-1質(zhì)粒到人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79,轉(zhuǎn)染6h后更換新鮮培養(yǎng)基,次日收集細(xì)胞,提取蛋白,用Western blot的方法檢測(cè)Mcl-1蛋白的表達(dá),顯示Mcl-l-homo-991具有明顯抑制Mcl-1表達(dá)的作用。 6.下調(diào)Mcl-1的表達(dá)對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79凋亡的促進(jìn)作用 為觀察下調(diào)Mcl-1后,奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79凋亡的作用。實(shí)驗(yàn)中對(duì)不同因素處理的細(xì)胞進(jìn)行PI/Annexin V染色,并通過(guò)流式細(xì)胞儀分析,觀察敲減Mcl-1后誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79早期凋亡的作用。0.25μmol/L奧沙利鉑作用于人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y7924h,誘導(dǎo)Y79細(xì)胞的凋亡率為10.8%,與陰性對(duì)照組5.8%比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。將Mcl-1進(jìn)行敲減,并且敲減后用0.25μmol/L奧沙利鉑處理24h,誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79的凋亡率分別為21.0%和48.2%,與陰性對(duì)照組及奧沙利鉑組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。上述表明,奧沙利鉑本身并不誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生凋亡,但敲減Mcl-1后可增加奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞產(chǎn)生的凋亡。 結(jié)論 1.奧沙利鉑對(duì)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79具有增殖抑制作用,且隨著劑量濃度的加大和作用時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞存活率隨之降低,但在低濃度下作用不明顯,作用機(jī)制可能與凋亡關(guān)鍵蛋白Mcl-1的抗凋亡作用相關(guān)。 2.奧沙利鉑誘導(dǎo)后,人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79中Mcl-1的表達(dá)明顯增加,其作用機(jī)制可能與Mcl-1的抗凋亡作用有關(guān),由此產(chǎn)生了耐藥。 3.下調(diào)Mcl-1后,人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79的細(xì)胞存活率明顯下降,凋亡率明顯上升,由此證明Mcl-1在人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞Y79具有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤 奧沙利鉑 半胱氨酸天冬氨酸蛋白3 小干擾RNA凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R739.7
【目錄】：

• 英文縮略表5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 引言13-16
• 材料與方法16-28
• 結(jié)果28-31
• 討論31-38
• 結(jié)論38-39
• 附錄39-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷47-48
• 在學(xué)期間的研究成果目錄48-49
• 致謝49-50
• 綜述50-59
• 參考文獻(xiàn)56-59

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Carol L.Shields,孫紅,張軍軍,Jerry A.Shields;視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的治療進(jìn)展[J];中華眼底病雜志;2004年03期

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本文編號(hào)：910727