本文關(guān)鍵詞：喉癌Hep-2細(xì)胞來源的exosomes提取方法的比較

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【摘要】：目的:對分離提取喉癌Hep-2細(xì)胞來源的exosomes 2種方法進(jìn)行對比,展現(xiàn)不同方法的優(yōu)缺點(diǎn),為選擇分離提取包括喉癌Hep-2細(xì)胞在內(nèi)的腫瘤細(xì)胞來源exosomes的方法提供參考。方法:大量培養(yǎng)喉癌Hep-2細(xì)胞,42℃熱休克處理。收集90ml培養(yǎng)上清液,先通過3/0.8μm深層過濾小型濾芯對上清液進(jìn)行預(yù)處理,去除直徑較大的顆粒和雜質(zhì),再利用蔗糖密度梯度離心聯(lián)合超濾離心法,將上清液濃縮提純;收集培養(yǎng)上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit內(nèi)試劑,通過exosomes提取專用過濾柱,收集濃縮液。用高倍透射電子顯微鏡對2種方法所得的exosomes濃縮液分別鑒定,作出評價(jià)。結(jié)果:2種方法均能成功地從喉癌Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離提取出exosomes。單個(gè)高倍視野下,蔗糖密度梯度離心聯(lián)合超濾離心法提取exosomes分散性較好,但密度較低,背景見雜質(zhì)較多;Exosome Isolation Kit所提取exosomes排列緊密,密度較高,背景雜質(zhì)較少。結(jié)論:2種方法各具特點(diǎn),均是較理想的exosomes分離提取方法。利用Exosome Isolation Kit分離提取exosomes具有樣本量少、提取時(shí)間短、步驟簡單、產(chǎn)物量大等優(yōu)點(diǎn),為喉癌Hep-2來源exosomes的分離提取提供了較好的選擇。
【作者單位】： 廣州市第一人民醫(yī)院耳鼻咽喉科;廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： exosomes 蔗糖密度梯度離心 超濾離心 Exosome Isolation Kit
【基金】：廣東省科技廳產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究與開發(fā)資金計(jì)劃項(xiàng)目(No:2012B031800340) 廣州市科技和信息化局社會發(fā)展應(yīng)用基礎(chǔ)研究專項(xiàng)(No:2013J4100024)
【分類號】：R739.65
【正文快照】： 在exosomes被Johnstone等〔1〕分離并命名的近30年間,由于其在腫瘤診斷及治療方面的潛能,受到了廣大的關(guān)注,當(dāng)exosomes的應(yīng)用前景、研究價(jià)值吸引人們的注意時(shí),其分離提取方法卻鮮有突破。人的尿液、血液、前列腺液、羊水、精液及惡性胸腹水等體液中均發(fā)現(xiàn)exosomes,且腫瘤細(xì)胞

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3 王e，

本文編號：707530