目的:通過脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激角膜基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)其炎癥反應(yīng),并測(cè)定microRNA-21（miR-21）在炎癥反應(yīng)中的表達(dá),并揭示miR-21對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機(jī)制。方法:1.應(yīng)用LPS誘導(dǎo)角膜基質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng),并通過實(shí)時(shí)定量PCR（realtime PCR,qPCR）的方法檢測(cè)人角膜基質(zhì)細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中炎性細(xì)胞因子以及miR-21的表達(dá)變化。2.增強(qiáng)或抑制miR-21的表達(dá),并觀察人角膜基質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的變化。2.1)藉由脂質(zhì)體將hsa-miR-21agomir轉(zhuǎn)染細(xì)胞以過表達(dá)miR-21,檢測(cè)過表達(dá)miR-21對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響。通過qPCR檢測(cè)miRNA-21 mRNA的表達(dá),通過qPCR、Elisa檢測(cè)IL-6、IL-8在mRNA及蛋白分水平的表達(dá),并結(jié)合CCK8檢測(cè)及細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)miR-21對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖及細(xì)胞遷移的影響。2.2)轉(zhuǎn)染hsa-miR-21antagomir以抑制miR-21的表達(dá),檢測(cè)抑制miR-21表達(dá)對(duì)角膜基質(zhì)細(xì)胞在炎癥反應(yīng)的影響。通過qPCR檢測(cè)miRNA-21 mRNA的表達(dá),... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

1CCK8檢測(cè)不同濃度LPS細(xì)胞存活率

圖 2.1.2 正常對(duì)照組及 LPS 組 IL-6、IL-8 mRNA 相對(duì)表達(dá)量PS 刺激后 qPCR 檢測(cè) miRNA-21 的表達(dá) 1ug/mlLPS 刺激細(xì)胞 48h 后，qPCR 檢測(cè) miRNA-21 表達(dá)，如正常對(duì)照組作為基線, 采用 2-△△CT法計(jì)算 LPS 組相對(duì)于正-21 的表達(dá)量變化,與正常對(duì)照組相比，LPS 刺激細(xì)胞后 miRNA具有劑量依賴性（F=74.8 P＜0.001）。

3LPS刺激后miRNA-21的表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA: A matter of life or death[J]. Zhiguo Wang, Research Center, Montreal Heart Institute and Department of Medicine, University of Montreal, Montreal, PQ H1T 1C8, Canada.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(04)



本文編號(hào)：2952034