發(fā)布時間：2020-12-30 13:46

　　目的研究KCNQ1和NKCC1這兩種通道蛋白在C57BL/6J小鼠耳蝸側(cè)壁的年齡相關(guān)性表達,并分析這兩種通道蛋白與年齡相關(guān)性聽力下降（Age-related Hearing Loss, AHL）的關(guān)系及其在聽力中的作用。方法通過聽性腦干反應(yīng)（Auditory Brainstem Response, ABR）檢測C57BL/6J小鼠各年齡段（4、8、14、24、40周齡）的聽力變化。應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測方法確定KCNQ1和NKCC1蛋白在C57BL/6J小鼠耳蝸側(cè)壁中的表達定位,并研究各年齡段C57BL/6J小鼠耳蝸外側(cè)壁中兩種通道蛋白含量隨著鼠齡增加的表達變化。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法分別檢測KCNQ1和NKCC1 mRNA在不同鼠齡小鼠耳蝸中的表達水平。結(jié)果隨著C57BL/6J小鼠年齡的增加,其ABR反應(yīng)閾值逐漸升高,4周齡和8周齡C57BL/6J小鼠對Click和4kHz、8kHz刺激聲的ABR反應(yīng)閾值均無顯著性差異（P>0.05）,從14周齡后,C57BL/6J小鼠對三種刺激聲的ABR反應(yīng)閾逐漸增加,其數(shù)值與低齡組小鼠相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

示KCNQ1蛋白在C57BL/6J小鼠耳蝸中的表達及其隨著年齡的變化，綠色熒光代表KCNQ1

2. KCNQ1 和 NKCC1 蛋白在 C57BL/6J 小鼠耳蝸外側(cè)壁的定位及表達變化FITC 標記的二抗和 DAPI 雙重?zé)晒饷庖呓M織化學(xué)染色顯示，在 4 周齡 C57BL/6小鼠耳蝸外側(cè)壁，KCNQ1 蛋白主要表達于耳蝸血管紋邊緣細胞頂膜處，在切片上表現(xiàn)為一條明顯的綠色熒光帶。而 NKCC1 蛋白主要表達于耳蝸血管紋邊緣細胞底側(cè)膜、螺旋韌帶和螺旋緣下的纖維細胞，在毛細胞周圍也有少量表達。（見圖 2）

表示 NKCC1 蛋白在 C57BL/6J 小鼠耳蝸中的表達及其隨年齡的變化，綠色熒光性陽性染色，藍色熒光為非特異性的核染色。A1~A3 為陰性對照，B1~B3、C1~3 和 F1~F3 分別為 NKCC1 在 4、8、14、24 和 40 周齡 C57BL/6J 小鼠耳蝸的表NQ1 和 NKCC1 mRNA 在 C57BL/6J 小鼠耳蝸的表達水平RT-PCR 檢測 4 周、8 周、14 周、24 周、40 周齡時 C57BL/6J 小鼠耳蝸KCC1 mRNA 的表達水平。對各年齡組小鼠耳蝸提取的 RNA 進行逆 KCNQ1（127bp）、NKCC1（150bp）與 GAPDH（113bp）三種引物產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，然后在紫外燈下觀察。（分別見圖 5、6）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]兔角膜內(nèi)皮細胞Na+-K+-ATP酶活性檢測及其意義[J]. 劉蓉,張林,段惠萍.  中國誤診學(xué)雜志. 2009(08)
[2]耳蝸血管紋鉀鈉氯化合物協(xié)同轉(zhuǎn)運子對年齡相關(guān)性聽力下降的影響[J]. 褚漢啟,熊浩,崔永華,黃孝文,韓方,吳振恭,周良強,孔維佳.  中華老年醫(yī)學(xué)雜志. 2007 (03)



本文編號：2947745