目的通過對中國漢族一個先天性青光眼家系及9例散發(fā)的先天性青光眼病例CYP1B1及LTBP2基因突變篩查,研究并確定其致病性,為中國漢族人群先天性青光眼的分子遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法收集青島大學(xué)附屬醫(yī)院2007年2017年的1個先天性青光眼家系、9例散發(fā)病例及50位正常人,采集受試者靜脈血10ml,提取外周血全基因組DNA,聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增目的片段(CYP1B1基因編碼區(qū)及LTBP2基因的14個外顯子及鄰近內(nèi)含子)。瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,進(jìn)行直接測序。應(yīng)用Chromas和DNAman軟件篩查突變并與正常人對照,確定突變致病性。結(jié)果在先天性青光眼患者ZTC中發(fā)現(xiàn)了CYP1B1基因兩個錯義突變:c.988GT,c.989CT,p.A330F和c.1169GA,p.R390H。其中p.A330F在中國漢族人群中是首次報道,正常對照組未檢出。此外,發(fā)現(xiàn)該基因4種已報道的單核苷酸多態(tài)性(SNP):c.142CG,p.R48W;c.355GT,p.A119S;c.1347TC,p.D449D;c.1294CG,p.L432V。對LTBP2基因篩查發(fā)現(xiàn)家系患病父子及散發(fā)病例GYY內(nèi)含子序列點(diǎn)突變:g.74991741 AT(rs862032),位于Intron15-16,與疾病表型分離;在其他患者中檢查到另外3個內(nèi)含子突變:g.75022538TC(rs57176747);g.75019157AG(rs11622992)和g.74967541 AC,其中g(shù).74967541 AC無SNP編號,為首次報道,其位于編碼區(qū)后第46位核苷酸,屬于3'端UTR突變。在LTBP2基因編碼區(qū)鑒定出5個單核苷酸多態(tài)性(SNP),其中2個錯義突變:c.956CA,p.P319Q和c.4286GA,p.R1429Q,正常對照組亦檢出;3個同義突變:c.1287GA,p.L429L、c.2406TC,p.T802T和c.2502TC,p.T834T。其中p.L429L只在PCG患者中檢出,p.T802T和p.T834T在患者及正常對照組均存在�；颊吆蛯φ战M都存在的內(nèi)含子突變?yōu)?g.74992861TG和g.74991959 AG。結(jié)論1.p.A330F突變在我國PCG患者中首次發(fā)現(xiàn),其與p.R390H形成的復(fù)合雜合突變使CYP1B1的結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著變化,是導(dǎo)致嚴(yán)重青光眼表型的致病性突變。2.LTBP2基因點(diǎn)突變g.74991741 AT與該家系發(fā)病相關(guān),其與g.74967541 AC、g.75022538 TC和g.75019157 AG都參與先天性青光眼發(fā)病。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R775.4
【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1 研究對象
    2 患者臨床資料
    3 實(shí)驗(yàn)材料
    4 主要儀器及設(shè)備
    5 實(shí)驗(yàn)方法
        5.1 標(biāo)本采集
        5.2 配置溶液
        5.3 外周血DNA的提取
        5.4 PCR引物的設(shè)計與合成
        5.5 PCR反應(yīng)步驟
            5.5.1 PCR擴(kuò)增體系
            5.5.2 PCR循環(huán)條件
        5.6 瓊脂糖凝膠電泳
        5.7 PCR產(chǎn)物測序
結(jié)果
    1 患者的臨床特征
    2 分子遺傳學(xué)研究結(jié)果
        2.1 CYP1B1基因篩查結(jié)果
        2.2 LTBP2基因篩查結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李秀蘭;劉昊天;張丁丁;;原發(fā)性先天性青光眼的分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展[J];中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志;2016年02期

2 袁瑞;趙君;趙躍媛;馬旭;代巧云;王蓓;;中國原發(fā)性先天性青光眼患者CYP1B1基因突變的系統(tǒng)評價[J];循證醫(yī)學(xué);2015年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 白媛媛;轉(zhuǎn)化生長因子結(jié)合蛋白2做為心力衰竭標(biāo)志物的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

2 李茅;中國漢族人群原發(fā)性先天性青光眼CYP1B1基因突變研究[D];四川大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 陸歡;LTBP2在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];蘇州大學(xué);2012年

本文編號：2875427