目的:通過臨床高度近視流行病學(xué)調(diào)查,分析高度近視屈光度及眼參數(shù)的分布情況,對高度近視人群進(jìn)行基因檢測,探討高度近視的發(fā)病機(jī)制及易感基因在高度近視人群中的變異頻率;研究負(fù)透鏡誘導(dǎo)型近視豚鼠玻璃體腔注射(Amphiregulin AREG)抗體和正常豚鼠玻璃體腔注射AREG蛋白對豚鼠眼球生物學(xué)參數(shù)的影響,探討AREG在近視疾病中的作用及近視的發(fā)病機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)包括3部分,第1部分:高度近視的遺傳流行病臨床研究,在征得患者知情同意后,對2016年5月至2017年12月就診的200例近視患者進(jìn)行包括視力、屈光度、眼壓、眼軸、角膜曲率、眼底等眼科�？茩z查,根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn),篩選出高度近視患者170例,填寫關(guān)于家庭成員近視情況的調(diào)查問卷,抽取5-6ml血液進(jìn)行基因測序,觀察近視易感基因的突變頻率,進(jìn)行高度近視的相關(guān)因素分析。第2部分:探討玻璃體腔注射AREG抗體對負(fù)透鏡誘導(dǎo)型近視豚鼠眼球生物學(xué)參數(shù)的影響。選取60只2周齡健康三色短毛豚鼠,隨機(jī)分為5組,每組12只:正常對照組、近視組、低劑量組、中劑量組、高劑量組,除正常對照組,其余組豚鼠均右眼佩戴-10D透鏡2周,第三周開始近視組右眼注射linger液3ul,低劑量組、中劑量組、高劑量組豚鼠右眼分別玻璃體腔注射AREG抗體5ug、10ug、15ug,每周1次,連續(xù)注射3周,期間連續(xù)佩戴眼鏡,對側(cè)眼與正常對照組均不做任何處理。每周測量各組豚鼠的屈光度、眼軸長度,常規(guī)處死,取視網(wǎng)膜組織、實(shí)時(shí)熒光定量PCR測量豚鼠視網(wǎng)膜AREG mRNA的表達(dá)含量、免疫熒光染色法觀察AREG蛋白在視網(wǎng)膜的分布情況,PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)測量后極部鞏膜厚度。第3部分:探討正常豚鼠玻璃體腔注射AREG蛋白對眼球生物學(xué)參數(shù)的影響。選取選取48只2周齡健康三色短毛豚鼠,隨機(jī)分為4組,每組12只:正常組、低劑量組、中劑量組、高劑量組,第2周開始低劑量組、中劑量組、高劑量組豚鼠右眼分別玻璃體腔注射AREG蛋白50ng、100ng、200ng,左眼注射等量linger液,每周1次,連續(xù)注射4周,正常組不做任何處理。每周測量屈光度和眼軸長度,常規(guī)處死,取視網(wǎng)膜、實(shí)時(shí)熒光定量PCR測量豚鼠視網(wǎng)膜AREG mRNA的表達(dá)含量、免疫熒光染色法觀察AREG蛋白在視網(wǎng)膜的分布情況,PAS染色法觀察各組后極部鞏膜厚度。結(jié)果:1.本研究高度近視人群視力為(0.05±0.04),屈光度為(-8.02±2.23)D,眼軸長度為(26.65±1.31)mm;均表現(xiàn)角膜曲率增加(43.11±1.47)D,角膜變凸,前房加深(3.76±0.27)mm,眼壓未見明顯異常(15.88±2.34)mmHg。.2.在高度近視人群中主要以眼軸增長的軸性高度近視為主,具有后發(fā)性、散發(fā)性的特點(diǎn),隨著年齡的增長,屈光度持續(xù)下降和眼軸過度延長,近視進(jìn)行性加深,發(fā)生高度近視視網(wǎng)膜病變的幾率增大。3.AREG在高度近視人群中變異頻率增加,與屈光性高度近視人群相比,軸性高度近視患者的AREG基因變異頻率更高。AREG主要在中國和東亞地區(qū)變異頻率較高,在歐洲人群變異頻率低,高度近視基因變異具有遺傳性和種族特異性。4.與正常豚鼠比較,近視豚鼠的視網(wǎng)膜中AREG蛋白和mRNA表達(dá)增高。5.AREG廣泛分布于視網(wǎng)膜組織,在眼球從赤道部到后極部的部位均有分布,負(fù)透鏡誘導(dǎo)型近視豚鼠玻璃體腔注射AREG抗體,能夠抑制近視眼軸增長和屈光度下降,呈劑量依賴性;抑制視網(wǎng)膜AREG蛋白和mRNA的表達(dá),呈劑量依賴性;抑制后極部鞏膜變薄,與近視組比較,三個(gè)注射組后極部鞏膜厚度均增加,尤其是低劑量組和中劑量組(p0.05)。6.正常豚鼠玻璃體腔注射AREG蛋白能夠增加后極部視網(wǎng)膜AREG蛋白的表達(dá),AREG mRNA表達(dá)影響較小,豚鼠的眼球屈光度下降和眼軸增長程度較輕;病理切片PAS染色結(jié)果顯示豚鼠眼球后極部出現(xiàn)鞏膜變薄。結(jié)論:1.高度近視以眼軸增長的軸性高度近視為主,眼軸過度增長對視力危害大,易引起眼底改變和病變。2.高度近視人群中AREG基因變異頻率增加,軸性高度近視的變異頻率更高。3.負(fù)透鏡誘導(dǎo)型近視豚鼠玻璃體腔注射AREG抗體能夠抑制近視疾病的進(jìn)展,但正常豚鼠玻璃體腔注射AREG蛋白能夠在一定程度上誘導(dǎo)近視,我們認(rèn)為AREG對近視發(fā)生發(fā)展有著重要作用,但AREG在近視發(fā)病機(jī)制中的作用需要進(jìn)一步研究。
【學(xué)位單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R778.11
【部分圖文】：

圖 1 Western Blot 蛋白印記法和實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 法分別測量負(fù)透鏡誘導(dǎo)型近視豚鼠與正常豚鼠視網(wǎng)膜 AREG 蛋白（A）和 mRNA（B）表達(dá)2. 屈光度及眼軸長度2.1 入組前屈光度及眼軸長度入組前各組豚鼠的初始屈光度及眼軸長度進(jìn)行組間獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組豚鼠組內(nèi)左眼、與右眼進(jìn)行屈光度和眼軸長度進(jìn)行配對 t 檢驗(yàn)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（均為 P>0.05）；2.2 近視模型屈光度及眼軸長度透鏡誘導(dǎo) 2 周后，與正常對照組比較，各負(fù)透鏡誘導(dǎo)的近視豚鼠屈光度下降和眼軸延長差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，近視組屈光度和眼軸長度（t=4.168，p=0.004；t=-2.574，p=0.034）；低劑量組屈光度和眼軸長度（t=3.791，p=0.015；t=-6.765，p=0.000）；中劑量組屈光度和眼軸長度（t=4.495，p=0.005；t=-2.929，p=0.023）；高劑量組屈光度

玻璃體腔注射 AREG 抗體 3 次后，與近視組豚鼠雙眼屈光度和眼軸長度差值比較（右眼減左眼），低劑量組、中劑量組、高劑量組與近視組比較眼軸長度呈劑量依賴性縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.426，p=0.011；t=4.143，p=0.004；t=5.815，p=0.001），屈光度呈劑量依賴性上升，其中高劑量組屈光度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=-0.780，p=0.458；t=-2.004，p=0.083；t=-5.028，p=0.001）（見圖 2）。表 2 玻璃體腔注射 AREG 抗體 3 次后左右眼屈光度和眼軸長度差值（ x ± s）分組 屈光度( /D) 眼軸長度(ι/mm)正常對照組 -0.75±0.73 -0.03±0.02近視組 -3.70±1.07 0.25±0.06低劑量組 -3.20±0.96 0.14±0.04**中劑量組 -2.10±1.43 0.07±0.08**高劑量組 -0.55±0.91** -0.01±0.08**注：*表示與近視組屈光度和眼軸差值比較差異（P<0.05）；**表示與近視組屈光度和眼軸差值比較差異（P<0.01）

AREG蛋白在各組豚鼠眼球的分布
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2867153