目的幾丁糖是作用很廣的天然提取產(chǎn)物,臨床適應(yīng)癥主要為防治外科術(shù)后組織粘連,在眼科被用于抑制視網(wǎng)膜炎癥等研究。甲狀腺相關(guān)性眼病(GO)病理表現(xiàn)為眼眶炎癥和眶周軟組織大量重構(gòu),目前幾丁糖在甲狀腺相關(guān)性眼病中的作用,尚不清楚。本課題選取GO眼眶成纖維細(xì)胞為研究對(duì)象,從眼眶成纖維細(xì)胞炎癥因子及脂肪生成的角度探討幾丁糖在甲狀腺相關(guān)性眼病中的作用及機(jī)制。方法原代培養(yǎng)GO眼眶成纖維細(xì)胞。通過CCK-8(Cell Counting Kit-8)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡及細(xì)胞周期來評(píng)價(jià)不同濃度幾丁糖對(duì)眼眶成纖維細(xì)胞活性影響。通過IL-1β與幾丁糖共培養(yǎng)眼眶成纖維細(xì)胞,用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞上清液中interleukin-6(IL-6)和prostaglandin E-2(PGE-2)蛋白水平。通過實(shí)時(shí)定量PCR(real-time PCR)和Western-Blot檢測(cè)cyclooxygenase-2(COX-2)表達(dá)水平。Western-Blot檢測(cè)JNK信號(hào)通路磷酸化水平。在脂肪誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,對(duì)眼眶成纖維細(xì)胞進(jìn)行脂肪細(xì)胞分化誘導(dǎo),采用幾丁糖進(jìn)行干預(yù)處理。油紅染色觀察脂肪細(xì)胞生成情況,Western-Blot檢測(cè)FABP-4,adiponectin,C/EBPα和PPAR-γ等蛋白表達(dá)水平和AKT信號(hào)通路磷酸化水平。結(jié)果0.1mg/ml和0.01mg/ml幾丁糖對(duì)眼眶成纖維細(xì)胞活性無(wú)影響。IL-1β可誘導(dǎo)眼眶成纖維細(xì)胞IL-6和PGE-2蛋白生成增加。幾丁糖可明顯抑制IL-1β誘導(dǎo)的IL-6和PGE-2蛋白產(chǎn)生,降低COX-2mRNA和蛋白表達(dá)。JNK抑制劑可減少IL-6和PGE-2蛋白產(chǎn)生。幾丁糖可抑制JNK信號(hào)通路磷酸化。油紅染色表明幾丁糖可明顯抑制眼眶成纖維細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化,減少脂肪細(xì)胞生成,同時(shí)抑制FABP-4,adiponectin,C/EBPα和PPAR-γ等蛋白表達(dá)水平,降低AKT磷酸化水平。結(jié)論幾丁糖可明顯抑制眼眶成纖維細(xì)胞炎癥因子和脂肪生成,其機(jī)制可能分別與降低JNK和AKT磷酸化水平有關(guān)。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R581;R771.3
【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 甲狀腺相關(guān)性眼病眼眶成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)
    前言
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 結(jié)論
    4 討論
    參考文獻(xiàn)
    附圖
第二部分 幾丁糖對(duì)眼眶成纖維細(xì)胞活性影響
    前言
    1 材料和方法
    2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
    4 結(jié)論
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
    附圖
第三部分 幾丁糖抑制IL-1β誘導(dǎo)眼眶成纖維細(xì)胞炎癥因子的作用及機(jī)制研究
    前言
    1 材料和方法
    2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
    4 結(jié)論
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
    附圖
第四部分 幾丁糖抑制眼眶成纖維細(xì)胞脂肪生成的作用及機(jī)制研究
    前言
    1 材料和方法
    2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 結(jié)果
    4 結(jié)論
    5 討論
    參考文獻(xiàn)
    附圖
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文、參研項(xiàng)目、會(huì)議交流情況

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本文編號(hào)：2850231