目的研究miR-101表達(dá)上調(diào)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤增殖及侵襲能力的抑制并探討其作用機(jī)制。方法培養(yǎng)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞HXO-Rb44,微核糖核酸-101(micro Ribonucleic Acid-101,miR-101)模擬物及miR-101陰性對(duì)照物轉(zhuǎn)染HXO-Rb44細(xì)胞,并設(shè)置正常HXO-Rb44細(xì)胞為空白組,通過RT-PCR及western blot實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)miR-101模擬物組及miR-101陰性對(duì)照物組及視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞HXO-Rb44空白對(duì)照組細(xì)胞中miR-101及組蛋白-賴氨酸N-甲基轉(zhuǎn)移酶(Human Histone-lysine N-methyltransferase,EZH2)的表達(dá);通過MTT實(shí)驗(yàn)及Transwell實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組細(xì)胞的增殖及侵襲能力;最后通過熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)確定miR-101和EZH2的靶點(diǎn)關(guān)系。結(jié)果miR-101表達(dá)組中miR-101相對(duì)表達(dá)量明顯高于空白組和陰性對(duì)照組(P0.05)。EZH2在空白組和陰性對(duì)照組相對(duì)表達(dá)水平明顯高于miR-101組(P0.05);miR-101表達(dá)組中EZH2的OD_(490)值明顯低于空白組和陰性對(duì)照組(P0.05);空白組和陰性對(duì)照組中EZH2穿透膜數(shù)量顯著高于miR-101組(P0.05);EZH2是miR-101的靶點(diǎn)。結(jié)論miR-101的表達(dá)上調(diào)抑制HXO-Rb44細(xì)胞的增殖及侵襲能力,其作用機(jī)制同EZH2有關(guān)。
【學(xué)位單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.7
【部分圖文】：

圖 1 轉(zhuǎn)染后在 HXO-Rb44 細(xì)胞中 miR-101 表達(dá)，通過 miR-101 上調(diào)抑制EZH2 表達(dá)圖注：（A）RT-PCR 檢測(cè) miR-101 在轉(zhuǎn)染后 HXO-Rb44 細(xì)胞中的表達(dá)；（B）RT-PCR檢測(cè) EZH2 mRNA 在轉(zhuǎn)染后 HXO-Rb44 細(xì)胞中的表達(dá)；（C）Western blot 檢測(cè) EZH2 蛋白在轉(zhuǎn)染后 HXO-Rb44 細(xì)胞中的表達(dá)。注：*與空白組和陰性對(duì)照組相比，P < 0.05。（二）miR-101 表達(dá)上調(diào)抑制 HXO-Rb44 細(xì)胞的增殖及侵襲能力空白組和陰性對(duì)照組細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的 OD490值差異并不大，且 24 h 時(shí)，三組細(xì)胞之間的OD490值差異也不明顯。但48 h時(shí)，miR-101表達(dá)組細(xì)胞的OD490值明顯低于空白組及陰性對(duì)照組，且 72 h 及 96 h 時(shí)，miR-101 表達(dá)組細(xì)胞的OD490值也顯著低于其他兩組（P < 0.01）（圖 2A）。此外，培養(yǎng) 48 h 時(shí)，miR-101 表達(dá)組穿過膜的細(xì)胞數(shù)量（51±6）顯著低于空白組（97±11）及陰性對(duì)照組（92±8）（圖 2B，C）。

14圖 2 miR-101 上調(diào)后抑制 HXO-Rb44 細(xì)胞的增殖及侵襲能力圖注：（A）MTT 法檢測(cè)上調(diào) miR-101 表達(dá)后對(duì) HXO-Rb44 細(xì)胞增殖能力的影響；（B，Transwell 檢測(cè)上調(diào) miR-101 表達(dá)后對(duì) HXO-Rb44 細(xì)胞侵襲能力的影響。注：*與空白和陰性對(duì)照組相比；#與空白組和陰性對(duì)照組相比。（三）EZH2 是 miR-101 的靶向遺傳物質(zhì)

Target Scan 在線預(yù)測(cè)結(jié)果證明 EZH2 mRNA 與 miR-101 的結(jié)合靶點(diǎn)為3'-UTR 區(qū)（圖 3A）。熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明，MT+mimics 組與 MT+NC組熒光素酶活性強(qiáng)度無(wú)明顯影響；但 WT+mimics 組熒光素酶活性強(qiáng)度比WT+NC 組降低約 52.1%，區(qū)別有統(tǒng)計(jì)學(xué)明顯性(P < 0.01)(圖 3B)。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2840097