鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)主要是以我國(guó)南方地區(qū)為區(qū)域特性的鼻咽粘膜惡性腫瘤,鼻咽癌患者早期診斷困難,易發(fā)生轉(zhuǎn)移,確診時(shí)已有近70%左右的患者發(fā)生轉(zhuǎn)移,鼻咽癌易轉(zhuǎn)移及侵襲性強(qiáng)是治療失敗的主要原因。所以闡明鼻咽癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,將為鼻咽癌的治療開(kāi)啟新的篇章。STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信號(hào)通路活化是鼻咽癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵分子通路,其持續(xù)活化促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的增殖及存活�；罨腟TAT3形成同源二聚體,轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核后發(fā)揮其促癌轉(zhuǎn)錄因子的功能,傳遞細(xì)胞增殖和侵襲的信號(hào)啟動(dòng)下游效應(yīng)基因的表達(dá),包括G1/S-特異性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2)、髓樣細(xì)胞白血病蛋白1(Mcl-1)等因子,這些因子促進(jìn)細(xì)胞增殖、存活、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。同時(shí),STAT3也受一些內(nèi)源性抑制因子的調(diào)控,SOCS1是STAT3的內(nèi)源性抑制因子,使JAK激酶的活性受到抑制,進(jìn)一步使STAT3信號(hào)通路的活化受到抑制。mi RNA是基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)的重要一員,通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控靶基因的表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)鼻咽癌細(xì)胞與組織中mi R-19b的表達(dá)上調(diào)。SOCS1為mi R-19b靶基因之一,故推測(cè)mi R-19b抑制物可能解除mi R-19b對(duì)SOCS1的靶向抑制,從而抑制STAT3信號(hào)通路活化,進(jìn)而抑制鼻咽癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。目的:明確mi R-19b抑制物解除mi R-19b對(duì)SOCS1的靶向抑制,從而抑制STAT3活化,進(jìn)而抑制鼻咽癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。方法:1.CCK-8檢測(cè)mi R-19b抑制物對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞增殖的影響;2.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)mi R-19b抑制物對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞凋亡的影響;3.Tanswell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)mi R-19b抑制物對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞遷移的影響;4.WB檢測(cè)mi R-19b抑制物對(duì)鼻咽癌C666-1細(xì)胞中STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1.mi R-19b抑制物抑制鼻咽癌細(xì)胞C666-1的增殖。2.mi R-19b抑制物促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞C666-1的凋亡。3.mi R-19b抑制物抑制C666-1細(xì)胞的遷移。4.mi R-19b抑制物干預(yù)鼻咽癌細(xì)胞C666-1細(xì)胞后,促進(jìn)了SOCS1的表達(dá),抑制了STAT3的磷酸化,從而抑制鼻咽癌相關(guān)STAT3信號(hào)通路的活化,同時(shí)該通路的下游效應(yīng)因子Cyclin D1、Mcl-1和Bcl-2的表達(dá)下調(diào)。結(jié)論:mi R-19b抑制物可能靶向STAT3信號(hào)通路抑制鼻咽細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為,并為鼻咽癌的治療提供新的分子靶標(biāo)。
【學(xué)位單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R739.63
【部分圖文】：

28 1 不同濃度的 miR-19b 抑制物復(fù)合物的轉(zhuǎn)染效率. 0 μM 轉(zhuǎn)染效率為零，15轉(zhuǎn)染效率較高, 且無(wú)明顯差異Different rate of miRNA-19b inhibitor in transfected efficiency. 0 μM transfectedro, 15 μM and 40 μM transfected efficiency were high, and there was no signifidifference between 15 μM and 40 μM

2.1.2 miR-19b 抑制物成功地增加了 SOCS1 蛋白的表達(dá)采用免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè) 0 μM、15 μM、40 μM 三種不同濃度的 miR-19b抑制物干預(yù)鼻咽癌 C666-1 細(xì)胞后的 SOCS1 蛋白因子表達(dá)水平。WB 檢測(cè)結(jié)果顯示，15 μM 與 40 μM 比 0 μM 的 SOCS1 蛋白因子表達(dá)水平顯著上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，圖 2A），表達(dá)量的統(tǒng)計(jì)柱圖如圖 2B。40 μM和 15 μM miR-19b 抑制物濃度的轉(zhuǎn)染效率較高，15 μM 與 40 μM 的 miR-19b抑制物濃度轉(zhuǎn)染效率無(wú)明顯差異，則之后均使用 15 μM miR-19b 抑制物濃度對(duì) C666-1 細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

抑制物抑制 C666-1 細(xì)胞增殖. miR-19b 抑制物和對(duì)照 miRNA 轉(zhuǎn)染 24, 48 小時(shí)后, CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞增殖的改變 (*P＜0.05，**P＜0.019b inhibitor inhibit proliferation of C666-1 cells. After miRCURY LNAtors or negative control) transfected into C666-1 cells for 6, 12, 24 and were used to evaluate proliferation of cells (*P＜0.05，**P＜0.01)表 2 C666-1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 miR-19b 抑制物后細(xì)胞 OD 值 2 The absorbance value of C666-1 cells after miR-19b inhibitor trans N OD 值 P 值ti-miR-con 4 0.77±0.01 0.046ti-miR-19b 4 0.56±0.03ti-miR-con 4 1.20±0.07 0.002
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2838773