背景和目的變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis,AR)又稱過敏性鼻炎(hypersensitive rhinitis),是鼻科常見病之一,是由抗原提呈細(xì)胞引起的過敏原攝取,由IgE介導(dǎo)的,T細(xì)胞向Th2的極化所引起的I型變態(tài)反應(yīng)性疾病,并與變應(yīng)性哮喘具有密切聯(lián)系。近年來,AR在大多數(shù)國家和地區(qū)發(fā)病率顯著上升,據(jù)統(tǒng)計全球平均發(fā)病率為10%~40%,我國平均發(fā)病率為11%,,疾病負(fù)擔(dān)日益加重,已成為全球性的健康問題。IgE具有2種不同的受體,即高親和力受體FcεRI和低親和力受體CD23(FcεRII)。CD23可在B細(xì)胞、單核細(xì)胞、T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、血小板等細(xì)胞表面表達(dá),主要有細(xì)胞膜表面和可溶狀態(tài)兩種存在形式。越來越多的證據(jù)表明,CD23在通過IgE促進(jìn)的抗原呈遞在控制變應(yīng)原特異性T細(xì)胞的活化中起重要作用,最新研究發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞上的CD23的表面密度決定了通過IgE促進(jìn)的變應(yīng)原呈遞,進(jìn)而導(dǎo)致過敏原特異性T細(xì)胞的激活。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞(Breg cells,Bregs)是能夠產(chǎn)生IL-10并發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用的B細(xì)胞群。近年來發(fā)現(xiàn)了Bregs的其它免疫學(xué)功能,包括抗原提呈、分泌多種細(xì)胞因子等。在實驗性免疫性腦脊髓膜炎、膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎、慢性結(jié)腸炎以及多發(fā)性硬化等疾病的動物模型中都已證實Bregs具有負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用。在變應(yīng)性疾病中,Bregs可以通過分泌IL-10、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)等細(xì)胞因子的方式促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg cells,Tregs)的分化或是直接抑制免疫性T細(xì)胞的增殖。T型輔助性細(xì)胞分為1型(Th1)和2型(Th2),是適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的主要反應(yīng),其分泌的細(xì)胞因子、效應(yīng)細(xì)胞、免疫蛋白不同。在Th1為主反應(yīng)的期間,T型輔助細(xì)胞主要分泌IL-2、IFN-γ;在Th2為主反應(yīng)的期間,T型輔助細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5和IL-13;肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞為主要的效應(yīng)細(xì)胞;并能產(chǎn)生IgE。而變應(yīng)性鼻炎即為Th2反應(yīng)為主的變態(tài)反應(yīng)。本研究旨在闡明B細(xì)胞上的CD23的表達(dá),與調(diào)節(jié)性B細(xì)胞分泌IL-10水平以及后續(xù)T細(xì)胞的活化在變應(yīng)性鼻炎發(fā)生發(fā)展中的作用。實驗方法第一階段動物試驗階段,取48只SPF級雌性的SD大鼠,采用隨機的原則分為空白對照組(A組)、變應(yīng)性鼻炎組(B組)、鼻腔滴入組(C1組),皮下注射組(C2組),每組12只。第1、5、14、21天,正常對照組采用氫氧化鋁佐劑腹腔注射作為陰性對照,變應(yīng)性鼻炎組、抗體干預(yù)組(C1和C2)用氫氧化鋁聯(lián)合卵清蛋白腹腔注射進(jìn)行基礎(chǔ)及強化致敏后,第22-35天,空白對照組用生理鹽水滴鼻作為陰性對照,變應(yīng)性鼻炎組、抗體干預(yù)組均采用10%的卵清蛋白生理鹽水溶液滴鼻,1次/天;抗體干預(yù)組在卵清蛋白生理鹽水溶液滴鼻激發(fā)前30分鐘,鼻腔滴入組給予抗CD23抗體滴鼻處理,1次/天;皮下注射組給予抗CD23抗體大鼠右腿股部皮下注射處理,1次/天。末次激發(fā)完成后,觀察記錄各組大鼠在規(guī)定時間內(nèi)(30min)的鼻部癥狀,記錄完成后對空白對照組給予生理鹽水加1%的伊文思藍(lán)(Evens藍(lán))混合液0.1ml背部皮內(nèi)注射作為陰性對照,變應(yīng)性鼻炎組、抗體干預(yù)組,給予含有1mg卵清蛋白加1%的伊文思藍(lán)(Evens藍(lán))混合液0.1ml皮內(nèi)注射,記錄局部皮膚硬結(jié)及染料擴(kuò)散情況,水合氯醛麻醉后進(jìn)行腹主動脈取血,最后用頸椎脫臼法處死大鼠。HE染色觀察鼻黏膜組織學(xué)變化及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤情況,免疫熒光檢測CD23、CD19、IL-10在四組大鼠鼻腔黏膜中的表達(dá)量。酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測四組小鼠血清中總IgE、OVA-IgE、IL-10、IL-4、IFN-γ。流式加BD QuantiBRITE PE珠檢測血液中CD19~+CD23~+、CD19~+CD5~+CD1d~+B細(xì)胞百分率及B細(xì)胞表面CD23的表面密度及CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分率。第二階段臨床試驗階段,搜集我院鼻科住院患者40例,其中單純鼻中隔偏曲患者20例作為對照組(甲組),過敏性鼻炎患者20例作為實驗組(乙組),均依據(jù)2015年變應(yīng)性鼻炎診斷和治療指南(2015年,天津)確診或排除診斷,取其鼻中隔粘膜及靜脈血。HE染色觀察鼻粘膜組織學(xué)變化及嗜酸性粒細(xì)胞浸潤情況,免疫熒光檢測CD23、CD19、IL-10在兩組鼻粘膜中的表達(dá)量。酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測兩組血清中總IgE、IL-10、IL-4、IFN-γ水平。流式聯(lián)合BD QuantiBRITE PE珠檢測血液中B細(xì)胞膜表面CD19~+CD23~+、CD19~+CD5~+CD1d~+B細(xì)胞百分率及B細(xì)胞上CD23的表面密度及CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分率。結(jié)果與空白對照組大鼠(A組)相比,變應(yīng)性鼻炎組(B組)的噴嚏、撓鼻次數(shù)明顯增加;皮下硬結(jié)明顯,染料擴(kuò)散;鼻粘膜HE染色出現(xiàn)大量的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤,動靜脈擴(kuò)張、基底膜破壞明顯;免疫熒光發(fā)現(xiàn)CD23表達(dá)增強,CD19、IL-10表達(dá)減弱;酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測顯示總IgE、OVA-IgE、IL-4增高,IL-10、IFN-γ降低;CD19~+CD5~+CD1d~+B細(xì)胞百分率降低,CD19~+CD23~+B細(xì)胞百分率增高,B細(xì)胞表面CD23分布密度增高,CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分率顯著增高。與變應(yīng)性鼻炎組大鼠(B組)相比,抗體干預(yù)組(C組)的噴嚏、撓鼻次數(shù)減少;皮下硬結(jié)稍小,染料擴(kuò)散;鼻粘膜HE染色仍有嗜酸性粒細(xì)胞浸潤,但有所減少,動靜脈擴(kuò)張程度及基底膜破壞程度減弱;免疫熒光發(fā)現(xiàn)CD23表達(dá)有所降低,CD19、IL-10表達(dá)稍增高;酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測顯示總IgE、OVA-IgE、IL-4降低,IL-10、IFN-γ稍增高;CD19~+CD5~+CD1d~+B細(xì)胞百分率有所增高,CD19~+CD23~+B細(xì)胞百分率降低,CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分率降低。鼻腔滴入組(C1組)與皮下注射組(C2組)相比,鼻腔滴入組局部癥狀好轉(zhuǎn)明顯,皮下注射組血清學(xué)指標(biāo)好轉(zhuǎn)明顯。與對照組患者(甲組)相比,變應(yīng)性鼻炎患者(乙組)鼻粘膜HE染色出現(xiàn)大量的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤,動靜脈擴(kuò)張、基底膜破壞明顯;免疫熒光發(fā)現(xiàn)CD23表達(dá)增強,CD19、IL-10表達(dá)減弱;酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA檢測顯示總IgE、特異性IgE、IL-4增高,IL-10、IFN-γ降低;CD19~+CD5~+CD1d~+B細(xì)胞百分率降低,CD19~+CD23~+B細(xì)胞百分率增高,B細(xì)胞表面CD23分布密度增高,CD3~+CD4~+T細(xì)胞百分率增高。結(jié)論B細(xì)胞上的CD23表面密度與血清中IgE水平、IL-4呈正相關(guān),與IL-10、IFN-γ呈負(fù)相關(guān);可能通過依賴Bregs分泌IL-10介導(dǎo)的T細(xì)胞活化參與變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生發(fā)展;抗CD23抗體應(yīng)用可調(diào)控變應(yīng)鼻炎的癥狀和體征,皮下應(yīng)用及鼻腔滴入局部癥狀改善情況未見明顯差異,鼻腔滴入可作為抗CD23抗體應(yīng)用的首選方法,抗CD23有望成為控制和治療變應(yīng)性鼻炎的新方法�？笴D23抗體在臨床的應(yīng)用具備可能性。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R765.21
【部分圖文】：

41.3 變應(yīng)性鼻炎及抗體干預(yù)的大鼠模型的制備圖 1：變應(yīng)性鼻炎大鼠模型造模模式圖1)空白對照組（A 組）：本組大鼠于第 1、5、14、21 天給予大鼠氫氧化鋁(40mg/kg)生理鹽水溶液行腹腔注射，第 22-35 天以生理鹽水雙側(cè)鼻腔滴鼻激發(fā)，50μl/側(cè)，連續(xù) 14天。在第 36天給予生理鹽水和 1%的 Evens 藍(lán)混合液 0.1ml背部皮內(nèi)注射作為陰性對照。2)變應(yīng)性鼻炎組(B 組)：本組大鼠于第 1、5、14、21 天給予大鼠致敏原 OVA（40μg/kg）加入氫氧化鋁佐劑(40mg/kg)溶于生理鹽水溶液中進(jìn)行 4 次腹腔注射進(jìn)行基礎(chǔ)致敏及強化致敏，隨后即第 22-35 天，用 OVA（25mg/ml）進(jìn)行鼻腔局部激發(fā)，50ul/側(cè)，連續(xù) 14 天。在第 36 天給予含有 1mgOVA 和 1%的 Evens 藍(lán)混合液 0.1ml 背部皮內(nèi)注射。3)鼻腔滴入組（C1 組）：本組大鼠于第 1、5、14、21 天給予大鼠致敏原OVA（40μg/kg）加入佐劑氫氧化鋁(40mg/kg)溶于生理鹽水溶液進(jìn)行 4 次腹腔注射的基礎(chǔ)致敏及強化致敏

結(jié) 果動物試驗結(jié)果1 變應(yīng)性大鼠模型行為學(xué)觀察評分空白對照組（A 組）大鼠幾乎不出現(xiàn)鼻癢（2.67±1.231）、噴嚏（0.50±0.798）、流涕（0.08±0.289）等癥狀；變應(yīng)性鼻炎組大鼠（B 組）出現(xiàn)明顯的鼻癢（29.50±4.758）、噴嚏（71.58±4.542）及流涕（2.42±0.515）；鼻腔滴入組大鼠（C1）鼻癢（15.25±3.571）、噴嚏（44.25±5.910）、流涕（1.17±0.718），皮下注射組大鼠（C2）鼻癢（14.82±3.401）、噴嚏 C2（44.18±6.194）、流涕（1.09±0.701），抗體干預(yù)組癥狀較變應(yīng)性鼻炎組明顯好轉(zhuǎn),鼻腔滴入組與皮下注射組無明顯差異。

柱狀圖代表各組均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差，各組大鼠背部腫塊大小(mm)， *表示與正常對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義， 表示與變應(yīng)性鼻炎組比較具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），C1、C2 組未見明差異。3 大鼠鼻腔組織切片 HE 染色空白對照組大鼠（A 組）鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目（1.58±1.165）,基底膜完整,未見明顯血管擴(kuò)張；變應(yīng)性鼻炎大鼠（B 組）鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目（21.17±1.946）,基底膜破壞,血管擴(kuò)張明顯；鼻腔滴入組（C1 組）鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目（10.75±3.079）,基底膜破壞,血管擴(kuò)張；皮下注射組（C2 組）鼻粘膜嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目（13.17±1.267）,基底膜破壞,血管擴(kuò)張。

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2 楊祁;朱春暉;吳昆e

本文編號：2811314