【摘要】：第一部分OCA2基因rs74653330位點(diǎn)突變的黑色素細(xì)胞模型構(gòu)建人類在進(jìn)化過(guò)程中,皮膚顏色的變化是最典型的適應(yīng)性表型特征,生活在不同環(huán)境和氣候條件下的人群之間的膚色多樣性非常高。通過(guò)比較基因組學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)歐洲人群和亞洲人群祖先的膚色變淺是獨(dú)立發(fā)生的進(jìn)化事件,且兩個(gè)人群中受到正向選擇的膚色相關(guān)基因有顯著差異。目前,絕大多數(shù)色素相關(guān)表型的遺傳研究都在歐洲人群中進(jìn)行,但在不同人群中,色素相關(guān)表型差異的原因和機(jī)制都可能不同。本實(shí)驗(yàn)室前期已利用在泰州漢族隊(duì)列群體(3000例)中產(chǎn)生的全基因組芯片數(shù)據(jù),對(duì)膚色、發(fā)色、眼色等表型進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析,發(fā)現(xiàn)OCA2基因上的rs74653330位點(diǎn)的A突變與膚色變淺顯著相關(guān)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證這一突變位點(diǎn)對(duì)色素相關(guān)表型的影響,本實(shí)驗(yàn)采用CRISPR-Cas9的方法構(gòu)建黑色素細(xì)胞模型,以用于后期功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了帶有g(shù) RNA序列的重組p X459質(zhì)粒,初步確定了g RNA產(chǎn)生的基因編輯效率。并在A375黑色素細(xì)胞系上確定了轉(zhuǎn)染條件,由于A375細(xì)胞存在我們需要編輯位點(diǎn)的三體情況,后改用A2058黑色素細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)過(guò)程中從不同細(xì)胞庫(kù)購(gòu)買的A2058細(xì)胞都存在支原體污染,本實(shí)驗(yàn)沒(méi)能成功拿到陽(yáng)性細(xì)胞單克隆,但該實(shí)驗(yàn)構(gòu)建了OCA2基因上的rs74653330 SNP位點(diǎn)的定向突變黑色素細(xì)胞模型的實(shí)驗(yàn)體系,對(duì)以無(wú)污染細(xì)胞進(jìn)行共轉(zhuǎn)染、分選單克隆、篩選陽(yáng)性細(xì)胞具有較大的指導(dǎo)意義。第二部分先天性眼球震顫相關(guān)SNP位點(diǎn)的研究眼球震顫是一種以眼球重復(fù)、有節(jié)律、不自主運(yùn)動(dòng)為特征的眼部疾病。由于持續(xù)的眼球運(yùn)動(dòng),視覺(jué)功能顯著降低,但視力損害的程度各不相同。該疾病可繼發(fā)于其他視覺(jué)或神經(jīng)疾病,或可作為先天性眼球震顫(CN)的獨(dú)立遺傳性狀出現(xiàn)。先天性眼球震顫通常在出生時(shí)或在生命的頭幾個(gè)月內(nèi)出現(xiàn),估計(jì)年發(fā)病率為1/20,000。到目前為止,FERM結(jié)構(gòu)域7基因(FRMD7)和G蛋白偶聯(lián)受體143基因(GPR143)被鑒定為CN的致病基因。我們對(duì)一個(gè)6代CN家系中的4個(gè)個(gè)體(3個(gè)男性患者和1個(gè)女性攜帶者)進(jìn)行全外顯子掃描,發(fā)現(xiàn)了X染色體上5個(gè)新的可能與患病表型相關(guān)的SNP位點(diǎn),它們分別是rs146443503、rs141478957、rs3810704、rs2233695以及rs2205912,這是之前的研究從未報(bào)道過(guò)的。為了驗(yàn)證這5個(gè)SNP位點(diǎn)的功能相關(guān)性,在這個(gè)CN家系中進(jìn)行相關(guān)SNP位點(diǎn)的重測(cè)序。并對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行家譜性分析,以確定在該家系中CN的遺傳方式以及解釋SNP位點(diǎn)基因型與CN表型的關(guān)系。最后發(fā)現(xiàn)該CN家系中只有男性患病,女性只有攜帶者,且反映出明顯的X連鎖隱性遺傳規(guī)律。通過(guò)測(cè)序結(jié)果分析遺傳信息在家系中的傳遞,大致上可以說(shuō)明患病表型與SNP位點(diǎn)突變的相關(guān)性。以前的致病基因研究通常限于FRMD7和GPR143,該研究發(fā)現(xiàn)無(wú)疑豐富了CN患病分子機(jī)制的解釋,為可能的遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷以及基因替代療法提供了一定的參考。
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R777.46

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本文編號(hào)：2796205