【摘要】：背景:鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是一種主要發(fā)生在東南亞、中國南部的一種惡性程度非常高的腫瘤。鼻咽癌的發(fā)生可能與遺傳(基因易感性)、EB病毒感染、環(huán)境因素、飲食習慣以及各種促癌因素有關(guān)。大部分病人被診斷時都產(chǎn)生了局部浸潤或者遠處早期轉(zhuǎn)移等晚期表現(xiàn),所以鼻咽癌患者的生存率不高。因此,研究與鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展、預后的有關(guān)分子機制是非常重要的,這可以促進鼻咽癌的診斷、預測以及采取準確的治療手段。細胞周期調(diào)節(jié)蛋白E1(Cyclin E1)表達于細胞周期的G1-S期,它通過結(jié)合以及激活CDK2(cyclin-dependent kinase 2)來調(diào)節(jié)哺乳動物細胞的分裂。CCNE1-CDK2這一復合物的磷酸化在誘導DNA復制的同步性、中心體的復制和調(diào)控、染色體的重構(gòu)以及組蛋白的合成中起了非常重要的作用。CCNE1的高表達與多種惡性腫瘤比如乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、子宮內(nèi)膜癌及結(jié)腸癌患者的不良臨床預后緊密相關(guān)。其在不同腫瘤中發(fā)揮不同的作用,如在乳腺癌中CCNE1可導致耐藥的發(fā)生,在胃癌中促進EMT(Epithelial-Mesenchymal Transition)的發(fā)生,在食管癌中促進細胞增殖,而CCNE1在鼻咽癌中的作用有待我們?nèi)パ芯俊Ｄ康?1.分析CCNE1在鼻咽癌組織中的表達及對鼻咽癌患者臨床參數(shù)的影響;2.體內(nèi)外功能實驗研究CCNE1在鼻咽癌中的作用;3.探究CCNE1在鼻咽癌中發(fā)揮作用的機制。方法:1.分析CCNE1在鼻咽癌組織中的表達及及對鼻咽癌患者臨床參數(shù)的影響(1)免疫組化觀察CCNE1在鼻咽癌組織表達定位和表達量差異;(2)分析CCNE1對預后的影響;(2)分析CCNE1對鼻咽癌患者其它臨床參數(shù)的影響。2.體內(nèi)外功能實驗研究CCNE1在鼻咽癌中的作用(1)在HONE1和SUNE1中構(gòu)建穩(wěn)定敲除CCNE1的細胞株;(2)體外實驗驗證CCNE1對細胞增殖、侵襲和遷移的影響;(3)裸鼠皮下成瘤;(4)構(gòu)建穩(wěn)定過表達CCNE1的細胞株進行功能回復實驗。3.探究CCNE1在鼻咽癌中發(fā)揮作用的機制:Western Blot檢測增殖和EMT相關(guān)蛋白表達改變并找到相關(guān)通路。結(jié)果:1.在鼻咽癌組織中,CCNE1呈核高表達且CCNE1核高表達的患者預后最差;2.CCNE1在體內(nèi)外均促進鼻咽癌細胞增殖、侵襲遷移;3.CCNE1激活PI3K/AKT通路及下游周期、EMT相關(guān)因子。結(jié)論:CCNE1在鼻咽癌中發(fā)揮一個潛在的促癌基因的作用,它通過使PI3K/AKT通路激活,從而促進鼻咽癌細胞的增殖、侵襲和遷移。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.63
【圖文】：

３５例非癌鼻咽黏膜組織中，８例ＣＣＮＥ１呈核高表達，２７例ＣＣＮＥ１呈逡逑核低表達。經(jīng)統(tǒng)計，與非癌鼻咽黏膜組織相比，ＣＣＮＥ１核表達在鼻咽癌組織逡逑中相對高表達，差異具有統(tǒng)計學意義（Ｐ＝0．00６）（圖１－１，表１－１）。逡逑１５逡逑

為選擇干擾效果最佳的ｓ＿Ａ序列，本研究設計了邋３組干擾序列。通過慢逡逑病毒分別轉(zhuǎn)染鼻咽癌細胞后通過實時熒光定量ＰＣＲ方法對其干擾效果進行了逡逑檢測。ｓｈ－ＣＣＮＥｌ－１轉(zhuǎn)染組ＣＣＮＥｌｍＲＮＡ下調(diào)最為明顯，（圖２－１，表２－１）。逡逑因此選用敲低效果最佳的ｓｈ－ＣＣＮＥｌ－１建立ＣＣＮＥ１穩(wěn)定沉默細胞株，并進行后逡逑續(xù)生物學行為等檢測。逡逑１．５＂］邐ＨＯＮＥＩ邐１５－｜邐ＳＵＮＥ１逡逑Ｃ邐Ｇ邐Ｔ逡逑Ｕ－邋ｍ邋１．0－邐ｔｕ邋汔邋１．０．逡逑Ｉ邐！邋Ｉ邐１邋＆邋Ｉ逡逑ＩＩ邐°－５－邋Ｉ邋＊邋４邋Ｉ邋＾邋°－５－邋１邋＊邋±邋＊逡逑０．０邐■邐１邐邐１邐邋０．０邐邐１邐邐１邐逡逑，Ｗ邋／邐／／逡逑次邐岑邐岑邐＾邐＾邐旁逡逑圖２－１邋Ｑ－ＰＣＲ檢測鼻咽癌癌細胞中ＣＣＮＥ１的干擾情況逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＣＣＮＥ１邋ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ邋ｉｎＮＰＣ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅｓ邋ｂｙ邋Ｑ－ＰＣＲ．逡逑４１逡逑

圖２－２邋Ｑ－ＰＣＲ檢測鼻咽癌細胞中ＣＣＮＥ１的干擾情況逡逑Ｆｉｇ．２－２邋Ａｎａｌｙｓｉｓ邋ｏｆ邋ＣＣＮＥ１邋ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ邋ｉｎ邋ＮＰＣ邋ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅｓ邋ｂｙ邋Ｑ－ＰＣＲ．逡逑

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2794744