【摘要】：視神經(jīng)在眼眶內(nèi)活動程度受限，以致在頭部受到外力沖擊時極易造成直接和間接的原發(fā)性損傷，以及其后產(chǎn)生的包括血管痙攣或栓塞導致視神經(jīng)的缺血、變性或壞死，以及免疫與炎性反應等繼發(fā)性損害。髓樣分化因子88（MyD88）是多種固有免疫受體在細胞內(nèi)的銜接蛋白，其依賴途徑參與脊髓損傷與修復，在腦損傷后的炎癥反應中起關鍵作用。視神經(jīng)同屬中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此我們認為MyD88可能是調(diào)控視神經(jīng)創(chuàng)傷后炎癥反應的靶點，對視神經(jīng)損傷的修復發(fā)揮重要作用。 本研究分以下四個部分：（1）成年SD大鼠視神經(jīng)夾傷/離斷模型的建立與改良；（2）阻斷MyD88通路對成年大鼠視神經(jīng)離斷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞（RGCs）存活的影響；（3）阻斷MyD88通路對成年大鼠視神經(jīng)夾傷后視神經(jīng)干中TLR4、NF-κB表達的影響；（4）阻斷MyD88通路對成年大鼠視神經(jīng)夾傷后視神經(jīng)干中GAP-43表達的影響。 第一部分：成年大鼠視神經(jīng)夾傷與離斷模型的建立和改良 成年大鼠視神經(jīng)夾傷/離斷模型已趨成熟，在相關領域基礎研究中應用廣泛。然而，既往建模手術方法繁瑣，難度較大，手術耗時較長，加之目前常用的單一麻醉方法容易造成大鼠呼吸抑制而死亡。本文作者在建立視神經(jīng)損傷動物模型時，在開創(chuàng)部位、操作方法和麻醉方法等方面進行了改良。 結論：以戊巴比妥和陸眠寧聯(lián)合麻醉取代單一戊巴比妥鈉麻醉，并使用可產(chǎn)生恒定夾傷力的特制動脈瘤夾，能夠縮短手術時間，并降低手術難度和實驗動物的死亡率。 第二部分：阻斷MyD88通路對視神經(jīng)離斷后RGCs存活的影響 方法：成年大鼠左側視神經(jīng)離斷后隨機分為三組：（1）MIP實驗組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射MyD88抑制肽；（2）CP對照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射對照肽；（3）PBS對照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射PBS緩沖液。術后14d處死各組大鼠，視網(wǎng)膜取材，4%多聚甲醛后固定后視網(wǎng)膜全鋪片，計數(shù)熒光金逆行標記的RGCs并計算出存活RGCs平均密度。 結果：MIP實驗組存活節(jié)細胞平均密度（1206±134/mm2）較CP對照組（908±112/mm2）和PBS對照組（879±123/mm2）顯著增高（p0.01），而CP和PBS兩對照組間無顯著差異（p0.05）。 結論：阻斷MyD88通路對成年大鼠視神經(jīng)損傷后的RGCs具有神經(jīng)保護作用。 第三部分：阻斷MyD88通路對夾傷視神經(jīng)干中TLR4和NF-kB表達的影響 方法：成年大鼠左側視神經(jīng)夾傷后隨機分為四組：（1）MIP實驗組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射MyD88抑制肽；（2）CP對照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射對照肽；（3）PBS對照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射PBS緩沖液；（4）空白對照組：視神經(jīng)夾傷后未予任何處理。于視神經(jīng)損傷后1d、3d、7d或14d處死動物，視神經(jīng)干取材行蛋白質(zhì)免疫印記（Western Blot）實驗。 結果：（1）與空白對照組相比，MIP實驗組、CP對照組和PBS對照組TLR4蛋白表達量在1d、3d、7d及14d所有時間點均顯著增高（p＜0.01）；在術后1d時間點，MIP實驗組、CP對照組和PBS對照組間TLR4蛋白表達量無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）；當術后存活時間升至3d、7d及14d時，MIP實驗組較CP對照組及PBS對照組TLR4蛋白表達量顯著降低（p＜0.01），而CP對照組和PBS對照組間均無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。（2）與空白對照組相比，MIP實驗組、CP對照組和PBS對照組NF-κB蛋白表達量在1d、3d、7d及14d所有時間點均顯著增高（p＜0.01）；MIP組NF-κB表達量在各時間點較CP對照組和PBS對照組均有顯著降低（p＜0.01），但CP對照組和PBS對照組在各時間點的NF-κB表達量并無明顯差異（p＞0.05）。 結論：早期阻斷MyD88通路對視神經(jīng)損傷后RGCs的保護作用，與TLR4和NF-κB蛋白表達的下調(diào)相關。 第四部分：阻斷MyD88通路對夾傷視神經(jīng)干中GAP-43表達的影響 第四部分采用夾傷模型的建造及處理方法，分為四組，即完全空白對照的Con組、以及經(jīng)手術和術后玻璃體注射處理的MIP組、CP組及PBS組。待模型制造完成后于1d、3d、7d及14d不同時間點對大鼠處死進行視神經(jīng)干的取材。視神經(jīng)干組織直接存放于-70℃冰箱待進行Western-blot實驗。 結果：在視神經(jīng)損傷后1d、3d、7d及14d所有時間點，MIP實驗組、CP對照組和PBS對照組GAP-43蛋白表達量與空白對照組相比均顯著增高（p＜0.01），MIP實驗組較CP對照組和PBS對照組GAP-43蛋白表達量顯著增高（p＜0.01），而CP對照組和PBS對照組間GAP-43蛋白表達量均無統(tǒng)計學差異（p＞0.05）。MIP實驗組GAP-43蛋白表達量隨術后存活時間的增加而逐漸增高，術后7d時達到最高值，但術后14d表達值明顯下降。 結論：早期阻斷MyD88通路可提高RGC的軸突再生能力。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R779.1

【引證文獻】

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1 王乾;劉新;;急性閉角型青光眼發(fā)病機制與Toll樣受體及髓樣分化因子88免疫調(diào)節(jié)作用的相關性分析[J];臨床眼科雜志;2016年06期

本文編號：2794610