【摘要】：目的乳腺癌耐藥蛋白(Breast cancer resistance potion,BCRP)和泛素化E3鏈接酶Bre1A與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但它們調(diào)控喉癌的發(fā)生發(fā)展的機制尚不十分明確。本研究通過檢測BCRP與Bre1A對喉癌細胞(Hep-2)增殖與遷移的影響,來探討兩者在喉癌的發(fā)生發(fā)展中所起的功能及作用。為未來臨床診斷、治療提供有價值的理論依據(jù)。方法本實驗采用PCR技術(shù)從乳腺文庫中擴增出人乳腺癌耐藥基因BCRP和泛素化E3連接酶Bre1A,并將其正確插入到Myc和2B-Flag載體中;將空載體與重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293T細胞到后,應用Western blot檢測表達情況,應用生長曲線實驗和細胞劃痕實驗檢測BCRP及Bre1A對喉癌細胞(Hep-2)增殖的影響。結(jié)果分別成功構(gòu)建人BCRP大小約為1835bp和人Bre1A大小約為2927bp的重組質(zhì)粒,將PCR產(chǎn)物成功插入Myc和2B-Flag標簽通過測序證明Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A構(gòu)建成功,并且應用Western blot檢測Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A融合蛋白的表達,顯示在293T細胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A后,前者在相對分子量約73KD處可見明顯特異性條帶,后者在相對分子量約120KD處可見明顯特異性條帶,表明重組質(zhì)粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A能在細胞中正確表達。應用生長曲線實驗檢測BCRP及Bre1A表達對喉癌細胞(Hep-2)增殖的影響,結(jié)果表明BCRP能夠促進喉癌細胞的增殖,Bre1A能夠抑制喉癌細胞的增殖。再應用細胞劃痕實驗檢測BCRP和Bre1A對喉癌細胞遷移的影響,過表達BCRP能夠促進喉癌細胞遷移,過表達Bre1A能夠抑制喉癌細胞遷移。結(jié)論BCRP促進喉癌細胞的增殖與遷移,Bre1A抑制喉癌細胞的增殖與遷移。這一研究結(jié)果對于BCRP和Bre1A對喉癌產(chǎn)生發(fā)展有了進一步的探索,為后續(xù)研究喉癌的發(fā)生發(fā)展機制提供新的理論依據(jù)。
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.65
【圖文】：

視野進行拍照并標記，拍攝完畢h 對陽性對照組和陰性對照組進行統(tǒng)計分析，生長曲線和 RT-PC有統(tǒng)計學意義。載體的構(gòu)建隆腺文庫作為模板，獲得大小約 1）。

c-BCRP 重組質(zhì)粒酶切瓊脂糖凝er；1: Myc-BCRP 重組質(zhì)粒酶切產(chǎn)跡檢測融合蛋白的表達 Myc-BCRP 和 Myc 空載體質(zhì)，行 SDS-PAGE 凝膠電泳。果顯示，293T 細胞轉(zhuǎn)染重組明顯特異性條帶，而轉(zhuǎn)染 MycRP 能在 293T 細胞中正確表達

Myc-BCRP 重組質(zhì)粒酶切瓊脂糖凝膠arker；1: Myc-BCRP 重組質(zhì)粒酶切產(chǎn)物t 印跡檢測融合蛋白的表達粒 Myc-BCRP 和 Myc 空載體質(zhì)粒白，行 SDS-PAGE 凝膠電泳。W結(jié)果顯示，293T 細胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)見明顯特異性條帶，而轉(zhuǎn)染 Myc 空BCRP 能在 293T 細胞中正確表達（

【參考文獻】

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本文編號：2762717