【摘要】：目的乳腺癌耐藥蛋白(Breast cancer resistance potion,BCRP)和泛素化E3鏈接酶Bre1A與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),但它們調(diào)控喉癌的發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚不十分明確。本研究通過(guò)檢測(cè)BCRP與Bre1A對(duì)喉癌細(xì)胞(Hep-2)增殖與遷移的影響,來(lái)探討兩者在喉癌的發(fā)生發(fā)展中所起的功能及作用。為未來(lái)臨床診斷、治療提供有價(jià)值的理論依據(jù)。方法本實(shí)驗(yàn)采用PCR技術(shù)從乳腺文庫(kù)中擴(kuò)增出人乳腺癌耐藥基因BCRP和泛素化E3連接酶Bre1A,并將其正確插入到Myc和2B-Flag載體中;將空載體與重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞到后,應(yīng)用Western blot檢測(cè)表達(dá)情況,應(yīng)用生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BCRP及Bre1A對(duì)喉癌細(xì)胞(Hep-2)增殖的影響。結(jié)果分別成功構(gòu)建人BCRP大小約為1835bp和人Bre1A大小約為2927bp的重組質(zhì)粒,將PCR產(chǎn)物成功插入Myc和2B-Flag標(biāo)簽通過(guò)測(cè)序證明Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A構(gòu)建成功,并且應(yīng)用Western blot檢測(cè)Myc-BCRP、2B-Flag-Bre1A融合蛋白的表達(dá),顯示在293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A后,前者在相對(duì)分子量約73KD處可見(jiàn)明顯特異性條帶,后者在相對(duì)分子量約120KD處可見(jiàn)明顯特異性條帶,表明重組質(zhì)粒Myc-BCRP和2B-Flag-Bre1A能在細(xì)胞中正確表達(dá)。應(yīng)用生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BCRP及Bre1A表達(dá)對(duì)喉癌細(xì)胞(Hep-2)增殖的影響,結(jié)果表明BCRP能夠促進(jìn)喉癌細(xì)胞的增殖,Bre1A能夠抑制喉癌細(xì)胞的增殖。再應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)BCRP和Bre1A對(duì)喉癌細(xì)胞遷移的影響,過(guò)表達(dá)BCRP能夠促進(jìn)喉癌細(xì)胞遷移,過(guò)表達(dá)Bre1A能夠抑制喉癌細(xì)胞遷移。結(jié)論BCRP促進(jìn)喉癌細(xì)胞的增殖與遷移,Bre1A抑制喉癌細(xì)胞的增殖與遷移。這一研究結(jié)果對(duì)于BCRP和Bre1A對(duì)喉癌產(chǎn)生發(fā)展有了進(jìn)一步的探索,為后續(xù)研究喉癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制提供新的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R739.65
【圖文】：

視野進(jìn)行拍照并標(biāo)記，拍攝完畢h 對(duì)陽(yáng)性對(duì)照組和陰性對(duì)照組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，生長(zhǎng)曲線和 RT-PC有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。載體的構(gòu)建隆腺文庫(kù)作為模板，獲得大小約 1）。

c-BCRP 重組質(zhì)粒酶切瓊脂糖凝er；1: Myc-BCRP 重組質(zhì)粒酶切產(chǎn)跡檢測(cè)融合蛋白的表達(dá) Myc-BCRP 和 Myc 空載體質(zhì)，行 SDS-PAGE 凝膠電泳。果顯示，293T 細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組明顯特異性條帶，而轉(zhuǎn)染 MycRP 能在 293T 細(xì)胞中正確表達(dá)

Myc-BCRP 重組質(zhì)粒酶切瓊脂糖凝膠arker；1: Myc-BCRP 重組質(zhì)粒酶切產(chǎn)物t 印跡檢測(cè)融合蛋白的表達(dá)粒 Myc-BCRP 和 Myc 空載體質(zhì)粒白，行 SDS-PAGE 凝膠電泳。W結(jié)果顯示，293T 細(xì)胞轉(zhuǎn)染重組質(zhì)見(jiàn)明顯特異性條帶，而轉(zhuǎn)染 Myc 空BCRP 能在 293T 細(xì)胞中正確表達(dá)（

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 曾榮華;;喉癌手術(shù)切緣組織中p53、p21、PCNA及COX-2蛋白的表達(dá)與腫瘤局部復(fù)發(fā)的關(guān)系[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2016年05期

2 孫臻峰;沈斌;張佳;蘇甜甜;董頻;;耐藥基因MDR1(P-gp)和ABCG2在Hep-2細(xì)胞耐藥中的作用研究[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2015年11期

3 沈斌;董頻;英信江;高尚;李大偉;;ABCG2及NF-κB p65在下咽癌中的表達(dá)意義[J];山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào);2012年04期

4 沈斌;董頻;;乳腺癌耐藥蛋白結(jié)構(gòu)、功能及其在人體腫瘤中作用的研究進(jìn)展[J];山東大學(xué)耳鼻喉眼學(xué)報(bào);2011年03期

5 黃志剛;;喉癌基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀和展望[J];中國(guó)耳鼻咽喉頭頸外科;2010年02期

6 吳躍煌;唐平章;;晚期喉癌近代治療觀念[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2006年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 袁源;Nrf2和Keap1在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2762717