【摘要】：目的:觀察在水楊酸鈉(sodium salicylate,SS)作用下,大鼠螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(spiral ganglion neurons,SGN)上NMDA受體(N-methyl-D-aspartic acid receptor,NMDAR)活動對GABAa受體(γ-aminobutyric acid a receptor,GABAaR)電流的影響,進(jìn)一步完善水楊酸鈉耳毒性的受體機(jī)制。方法:急性分離培養(yǎng)新生SD大鼠SGN,采用全細(xì)胞膜片鉗記錄模式,觀察在不同濃度水楊酸鈉作用下,分別激活或抑制NMDAR對GABAaR電流的影響。結(jié)果:(1)SGN形態(tài)特點:SGN呈圓形或橢圓形,個體較大,表面光滑、胞膜完整、折光性強(qiáng),細(xì)胞周圍光暈明顯,胞質(zhì)均勻,核仁較大。6小時后逐漸貼壁,7小時左右貼壁完成,24小時后,SGN胞體長出神經(jīng)突起,其長度達(dá)胞體的三倍以上,并可交織成網(wǎng),7天以后,SGN開始萎縮、凋亡,細(xì)胞裂解并釋放出胞質(zhì);(2)SGN鑒定:若急性分離培養(yǎng)的細(xì)胞可記錄到一個快速激活、快速失活的內(nèi)向電流,該電流可被0.3μM TTX迅速阻斷,經(jīng)洗脫后該內(nèi)向電流可基本恢復(fù),證實該電流為TTX敏感性電壓門控性鈉離子通道電流,該細(xì)胞為SGN;(3)生理狀態(tài)及0.5mM SS和5mM SS分別作用下,0.5mM(以下相同)NMDA均未引出明顯的NMDAR電流;(4)0.5mM SS和5mM SS分別作用下,0.5mM(以下相同)GABA引出的電流密度均值分別減少28.47%(n=5,F=67.020,P=0.0000.05)、55.77%(n=6,F=67.020,P=0.0000.05);(5)NMDA+GABA、0.2mM(以下相同)APV+GABA與GABA比較,引出的電流密度均值分別減小11.12%(n=5,F=1.626,P=0.0980.05)、6.64%(n=5,F=1.626,P=0.3060.05);(6)0.5mM SS+GABA+NMDA與0.5mM SS+GABA比較,電流密度均值減小27.72%(n=5,F=11.779,P=0.0210.05),0.5mM SS+GABA+APV與0.5mM SS+GABA比較,電流密度均值增加22.30%(n=5,F=11.779,P=0.0480.05);(7)5mM SS+GABA+NMDA與5mM SS+GABA比較,電流密度均值減小23.09%(n=8,F=162.313,P=0.0070.05),5mM SS+GABA+APV與5mM SS+GABA比較,電流密度均值增加115.08%(n=5,F=162.313,P=0.0000.05)。結(jié)論:⑴水楊酸鈉可逆性抑制GABAaR的電流,且呈濃度依賴性;(2)生理狀態(tài)下,NMDAR對GABAaR電流無顯著影響,即不含水楊酸鈉時,NMDAR可輕度抑制GABAaR電流,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義;(3)水楊酸鈉濃度依賴性地介導(dǎo)NMDAR抑制GABAaR電流,即越高濃度的水楊酸鈉作用下,NMDAR對GABAaR電流的抑制作用越強(qiáng)。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R764
【圖文】：

用于 SGN 培養(yǎng)；⑸ 用顯微鑷將含 SGN 的組織松散，置于含有 0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液中，置入 37℃、5% CO2的恒溫培養(yǎng)箱中孵育；⑹ 隔 3-5min 取出離心管，輕彈其管壁數(shù)次，10min 后，用含 10%胎牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液終止消化；⑺ 置入低溫離心機(jī)中以 1000rpm 的轉(zhuǎn)速離心 5min，棄上清，加入 2ml培養(yǎng)液重懸，輕柔吹打 8-10 次；⑻ 將上述重懸的細(xì)胞懸液接種于預(yù)先用多聚賴氨酸包被的 35mm 培養(yǎng)皿中，置入 37℃、5% CO2 的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；⑼ 培養(yǎng) 7-12 小時后，SGN 已基本貼壁，倒置相差顯微鏡下選取大而圓、胞膜周圍折光性好、表面光滑的 SGN 行全細(xì)胞膜片鉗記錄。注：以上所有手術(shù)器械均經(jīng)高壓滅菌消毒后使用。

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本文編號：2740148