【摘要】：圓錐角膜是一種漸進(jìn)性的角膜擴(kuò)張疾病,表現(xiàn)為角膜中央變薄、呈圓錐樣向前突出。早期患者常引發(fā)高度近視及不規(guī)則散光,晚期可能會(huì)出現(xiàn)角膜混濁,形成瘢痕,造成嚴(yán)重視力障礙甚至失明。關(guān)于圓錐角膜的形成與發(fā)展,普遍認(rèn)為與遺傳、環(huán)境、生物力學(xué)、基質(zhì)降解、氧化應(yīng)激等因素有關(guān),但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。其中,力學(xué)刺激和氧化應(yīng)激在圓錐角膜的發(fā)生發(fā)展中可能起到一定作用。因此,本文采用Flexercell 4000柔性基底牽拉系統(tǒng)對(duì)離體培養(yǎng)的正常人及圓錐角膜患者角膜成纖維細(xì)胞進(jìn)行體外周期性機(jī)械牽拉(牽拉幅度15%、頻率0.1 Hz、時(shí)間12 h),模擬正常及圓錐角膜所處的生物力學(xué)環(huán)境,著重探討機(jī)械牽拉對(duì)角膜成纖維細(xì)胞氧化應(yīng)激水平、抗氧化能力、促炎因子及基質(zhì)降解酶表達(dá)的影響。本文主要研究工作及結(jié)果如下:(1)探討周期性牽拉對(duì)人正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞氧化應(yīng)激水平的影響。通過2',7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽(DCFH-DA)對(duì)角膜成纖維細(xì)胞活性氧自由基(ROS)進(jìn)行染色,ROS的熒光強(qiáng)度可間接反映細(xì)胞氧化應(yīng)激狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),圓錐角膜成纖維細(xì)胞基礎(chǔ)ROS水平明顯高于正常角膜成纖維細(xì)胞;經(jīng)牽拉處理后,正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞ROS水平均顯著增加。(2)探討周期性牽拉對(duì)人正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞抗氧化酶基因表達(dá)的影響。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)角膜成纖維細(xì)胞中超氧化物歧化酶-2(SOD-2)、血紅素氧合酶-1(HO-1)、NADPH氧化還原酶-1(NQO-1)基因表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)牽拉處理后,正常角膜成纖維細(xì)胞部分抗氧化酶顯著增加;其中一例圓錐角膜患者角膜成纖維細(xì)胞抗氧化酶基因水平明顯低于正常角膜成纖維細(xì)胞,牽拉處理后顯著增高。另一例圓錐角膜患者角膜成纖維細(xì)胞抗氧化酶基因水平明顯高于正常角膜成纖維細(xì)胞,牽拉處理后顯著降低或無明顯變化。(3)探討周期性牽拉對(duì)人正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞促炎因子基因及蛋白表達(dá)的影響。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)角膜成纖維細(xì)胞中白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)基因或蛋白表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),圓錐角膜成纖維細(xì)胞促炎因子基因或蛋白表達(dá)水平均高于正常角膜成纖維細(xì)胞;經(jīng)牽拉處理后,正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞部分促炎因子基因或蛋白表達(dá)水平顯著增加。(4)探討周期性牽拉對(duì)人正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶基因及蛋白表達(dá)的影響。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)角膜成纖維細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-1,-9(MMP-1、MMP-9)基因或蛋白表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),圓錐角膜成纖維細(xì)胞MMP-1和MMP-9表達(dá)水平明顯高于正常角膜成纖維細(xì)胞;經(jīng)牽拉處理后,正常及圓錐角膜成纖維細(xì)胞MMP-1和MMP-9表達(dá)水平顯著增高。綜上所述,圓錐角膜成纖維細(xì)胞處于較高氧化應(yīng)激狀態(tài),受到力學(xué)刺激后氧化應(yīng)激水平顯著增加,但其抗氧化系統(tǒng)存在缺陷,導(dǎo)致機(jī)體自身不能有效應(yīng)對(duì)氧化損傷。另外,圓錐角膜成纖維細(xì)胞本身或受力學(xué)刺激后部分促炎因子和基質(zhì)降解酶過量釋放,可能進(jìn)一步加劇角膜基質(zhì)降解,促進(jìn)圓錐角膜的發(fā)生與發(fā)展。
【學(xué)位授予單位】：太原理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R772.2

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本文編號(hào)：2705534