【摘要】：目的:1.觀察分析高度近視人群中眼球生物學(xué)參數(shù)的分布情況,分析高度近視相關(guān)因素,篩選先天性高度近視及后天性高度近視人群中的致病突變位點(diǎn),為近視的基因治療提供更多的治療基因。2.研究雙調(diào)蛋白對(duì)雙眼透鏡誘導(dǎo)性及先天性近視豚鼠眼軸生長(zhǎng)的作用,探索其分子機(jī)制,為近視的防治提供有效的依據(jù)。方法:本研究共包括三部分,第一部分:高度近視臨床流行病學(xué)及遺傳學(xué)研究我們收集了2016年6月至2017年4月來(lái)我院就診的175例高度近視患者,收集患者的年齡、性別、發(fā)病年齡、視力、屈光度、眼軸長(zhǎng)度、眼壓、前房深度、角膜曲率、眼底病變等基本數(shù)據(jù),根據(jù)患者的發(fā)病年齡分為先天性61例和后天性114例,對(duì)這些基礎(chǔ)數(shù)據(jù)進(jìn)行流行病學(xué)分析,并采集患者外周EDTA抗凝血5-6ml,通過(guò)基因測(cè)序法,尋找先天性及后天性高度近視人群中的致病突變位點(diǎn)。第二部分:雙調(diào)蛋白對(duì)雙眼透鏡誘導(dǎo)性近視豚鼠眼軸生長(zhǎng)的作用及其分子機(jī)制研究選取60只3周齡健康三色短毛豚鼠,隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組、近視模型組、低劑量抗體近視組、中劑量抗體近視組、高劑量抗體近視組,每組12只。本研究采用雙眼戴鏡法構(gòu)建近視模型,即豚鼠雙眼佩戴-10D透鏡誘導(dǎo)近視,正常組不做任何處理。近視模型組豚鼠持續(xù)戴鏡,低、中、高劑量抗體近視組豚鼠戴鏡2周后右眼玻璃體腔注射5ug、10ug、20ug雙調(diào)蛋白抗體,同時(shí)左眼玻璃體腔注射同等劑量的乳酸鈉林格注射液(buffer),注射抗體前后持續(xù)戴鏡。于戴鏡前、戴鏡2周后、實(shí)驗(yàn)5周后(注射三次抗體后)等3個(gè)時(shí)間點(diǎn)用帶狀檢影鏡及眼科A超儀測(cè)量豚鼠的屈光度和眼軸長(zhǎng)度。用PAS染色法檢測(cè)豚鼠眼球后極部視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜及鞏膜的厚度,同時(shí)用實(shí)時(shí)定量PCR和免疫熒光法檢測(cè)視網(wǎng)膜中雙調(diào)蛋白及表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)mRNA和蛋白的表達(dá)。第三部分:雙調(diào)蛋白對(duì)先天性近視豚鼠眼軸生長(zhǎng)的作用研究選取24只3周齡健康三色短毛先天性近視豚鼠,隨機(jī)分為3組:低劑量抗體近視組、中劑量抗體近視組、高劑量抗體近視組,每組8只。飼養(yǎng)2周后,低、中、高劑量抗體近視組豚鼠實(shí)驗(yàn)眼玻璃體腔注射5ug、10ug、20ug雙調(diào)蛋白抗體,同時(shí)對(duì)照眼玻璃體腔注射同等劑量的buffer緩沖液。于入組前、飼養(yǎng)2周后、注射抗體三次后用帶狀檢影鏡及眼科A超儀測(cè)量豚鼠的屈光度和眼軸長(zhǎng)度。用PAS染色法檢測(cè)豚鼠眼球后極部視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜及鞏膜的厚度。結(jié)果:1.本研究中高度近視人群多以后天性近視為主,發(fā)病年齡多集中在青少年時(shí)期,且以男性居多。先天性高度近視人群中家族性近視居多,后天性高度近視則多為散發(fā)性,與后天性高度近視患者相比,先天性高度近視患者最佳矯正視力下降程度更深(P0.001),屈光度下降更明顯(P0.001),眼軸長(zhǎng)度更長(zhǎng)(P0.05)。高度近視青少年具有視力下降,眼軸延長(zhǎng),前房加深,眼壓下降的特點(diǎn),高度近視眼軸長(zhǎng)度與角膜曲率、等效球鏡度呈顯著負(fù)相關(guān)(P0.01),與前房深度呈顯著正相關(guān)(P0.01)。遺傳學(xué)研究發(fā)現(xiàn)雙調(diào)蛋白(AREG)、血管活性腸肽受體2(VIPR2)、聚蛋白多糖(ACAN)、α1-I型膠原基因(COL1A1)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β誘導(dǎo)基因1(TGIF1)在高度近視人群中變異頻率增高。2.雙眼造模近視研究:入組前各組豚鼠間屈光度及眼軸長(zhǎng)度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。透鏡誘導(dǎo)2周后,近視模型組與正常對(duì)照組比較眼軸長(zhǎng)度增長(zhǎng)、屈光度下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。與近視buffer組相比,玻璃體腔注射雙調(diào)蛋白抗體后,低、中、高劑量組眼軸長(zhǎng)度均下降,屈光度均上升,后極部鞏膜厚度均明顯增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05),且呈劑量依賴性變化。各組后極部視網(wǎng)膜厚度無(wú)明顯變化。實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果和免疫熒光結(jié)果顯示近視模型組及buffer組視網(wǎng)膜中雙調(diào)蛋白mRNA和蛋白表達(dá)增加,低、中、高劑量抗體組視網(wǎng)膜中雙調(diào)蛋白mRNA和蛋白表達(dá)均下降,與buffer組相比,低劑量組視網(wǎng)膜中表皮生長(zhǎng)因子受體mRNA表達(dá)下降(t=2.606,P=0.022),其他組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.先天性近視研究:研究起始時(shí)先天性近視各實(shí)驗(yàn)組豚鼠間屈光度及眼軸長(zhǎng)度比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。注射雙調(diào)蛋白抗體后,與近視buffer組相比,低、中、高劑量抗體組眼軸長(zhǎng)度下降,后極部鞏膜厚度增厚,屈光度增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且呈劑量依賴性(均為P0.05)。結(jié)論:1.青少年男性為高度近視危險(xiǎn)因素,先天性近視為眼底病變的危險(xiǎn)因素,高度近視眼軸長(zhǎng)度延長(zhǎng)與角膜曲率減少、等效球鏡度減少、前房加深有關(guān),高度近視人群中AREG、VIPR2、ACAN、COL1A1、TGIF1基因上的突變位點(diǎn)變異頻率升高,提示這些基因可能與高度近視密切相關(guān)。2.在雙眼近視造模豚鼠的玻璃體腔注射雙調(diào)蛋白抗體后,與近視buffer組(左眼)相比,近視抗體組(右眼)豚鼠屈光度上升,眼軸明顯縮短,后極部鞏膜增厚,其機(jī)制可能與雙調(diào)蛋白表達(dá)的減少有關(guān)。3.先天性近視豚鼠玻璃體腔內(nèi)注射雙調(diào)蛋白抗體后,與近視buffer組相比,各抗體組豚鼠屈光度上升,眼軸縮短,后極部鞏膜厚度增加。這說(shuō)明雙調(diào)蛋白抗體也能夠延緩先天性近視豚鼠眼軸的生長(zhǎng)。
【圖文】：

28射抗體后各組眼軸長(zhǎng)度和屈光度差值比較（右眼減左組相比，**表示 P<0.01，*表示 P<0.05；抗體后各組后極部鞏膜厚度白抗體后，，各組后極部視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、鞏膜厚度見視模型組后極部鞏膜厚度明顯變�。╰=3.192，P=0.006、高劑量抗體組后極部鞏膜厚度均明顯增加（t=-3.028與 buffer 組相比，低劑量組后極部脈絡(luò)膜厚度增加（t=無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各組后極部視網(wǎng)膜厚度差異均無(wú)統(tǒng)體腔注射雙調(diào)蛋白抗體后雙調(diào)蛋白抗體組與 buffer 組性增厚，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均為 P<0.05，見圖

圖 2-2 注射雙調(diào)蛋白抗體后各組后極部視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、鞏膜厚度（n=5 X1圖 2-3 玻璃體腔注射三次雙調(diào)蛋白抗體后各組后極部視網(wǎng)膜、脈絡(luò)膜、鞏膜厚度buffer 組為從低、中、高劑量組的 36 只左眼中隨機(jī)選取的 5 只眼；與正常對(duì)照比，##表示 P＜0.01；與 buffer 組相比，*表示 P＜0.05；**表示 P＜0.01；
【學(xué)位授予單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R778.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2705317