【摘要】：背景/目的:白介素IL-17A是一種促炎性細(xì)胞因子,既往的很多研究已經(jīng)證實(shí)了,它與多種自身免疫性疾病相關(guān),然而,它是否也參與了糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)的發(fā)生與發(fā)展,這一點(diǎn)還不是很清楚。糖尿病視網(wǎng)膜病變是自身免疫性糖尿病的最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一,這種病變能導(dǎo)致糖尿病患者的視力下降乃至喪失,并且已經(jīng)成為全世界范圍內(nèi)青壯年糖尿病患者失明而喪失勞動(dòng)能力,從而影響生活質(zhì)量的主要原因。因此,我們這項(xiàng)研究的目的是為了證實(shí)白介素IL-17A能通過(guò)影響視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞的功能而加重糖尿病視網(wǎng)膜病變,進(jìn)一步探討白介素與糖尿病視網(wǎng)膜病變之間的關(guān)系,而阻斷白介素IL-17A的實(shí)驗(yàn)研究則可減輕糖尿病視網(wǎng)膜病變,可能為將來(lái)臨床上治療糖尿病視網(wǎng)膜病變打開(kāi)一片新的領(lǐng)域。方法:在體外研究中,向高糖培養(yǎng)的小鼠Muller細(xì)胞系(rMC-1)中分別加入白介素IL-17A,抗白介素IL-17A單克隆抗體,或者抗白介素IL-17A受體的單克隆抗體,作用24小時(shí)。在體內(nèi)研究中,糖尿病視網(wǎng)膜病變可以通過(guò)向腹腔內(nèi)注射鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)出來(lái),然后向糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠動(dòng)物模型玻璃體腔內(nèi)注射抗白介素IL-17A單克隆抗體,或者注射抗白介素IL-17A受體的單克隆抗體。準(zhǔn)備做視網(wǎng)膜血管造影的實(shí)驗(yàn)小鼠會(huì)在玻璃體腔內(nèi)注射后2周被處死,而其他實(shí)驗(yàn)小鼠會(huì)在玻璃體腔內(nèi)注射后2天被處死。通過(guò)免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、高效液相色譜分析(HPLC)、電子顯微鏡、免疫組化和TUNEL檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)糖尿病小鼠視網(wǎng)膜中Muller細(xì)胞和體外培養(yǎng)的rMC-1細(xì)胞中各種蛋白的表達(dá)水平以及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡情況;通過(guò)視網(wǎng)膜血管造影觀察糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜血管滲漏情況,通過(guò)視網(wǎng)膜白細(xì)胞粘附檢測(cè)方法觀察糖尿病視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜血管白細(xì)胞粘附情況。結(jié)果:在高糖培養(yǎng)的小鼠Muller細(xì)胞系(rMC-1)和糖尿病視網(wǎng)膜病變的視網(wǎng)膜組織中,白介素IL-17A的分泌和白介素IL-17A受體的表達(dá)都是明顯增加的。高糖處理的小鼠Maller細(xì)胞系(rMC-1)的激活和功能障礙,是通過(guò)增加膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(GFAP),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和谷氨酸的水平,以及下調(diào)谷氨酰胺合成酶(GS)和興奮性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)體(EAAT1)的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。白介素IL-17A加劇了高糖處理的小鼠Muller細(xì)胞系(rMC-1)的功能障礙,而抗白介素IL-17A單克隆抗體或抗白介素IL-17A受體單克隆抗體減輕了小鼠Muller細(xì)胞系(rMC-1)的功能障礙。因此,向糖尿病視網(wǎng)膜病變模型小鼠的玻璃體腔內(nèi)注射抗白介素IL-17A單克隆抗體或抗白介素IL-17A受體單克隆抗體后,會(huì)減輕視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞的功能障礙,降低視網(wǎng)膜血管的白細(xì)胞粘附,減少視網(wǎng)膜血管的滲漏,減少視網(wǎng)膜緊密連接蛋白表達(dá)的下調(diào)以及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡。結(jié)論:通過(guò)我們的實(shí)驗(yàn)研究,我們發(fā)現(xiàn)白介素IL-17A至少是部分地通過(guò)損傷視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞的功能,來(lái)加劇糖尿病視網(wǎng)膜病變這樣的病理過(guò)程的。因此,阻斷白介素IL-17A將來(lái)會(huì)是一種治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的非常有潛力的策略和方案,能為臨床上治療糖尿病視網(wǎng)膜病變提供新的思路和方法。
【圖文】：

與空白處理對(duì)照組小鼠相比，在糖尿病發(fā)�。硞�(gè)月后，ＳＴＺ處理小鼠可表現(xiàn)為逡逑視網(wǎng)膜上的ＩＬ－１７Ａ和ＩＬ－１７ＲＡ表達(dá)的上調(diào)，以及視網(wǎng)膜中ＩＬ－１７Ａ含量的增加（如逡逑圖１Ａ和１Ｂ）。逡逑在高糖處理的ｒＭＣ－１細(xì)胞中，ＩＬ－１７Ａ和ＩＬ－１７ＲＡ染色細(xì)胞的數(shù)量均增加（圖逡逑１Ｃ），ＩＬ－１７Ａ和ＩＬ－１７ＲＡ的表達(dá)均上調(diào)（圖１Ｄ）。２５＿濃度的高糖的影響大于１５ｍＭ逡逑濃度的高糖（圖１Ｃ和ＩＤ）。此外，在高糖條件下，培養(yǎng)的ｒＭＣ－１細(xì)胞液上清液中逡逑ＩＬ－１７Ａ濃度升高（圖１Ｅ）。另外，與對(duì)照組ｒＭＣ－１細(xì)胞相比，高糖處理的ｒＭＣ－１逡逑細(xì)胞組中的ＧＦＡＰ標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量和ＧＦＡＰ表達(dá)水平均增加（圖１Ｃ和ＩＤ）。這些均逡逑證實(shí)了高糖有激活ｒＭＣ－１細(xì)胞的作用。逡逑１６逡逑

二、ＩＬ－１７Ａ通過(guò)ＩＬ－１７ＲＡ加劇痛誘導(dǎo)的ｒＭＣ－１細(xì)胞的撤活和功能障礙逡逑當(dāng)ｒＭＣ－１細(xì)胞暴露在高糖（濃度為２５ｍＭ）環(huán)境下，細(xì)胞中ＧＦＡＰ和ＶＥＧＦ逡逑的表達(dá)均上調(diào)，但其中ＧＳ和ＥＡＡＴ１的表達(dá)均下調(diào)（圖２Ａ）。非常重要的是，用逡逑濃度分別為１０，邋２５或５０邋ｎｇ／ｍｌ的ＥＬ－１７Ａ處理ｒＭＣ－１細(xì)胞，會(huì)加劇高糖誘導(dǎo)的逡逑ＧＦＡＰ、ＶＥＧＦ、ＧＳ和ＥＡＡＴ１表達(dá)的變化（圖２Ａ）。ＩＬ－１７Ａ的這些效應(yīng)在高濃度逡逑時(shí)比低濃度時(shí)更大。相比之下，抗ＩＬ－１７ＡｍＡｂ（ｌ或２ｕｇ／ｍｌ）減輕了邋ｒＭＣ－１細(xì)胞逡逑中高糖誘導(dǎo)的ＧＦＡＰ、ＶＥＧＦ、ＧＳ和ＥＡＡＴ１表達(dá)的變化（圖２Ａ）。此外，，抗ＤＬ－１７ＲＡ逡逑ｍＡｂ（ｌｕｇ／ｍｌ）不僅減輕了高糖誘導(dǎo)的變化，同時(shí)也阻斷了邋ＩＬ－１７Ａ的作用（圖２Ａ）。逡逑與此類似的是，在高糖條件下，在培養(yǎng)的ｒＭＣ－１細(xì)胞裂解物中ＧＦＡＰ的含量，逡逑以及培養(yǎng)的ｒＭＣ－１細(xì)胞上清液中ＶＥＧＦ的濃度和ｒＭＣ－１細(xì)胞裂解物中谷氨酸的逡逑含量都是增加的，而且暴露于ＥＬ－１７Ａ中會(huì)進(jìn)一步增加（圖２Ｂ，２Ｃ和２Ｄ）�？梗桑蹋保罚铃义希恚粒饣蚩梗桑蹋保罚遥铃澹恚粒舛伎梢詼p少高糖誘導(dǎo)的ｒＭＣ－１細(xì)胞中ＧＦＡＰ、ＶＥＧＦ和逡逑谷氨酸的生產(chǎn)或分泌的變化（圖２Ｂ，２Ｃ和２Ｄ）�？梗桑蹋保罚遥铃澹恚粒膺�能阻斷ＩＬ－１７Ａ逡逑的效應(yīng)（圖２Ｂ
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

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本文編號(hào)：2705113