發(fā)布時間：2020-06-08 16:28

【摘要】：背景中性粒細胞性炎癥反應在慢性鼻-鼻竇炎中得到越來越廣泛的重視,然而中性粒細胞在慢性鼻-鼻竇炎中的功能和調控仍沒有得到完全揭示。IL-36家族成員在中性粒細胞性炎癥反應中可能起著重要的作用。目的研究IL-36家族成員在慢性鼻-鼻竇炎中的表達和作用。方法慢性鼻-鼻竇炎患者作為實驗組,鼻中隔偏曲患者作為對照組。采用RT-PCR 方法檢測組織中 IL-36α、IL-36γ、IL-36γ、IL-36Ra、IL-38 和 IL-36R 的 mRNA表達水平;利用免疫組織化學方法檢測上述指標的組織學分布和表達量,并進一步以ELISA方法加以驗證。采用免疫熒光技術及流式細胞學技術測定IL-36R的表達情況。分離并純化外周血中的中性粒細胞進行培養(yǎng)。培養(yǎng)鼻息肉粘膜原代上皮細胞,用相關細胞因子進行刺激,并檢測目的基因的表達情況。采用Western blotting技術檢測全長型IL-36γ的表達水平及裂解。培養(yǎng)游離鼻息肉組織細胞(Dispersed nasal polyp cell,DNPCs)并分別予以全長型IL-36γ(伴或不伴彈性蛋白酶)及地塞米松進行刺激。結果中性粒細胞浸潤程度、IL-36家族成員及IL-36R表達水平在伴有或不伴有鼻息肉的鼻竇炎組織中均較對照組明顯上調。IL-36γ是表達量最高的IL-36家族成員,其主要表達部位為鼻竇炎組織上皮細胞。中性粒細胞是鼻竇炎組織中表達IL-36R的最主要細胞。外周血中性粒細胞幾乎不表達IL-36,但其在IL-6、IL-1β和Dermatophagoides pteronyssinus group 1(Der p1)的作用下可上調 IL-36R的表達水平。在鼻息肉組織中,彈性蛋白酶的活性增強并可裂解全長型IL-36γ。與此一致地,裂解型IL-36γ在鼻息肉組織中較對照組顯著增多。采用全長型IL-36γ刺激 DNPCs,可以促進 MMP-9、IL-17A、CXCL1、CXCL2 和 CXCL8 的產生,加入彈性蛋白酶抑制劑后可以抑制上述產物的表達,然而,加入地塞米松不能抑制上述的IL-36γ的促炎作用。結論本文首次全面研究了 IL-36家族在慢性鼻-鼻竇炎中的表達情況,對IL-36a、β、γ、IL-36Ra和IL-38在慢性鼻-鼻竇炎中的表達水平以及組織學定位獲得了明確的結果。發(fā)現(xiàn)IL-36γ在CRS中具有最高的表達量。并首次尋找到IL-36受體(IL-36R)在CRS中的表達和定位,發(fā)現(xiàn)主要表達IL-36R的細胞是中性粒細胞。本研究首次揭示了 IL-36γ在慢性鼻-鼻竇炎中的功能,并進一步證實了全長IL-36γ的功能在中性粒細胞來源酶的活化后得到顯著增強,活化后的IL-36γ直接作用于中性粒細胞表面的IL-36R而發(fā)揮功能。本研究初步揭示了地塞米松不能抑制活化的IL-36γ所導致的鼻息肉組織中性粒細胞炎癥反應,從而提示了IL-36γ的作用可能是部分慢性鼻-鼻竇炎患者激素治療效果不佳的原因。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R765

【參考文獻】

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1 吳震;古潔若;;強直性脊柱炎遺傳易感性和白細胞介素-1基因多態(tài)性的薈萃分析[J];中華醫(yī)學雜志;2007年07期

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本文編號：2703341