【摘要】：背景中性粒細(xì)胞性炎癥反應(yīng)在慢性鼻-鼻竇炎中得到越來越廣泛的重視,然而中性粒細(xì)胞在慢性鼻-鼻竇炎中的功能和調(diào)控仍沒有得到完全揭示。IL-36家族成員在中性粒細(xì)胞性炎癥反應(yīng)中可能起著重要的作用。目的研究IL-36家族成員在慢性鼻-鼻竇炎中的表達(dá)和作用。方法慢性鼻-鼻竇炎患者作為實(shí)驗(yàn)組,鼻中隔偏曲患者作為對照組。采用RT-PCR 方法檢測組織中 IL-36α、IL-36γ、IL-36γ、IL-36Ra、IL-38 和 IL-36R 的 mRNA表達(dá)水平;利用免疫組織化學(xué)方法檢測上述指標(biāo)的組織學(xué)分布和表達(dá)量,并進(jìn)一步以ELISA方法加以驗(yàn)證。采用免疫熒光技術(shù)及流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)測定IL-36R的表達(dá)情況。分離并純化外周血中的中性粒細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)鼻息肉粘膜原代上皮細(xì)胞,用相關(guān)細(xì)胞因子進(jìn)行刺激,并檢測目的基因的表達(dá)情況。采用Western blotting技術(shù)檢測全長型IL-36γ的表達(dá)水平及裂解。培養(yǎng)游離鼻息肉組織細(xì)胞(Dispersed nasal polyp cell,DNPCs)并分別予以全長型IL-36γ(伴或不伴彈性蛋白酶)及地塞米松進(jìn)行刺激。結(jié)果中性粒細(xì)胞浸潤程度、IL-36家族成員及IL-36R表達(dá)水平在伴有或不伴有鼻息肉的鼻竇炎組織中均較對照組明顯上調(diào)。IL-36γ是表達(dá)量最高的IL-36家族成員,其主要表達(dá)部位為鼻竇炎組織上皮細(xì)胞。中性粒細(xì)胞是鼻竇炎組織中表達(dá)IL-36R的最主要細(xì)胞。外周血中性粒細(xì)胞幾乎不表達(dá)IL-36,但其在IL-6、IL-1β和Dermatophagoides pteronyssinus group 1(Der p1)的作用下可上調(diào) IL-36R的表達(dá)水平。在鼻息肉組織中,彈性蛋白酶的活性增強(qiáng)并可裂解全長型IL-36γ。與此一致地,裂解型IL-36γ在鼻息肉組織中較對照組顯著增多。采用全長型IL-36γ刺激 DNPCs,可以促進(jìn) MMP-9、IL-17A、CXCL1、CXCL2 和 CXCL8 的產(chǎn)生,加入彈性蛋白酶抑制劑后可以抑制上述產(chǎn)物的表達(dá),然而,加入地塞米松不能抑制上述的IL-36γ的促炎作用。結(jié)論本文首次全面研究了 IL-36家族在慢性鼻-鼻竇炎中的表達(dá)情況,對IL-36a、β、γ、IL-36Ra和IL-38在慢性鼻-鼻竇炎中的表達(dá)水平以及組織學(xué)定位獲得了明確的結(jié)果。發(fā)現(xiàn)IL-36γ在CRS中具有最高的表達(dá)量。并首次尋找到IL-36受體(IL-36R)在CRS中的表達(dá)和定位,發(fā)現(xiàn)主要表達(dá)IL-36R的細(xì)胞是中性粒細(xì)胞。本研究首次揭示了 IL-36γ在慢性鼻-鼻竇炎中的功能,并進(jìn)一步證實(shí)了全長IL-36γ的功能在中性粒細(xì)胞來源酶的活化后得到顯著增強(qiáng),活化后的IL-36γ直接作用于中性粒細(xì)胞表面的IL-36R而發(fā)揮功能。本研究初步揭示了地塞米松不能抑制活化的IL-36γ所導(dǎo)致的鼻息肉組織中性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng),從而提示了IL-36γ的作用可能是部分慢性鼻-鼻竇炎患者激素治療效果不佳的原因。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R765

【參考文獻(xiàn)】

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1 吳震;古潔若;;強(qiáng)直性脊柱炎遺傳易感性和白細(xì)胞介素-1基因多態(tài)性的薈萃分析[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2007年07期

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本文編號：2703341