【摘要】：目的:本研究收集了三個(gè)遺傳性耳聾家系(分別為HBSY-012、HBSY-013、HBSY-014),對(duì)家系成員的聽力學(xué)特點(diǎn)及遺傳學(xué)特征進(jìn)行詳細(xì)分析,尋找家系的致病基因。方法:詳細(xì)詢問病史并進(jìn)行耳聾表型和遺傳方式的分析判斷,提取家系成員外周血DNA；利用目標(biāo)基因捕獲和大規(guī)模平行測(cè)序技術(shù),首先對(duì)三個(gè)家系先證者進(jìn)行已知耳聾基因的篩查(包括153個(gè)核基因、6個(gè)線粒體基因和3個(gè)microRNA),初步的篩查未鑒定出致病突變,然后根據(jù)三個(gè)家系不同的特征,采取不同的策略尋找致病基因,對(duì)HBSY-012家系采用連鎖分析與全外顯子組測(cè)序相結(jié)合的方法,而HBSY-013和HBSY-014兩個(gè)家系僅采用全外顯子組測(cè)序的方法,得到的可疑致病位點(diǎn)通過Sanger測(cè)序來進(jìn)行家系臨床表型和基因型的共分離研究。結(jié)果:1、HBSY-012家系5代居住于河南省光山縣,現(xiàn)存3代,共計(jì)34人,家系中有14人診斷為感音神經(jīng)性耳聾,家系圖顯示符合典型常染色體顯性遺傳模式,耳聾表型的特點(diǎn)為語后聾,發(fā)病年齡在5-7歲,已知耳聾基因篩查未明確致病突變。通過連鎖分析,將致病基因定位于第9號(hào)染色體長臂q31.1-q31.3區(qū)段內(nèi)(最大LOD值3.6076),目前已知的DFNA基因座位均不位于該區(qū)段,因此,可以判定該區(qū)段為新定位的耳聾基因座位,暫時(shí)將其編號(hào)為DFNA74。重點(diǎn)關(guān)注該區(qū)段內(nèi)的全外顯子組測(cè)序結(jié)果,并對(duì)區(qū)段以外的E1I5基因 c.2399CT、ANKMY2基因 c.822_826del、DDX49 基因 c.341CT 以及DEFB129基因c.284GT共四個(gè)候選基因變異位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,在家系中均無共分離現(xiàn)象出現(xiàn)。2、HBSY-013家系5代居住于河南省平頂山市,現(xiàn)存4代,共計(jì)40人,家系中有8人診斷為感音神經(jīng)性耳聾,家系圖顯示基本符合常染色體顯性遺傳模式,耳聾表型的特點(diǎn)為語后聾,發(fā)病年齡在16~25歲,已知耳聾基因篩查未鑒定出致病突變,選取兩名家系成員進(jìn)行全外顯子組測(cè)序,已獲得初步的候選基因變異位點(diǎn),需進(jìn)一步家系驗(yàn)證;3、HBSY-014家系5代居住于湖北省監(jiān)利縣,現(xiàn)存4代,共計(jì)39人,家系中有5人診斷為感音神經(jīng)性耳聾;家系圖顯示基本符合常染色體顯性遺傳模式;耳聾表型的特點(diǎn)為語后聾,發(fā)病年齡在6~40歲,已知耳聾基因篩查未鑒定出致病突變;選取兩名家系成員進(jìn)行全外顯子組測(cè)序,已獲得初步的候選基因變異位點(diǎn),需進(jìn)一步家系驗(yàn)證。結(jié)論:1、本研究收集的三個(gè)耳聾家系均為非綜合征型常染色體顯性遺傳性耳聾家系;2、三個(gè)家系的已知耳聾相關(guān)基因篩查,均未發(fā)現(xiàn)致病突變;3、HBSY-012家系通過連鎖分析將致病基因定位于第9號(hào)染色體長臂q31.1-q31.3區(qū)段內(nèi)(最大LOD值3.6076),為新定位的耳聾基因座位,暫時(shí)將其編號(hào)為DFNA74,三次全外顯子組測(cè)序均未鑒定出致病突變,考慮致病突變位于基因的非編碼區(qū)域或者罕見的CNV；4、HBSY-013家系全外顯子組測(cè)序目前已得到初步的分析結(jié)果,擴(kuò)大樣本量后完成家系驗(yàn)證,明確家系致病基因;5、HBSY-014家系全外顯子測(cè)序已得到初步的分析結(jié)果,選取候選基因變異,完成家系驗(yàn)證,明確家系致病基因。
【圖文】：

邐６邐極重度邐下降型邐無邐無逡逑３．邋１．２遺傳學(xué)特征分析逡逑根據(jù)家系調(diào)查情況繪制家系圖，見圖３－１�？梢娂蚁倒玻荡�，現(xiàn)存４代共逡逑３４人，具有以下遺傳學(xué)特點(diǎn)：①４代連續(xù)發(fā)��；②每一代中男女均可患病，男逡逑性和女性患者均能將疾病傳給下一代；③每一位耳聾患者的雙親中均有一位耳逡逑聾患者；④家系發(fā)病率高，第二代至第四代直系血緣關(guān)系親屬均為耳聾患者；逡逑⑤第五代中邋Ｖ：ｌｌ、Ｖ：１３、Ｖ：１４、Ｖ：１５、Ｖ：１６、Ｖ：１７、Ｖ：１８邋未達(dá)到發(fā)病年逡逑齡（５？７歲），暫未出現(xiàn)聽力下降情況，將其情況歸為不確定。ＨＢＳＹ－０１２家系逡逑符合典型常染色顯性遺傳特點(diǎn)。逡逑Ｉ邋１邋Ｉ邋２逡逑ＩＩ邋１邋ＩＩ邋２邐ＩＩ邋３邐ＩＩ邋４逡逑ｍｏ邐Ｓ￣ｆ—逡逑１１１：１邐ＩＩＩ邋２邐ｌｌｌ：３邐ＨＩ．４逡逑６￣ｃ邐ｍ0邋４—＾３邐ｔ—ｏ邐ｊｋ￣ｏ逡逑ＩＶ１邐ＩＶ邋２邐ＩＶ邋３邋ＩＶ＇４邐ＩＶ邋５邐ＩＶ邋６邐ＩＶ：７邋ＩＶ邋８邋ＩＶ邋９邋ＩＶ：邋１０邋ＩＶ：邋１１邐ＩＶ１２邐ＩＶ：１３邋ＩＶ１４逡逑口邐ｏ邐□暯－？邐．邐￡ｍ邋ｆｉｏ邋ｉ邋６邐？邋ｌｉｉ邋Ａ邐ｏ邋ｉ逡逑Ｖ．１邐Ｖ：２邐Ｖ．３邐Ｖ．４邋Ｖ５邋Ｖ．ａ邋Ａ、Ｊ１邋Ｖ８邋Ｖ９邋Ｖ．１０邐Ｖ．１１Ｖ．１２Ｖ１３邋Ｖ．１４Ｖ．１５Ｖ１６邋Ｖ．１７邋Ｖ１８逡逑家．系囝說明：□男性，Ｇ女性，＿？耳聾芒者．ＪＺＴ０＂己故？邐先證者逡逑圖３－１丨１ＢＳＹ－０１２家系系譜圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｆａｍｉｌｙ邋ｔｒｅｅ邋ｏｆ邋ＨＢＳＹ－０１２逡逑２１逡逑

３．１．４己知耳聾基因篩查結(jié)果逡逑選取患者Ｖ：邋５進(jìn)行耳聾基因篩查，，發(fā)現(xiàn)ＴＪＰ２基因ｃ．２１４５Ｇ＞Ｃ可疑致病變逡逑異，該基因分析結(jié)果見表３－２，邋ＰＣＲ擴(kuò)增后，通過Ｓａｎｇｅｒ測(cè)序進(jìn)行家系驗(yàn)證，逡逑該變異來源于聽力正常的父親ＩＶ：４，而患者Ｖ：７無該位點(diǎn)改變（如圖３－３）；驗(yàn)逡逑證結(jié)果提示該變異在家系中無共分離現(xiàn)象出現(xiàn)，故不是該家系致病原因，家系逡逑的致聾基因不在篩查范圍以內(nèi)。逡逑表３－２邋ＨＢＳＹ－０１２家系己知耳聾基因篩查結(jié)果逡逑Ｔａｂｌｅ邋３－２邋Ｋｎｏｗｎ邋ｄｅａｆｎｅｓｓ邋ｇｅｎｅ邋ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ＨＢＳＹ－０１２逡逑基因邐染色體位置邐核苷酸變化氨基酸變純化／等位基致病性遺傳逡逑化邋雜合因頻率邋分析邋方式逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R764.431

【參考文獻(xiàn)】

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1 姜海鷗;全慶麗;胡祥上;王義旺;;全外顯子組測(cè)序技術(shù)及其在遺傳性耳聾研究中的應(yīng)用[J];中華耳科學(xué)雜志;2015年01期

2 劉莉揚(yáng);張學(xué)工;;高通量測(cè)序技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2013年16期

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本文編號(hào)：2699182