發(fā)布時間：2020-06-03 16:12

【摘要】：目的:探討誘導缺血再灌注損傷(Retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)對大鼠視網膜硫化氫及相關酶的影響,深入研究青光眼缺血再灌注損傷的發(fā)病機制及為青光眼防治尋找新目標及新靶向。方法:健康SD雄性大鼠80只,10周齡,300-350g。隨機將大鼠分為正常對照組(對照組)8只,視網膜缺血再灌注損傷組(RIRI組)72只。在造模后1h,6h,12h,24h,48h,72h六個時間點分為6組,處死大鼠后,取出完整眼球,冰上去除角膜及晶狀體,剩余部分沿矢狀面分為兩部分:1/2病理學固定后檢測;余1/2分離出視網膜,勻漿后通過酶聯(lián)免疫吸附實驗測定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)法檢測組織硫化氫含量,用逆轉錄聚合酶鏈式反應(Quantitative realtime Polymerase Chain Reaction,q PCR)和蛋白免疫印跡法(Western Boltting,WB)檢測胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS),胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE),半胱氨酸氨基轉移酶(Cysteine aminotranferase,CAT)及3-巰基丙酮酸硫基轉移酶(3-Mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)的m RNA和蛋白表達。結果:(1)病理檢測結果:RIRI后造成GCL層的病理損傷以先水腫后萎縮為主,對照組大鼠視網膜GCL層厚度為12.26±0.73μm;R1組為15.64±0.73μm,R6組為15.37±0.55μm,R12組為19.06±0.33μm,R24組為24.13±0.61μm,R48組為6.90±0.38μm,R72組為3.84±0.45μm。各組GCL層厚度較對照組均有明顯統(tǒng)計學差異(P=0.00)。(2)對照組硫化氫含量為102.91±1.01 pg/ml,RIRI后1h,6h,12h,24h,48h,72h各組分別是100.2±2.13pg/ml,72.5±1.35 pg/ml,99.04±2.05 pg/ml,79.52±1.01pg/ml,106.5±3.57 pg/ml,88.09±2.27 pg/ml。除1h(P=0.11)和48h(P=0.17)外,其余各組硫化氫含量較對照組下降(P=0.00)。(3)q PCR法測定大鼠視網膜CBS、CAT、CSE及3-MST的m RNA表達:CBS組1h,6h,12h,24h,48h,72h分別為:0.10±0.02,0.11±0.01,0.35±0.08,1.00±0.02,0.09±0.04,0.15±0.05,顯著低于正常對照組(所有P=0.00)。CAT組分別為:0.23±0.02,0.50±0.08,0.27±0.06,0.15±0.01,0.14±0.03以及0.34±0.10,顯著低于正常對照組(所有P=0.00)。CSE組6.44±1.94,2.24±0.49,3.32±0.67,1.75±0.55,0.99±0.06,1.87±0.45。除24h(P=0.08)和48h外(P=0.70),其余各組各組表達顯著高于正常對照組(所有P0.05)。3-MST組分別為0.50±0.02,0.64±0.18,0.38±0.04,0.59±0.17,0.59±0.05,0.75±0.08,顯著低于正常對照組(所有P0.05)。(4)WB法檢測CBS,CSE,CAT及3-MST的蛋白表達:RIRI后1h,6h,12h,24h,48h,72h CBS蛋白表達量分別是:0.07±0.01,0.18±0.01,0.04±0.01,0.09±0.13,1.00±0.01,0.38±0.06,顯著低于正常對照組(所有P=0.00)。CAT蛋白表達量分別是:0.34±0.04,0.15±0.02,0.38±0.03,0.51±0.06,0.09±0.00,0.42±0.06,顯著低于正常對照組(所有P=0.00)。CSE蛋白表達量分別是:0.45±0.04,0.21±0.02,0.16±0.02,0.10±0.02,0.06±0.01,0.05±0.01,顯著高于正常對照組(所有P0.05)。3-MST蛋白表達量分別是:0.70±0.01,0.69±0.08,0.08±0.01,0.13±0.01,0.22±0.02,0.32±0.06。除6h(P=0.17)外,其余各組蛋白表達顯著低于正常對照組(所有P0.05)。結論:(1)RIRI后病理結果顯示,GCL層先水腫,后變薄萎縮。在72小時內視網膜隨時間延長炎性細胞浸潤、各層細胞丟失逐漸加重。(2)各組H2S含量較對照組均有不同程度的下降,其中下降最明顯的為6h組。(3)RIRI后大鼠視網膜上硫化氫含量以及CBS、CAT、3-MST含量均有不同程度下降,相反CSE表達增加。推測可能CBS、CAT、3-MST在RIRI后引起的硫化氫生成減少中起到主導作用。
【學位授予單位】：遵義醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R774.1

【參考文獻】

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本文編號：2695072