【摘要】：目的研究高糖誘導人晶狀體上皮細胞(HLECs)氧化應激過程,并探討β-酪啡肽-7(β-CM-7)在人晶狀體上皮細胞氧化應激中的作用及可能機制。方法1、首先應用MTT實驗測定不同濃度的葡萄糖對細胞活力的影響,并篩選出與正常葡萄糖濃度最有統(tǒng)計學意義的葡萄糖濃度組成為高糖組(本實驗我們把mmol/L簡寫為m M),用MTT實驗測定不同濃度的β-CM-7對HLECs活力的影響,并篩選出與之前選擇的高糖組最有統(tǒng)計學意義的濃度組作為β-CM-7組;免疫印跡(Western blot)實驗檢測4個濃度:5m M、10m M、20m M和40m M的葡萄糖對細胞內(nèi)Foxo1和Sp1表達的影響。2、按照處理方式不同分為5組:正常對照組:5m M(control);高糖組:40m M(HG);β-CM-7組:β-CM-7(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)。應用流式細胞術測定氧化應激誘導的活性氧(ROS)含量;生物酶測定試劑盒測定丙二醛(MDA)和抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blot和免疫熒光實驗來確定Foxo1、Sp1和下游相關蛋白GSH-px在分子生物學水平上的表達,Foxo1和Sp1在細胞內(nèi)的定位。結果1、細胞經(jīng)不同濃度葡萄糖處理后,HLECs活力隨葡萄糖濃度增加而降低(P㩳0.01),與正常葡萄糖濃度相比,葡萄糖濃度為40m M時,統(tǒng)計學意義最顯著(P㩳0.01),在葡萄糖濃度為50m M時,細胞不可逆死亡;Western blot結果顯示,在當葡萄糖濃度由5m M增高至40m M時,HLECs的Foxo1、Sp1表達逐漸均減低(P㩳0.01);2、當用β-CM-7(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)預處理后,再用高糖(40m M)處理細胞,與正常對照組相比細胞活力增強(P㩳0.01);與高糖組相比,β-CM-7組ROS、MDA均含量降低(P㩳0.01),SOD表達增高(P㩳0.01);Western blot結果顯示,與高糖組相比,β-CM-7組(10-5mol/L)細胞內(nèi)總Foxo1表達量升高(P㩳0.01),Foxo1轉移至細胞核,細胞核內(nèi)的Foxo1表達量增加(P㩳0.01),細胞質(zhì)內(nèi)的Foxo1表達量降低(P㩳0.01),GSH-Px的表達量增加(P㩳0.01)。免疫熒光可以觀察到與正常對照組相比,高糖組中的Foxo1和Sp1表達非常弱。而細胞用β-CM-7(10-5mol/L)預處理后,Foxo1表達總量高于高糖組,并轉移到細胞核內(nèi),Sp1在細胞核中表達隨Foxo1轉移到細胞核內(nèi)而變強。結論1、高濃度葡萄糖降低HLECs活力,增加氧化酶含量,降低抗氧化酶含量,降低Foxo1和Sp1的相對表達。2、β-CM-7通過上調(diào)Foxo1的相對表達和促進Foxo1核易位來保護HLECs免受氧化損傷。
【圖文】：

（二）β-CM-7 預處理對細胞活力的影響通過 MTT 法篩選β-CM-7 的濃度，與 5mM (control）組相比，40mM (HG)組細胞活力降低（P=0.004）；與 40mM (HG)相比，β-CM-7 組（10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L）細胞活力增強（P=0.003、P=0.000、P=0.000、P=0.008），β-CM-7 組（10-8mol/L）與 40mM (HG)組相比，沒有差異（P=0.061），而β-CM-7 組（10-4mol/L）與β-CM-7 組（10-5mol/L）相比，沒有差異（P=0.056）。如圖 1。

圖 2 Foxo1 和 Sp1 的相對表達及灰度值分析注：Foxo1 的表達量與 5mM(control)組相比，＃P＜0.01；Sp1 的表達量與 5mM(control)組相比，，＊P＜0.01。三、流式細胞術對細胞內(nèi) ROS 的檢測流式細胞術測定細胞在不同處理方式下產(chǎn)生的 ROS 含量，不同組間相比有差異（F=458.24, P=0.000）；與正常對照組相比，高糖組產(chǎn)生的 ROS 顯著增多（P=0.004）；當細胞經(jīng)過不同濃度β-CM-7 預處理后，與高糖組相比，β-CM-7組（10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L）ROS 水平降低（P=0.000、P=0.008、P=0.002）；β-CM-7 三組間比較：與β-CM-7 組（10-5mol/L）相比，β-CM-7 組（10-6mol/L、10-7mol/L）ROS 水平升高（P=0.010、P=0.016）；與β-CM-7 組（10-6mol/L）相比，β-CM-7 組（10-7mol/L）ROS 水平升高（P=0.032）。如圖3、表 1。
【學位授予單位】：錦州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R587.2;R776.1

【參考文獻】

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1 陳寶英;張英;黃勝超;顏澤銘;何敢;;FOXO1在乳腺癌中的表達及臨床意義[J];海南醫(yī)學;2017年09期

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3 高春蘭;張輝;鄒曉燕;張鑫;鄭白蘭;李紅莉;姜怡鄧;;血清同型半胱氨酸水平與外周血中FOXO1DNA甲基化在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的關聯(lián)性研究[J];寧夏醫(yī)科大學學報;2016年12期

4 董笑克;劉銅華;孫文;鄧莉;洪明昭;郭翔宇;;FoxO1對肝臟脂代謝的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2016年28期

5 高燕;袁魯亮;張海松;;β-酪啡肽7對鏈脲佐菌素誘導糖尿病腎病模型大鼠的腎保護[J];中國組織工程研究;2016年05期

6 劉嬋;鄭曉雅;夏佳佳;任偉;李林蔓;劉蘭;;高糖通過下調(diào)FoxO1磷酸化誘導β細胞去分化[J];中國生物化學與分子生物學報;2016年01期

7 李養(yǎng)軍;惠延年;;STZ誘導糖尿病視網(wǎng)膜FOXO1A的表達[J];眼科新進展;2007年07期

本文編號：2677276