【摘要】：背景新生血管性青光眼(neovascularglaucoma,NVG)是一組以虹膜和房角新生血管為主要特點的難治性青光眼。其病因主要是長期的視網(wǎng)膜供血供氧不足、炎癥或手術外傷等,大多繼發(fā)于血管阻塞性疾病和糖尿病視網(wǎng)膜病變,是一種破壞性極強可致盲眼病。NVG的形成是逐漸發(fā)展變化的過程,虹膜新生血管(iris neovascularization,NVI)的形成是NVG發(fā)生的前提,即NVI不及時治療會進展為房角關閉,誘發(fā)眼壓升高而繼發(fā)NVG。大量研究證實,新生血管性青光眼患者的血漿及房水中ET-1及VEGF水平均升高,但具體關系尚不清楚。目的探討缺氧條件下TM與RPE共培養(yǎng)體系中ET-1與VEGF表達量的變化及相互關系。方法分別采取改良組織塊培養(yǎng)法和胰酶消化法提取新鮮牛眼小梁細胞及牛眼視網(wǎng)膜色素上皮細胞,根據(jù)細胞形態(tài)鑒定TM和RPE。將第3代TM細胞接種于6孔Transwell小室下層,將第3代牛眼RPE細胞接種于6孔Transwell小室上層并分為正常對照組、單純?nèi)毖踅M、缺氧+ET-1拮抗劑組、缺氧+VEGF拮抗劑組,分別在2ml培養(yǎng)基中加入40μlPBS、40μlCoCl2工作液(終濃度為200μmol/L)、40μlCoCl2工作液(終濃度為200μmol/L)+2μl內(nèi)皮素受體拮抗劑工作液(終濃度為 10-5μmol/L)、40μlCoCl2工作液(終濃度為 200 μmol/L)+20 μlVEGF 受體拮抗劑工作液(終濃度為10-8μmol/L),繼續(xù)培養(yǎng)24h。選用RT-PCR檢測各組細胞內(nèi)ET-1 mRNA和VEGF mRNA的相對表達量;選用免疫細胞化學法檢測各組細胞內(nèi)抗原水平量的變化。結果RT-PCR檢測結果顯示,ET-1 mRNA的相對表達量正常對照組為0.90 ±0.15、缺氧組為1.77±0.08、缺氧+抗ET-1受體拮抗劑組為0.54±0.04、缺氧+抗VEGF受體拮抗劑組為1.26 ±0.09,每兩組之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。VEGFmRNA的相對表達量對照組為0.99±0.01、缺氧組為1.68±0.06、缺氧+ET-1受體拮抗劑組為1.26 ±0.07、缺氧+VEGF受體拮抗劑組為0.59 ±0.04,每兩組之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫細胞化學結果顯示,ET-1陽性目標積分光密度對照組為44167 ±727.9、缺氧組為80288 ±960、缺氧+ET-1受體拮抗劑組為35672 ± 1090、缺氧+VEGF受體拮抗劑組為54294 ± 1304,每兩組之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。表3-4結果顯示,VEGF陽性目標積分光密度對照組為228264 ± 10021、缺氧組為418205 ± 23377、缺氧+抗ET-1受體拮抗劑組為377198 ± 37025、缺氧+抗VEGF受體拮抗劑組為53873 ±9662,每兩組之間差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論牛眼小梁細胞和視網(wǎng)膜色素上皮細胞共培養(yǎng)體系在缺氧條件下ET-1及VEGF表達水平均上調,分別加入ET-1和VEGF受體拮抗劑后對對方和自身因子的表達呈現(xiàn)不同程度下調作用,推測在新生血管性青光眼發(fā)病過程中ET-1和VEGF之間存在協(xié)同作用。
【圖文】：

濱州醫(yī)學院碩士學位論文逡逑全文附圖逡逑圖１－１原代培養(yǎng)的牛眼小梁細胞（Ｘ邋１００）圖１－２原代培養(yǎng)的牛眼色素上皮細胞（Ｘ邋１００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ邋ｍｅｓｈｗｏｒｋ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘ邋１００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ逡逑ｂｏｖｉｎｅ邋ｒｅｔｉｎａｌ邋ｐｉｇｍｅｎｔ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘｌＯＯ）逡逑Ｈｉ逡逑圖１－３第三代培養(yǎng)的牛眼小梁細胞（Ｘ４００）圖１－４第三代培養(yǎng)的牛眼視網(wǎng)膜色素上皮細胞逡逑（Ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ＢＴＭＣｓ邋（ｘ邋４００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ逡逑ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ＲＰＥ邋

濱州醫(yī)學院碩士學位論文逡逑全文附圖逡逑圖１－１原代培養(yǎng)的牛眼小梁細胞（Ｘ邋１００）圖１－２原代培養(yǎng)的牛眼色素上皮細胞（Ｘ邋１００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ邋ｍｅｓｈｗｏｒｋ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘ邋１００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２邋ｐｒｉｍａｒｙ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ逡逑ｂｏｖｉｎｅ邋ｒｅｔｉｎａｌ邋ｐｉｇｍｅｎｔ邋ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ邋ｃｅｌｌｓ邋（ｘｌＯＯ）逡逑Ｈｉ逡逑圖１－３第三代培養(yǎng)的牛眼小梁細胞（Ｘ４００）圖１－４第三代培養(yǎng)的牛眼視網(wǎng)膜色素上皮細胞逡逑（Ｘ４００）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－３邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ＢＴＭＣｓ邋（ｘ邋４００）邋Ｆｉｇｕｒｅ邋１－４邋ｔｈｅ邋ｔｈｉｒｄ邋ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋ｏｆ逡逑ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｂｏｖｉｎｅ邋ＲＰＥ邋
【學位授予單位】：濱州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R775

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 濮清嵐;吳瑜瑜;林玲;何艷;;腫瘤壞死因子-α對體外培養(yǎng)的人眼小梁細胞基質金屬蛋白酶-3和基層金屬蛋白酶-9表達的影響[J];眼視光學雜志;2007年04期

2 胡義珍;張海江;熊新春;曹陽;;組織型谷氨酰胺轉移酶在牛眼小梁細胞中的表達及意義[J];眼科研究;2005年06期

3 賀翔鴿,李美玉;地塞米松體外抑制人眼小梁細胞生長及表皮生長因子mRNA的表達[J];中華眼科雜志;2001年01期

4 劉濤,張德秀,劉勇,王力,丁海燕;小梁細胞體外培養(yǎng)技術的建立及細胞骨架的形態(tài)學觀察[J];航空航天醫(yī)藥;2000年03期

5 賀翔鴿,李美玉;人眼小梁細胞培養(yǎng)及免疫組化特性研究[J];中華眼科雜志;1998年04期

6 戴惟葭,趙燁德;核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色在人眼小梁細胞生長研究中的應用[J];眼科研究;1999年01期

7 鐘麗春,李美玉;轉化生長因子-β_1對培養(yǎng)的人眼小梁細胞微絲肌動蛋白的影響[J];中華眼科雜志;1999年03期

8 楊新光,張東杲,李美玉;小梁細胞在吞噬過程中自身受損傷的研究[J];眼外傷職業(yè)眼病雜志(附眼科手術);1996年04期

9 尤毓陸，賀圣光，黃旭東，，尤敏，劉曉芳;人眼小梁細胞組織培養(yǎng)及超微結構觀察[J];濰坊醫(yī)學院學報;1996年02期

10 賀翔鴿,李美玉;人眼小梁細胞體外表達表皮生長因子mRNA和表皮生長因子受體[J];中華眼科雜志;1997年06期

相關會議論文 前9條

1 卓業(yè)鴻;侯飛;王莉娜;黃亞琳;葛堅;;地塞米松對人眼小梁細胞連接蛋白表達和細胞骨架的影響研究[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

2 卓業(yè)鴻;侯飛;魏雁濤;李亮;王莉娜;葛堅;;地塞米松對人眼小梁細胞連接蛋白表達的影響研究[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

3 劉旭陽;;The Cytoskeleton of Trabecular Meshwork and Glaucoma Treatment[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

4 劉旭陽;陳曉明;李妮;余曼;;Rho激酶抑制劑H—1152對人眼小梁細胞形態(tài)及細胞骨架影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

5 孫靜;;地塞米松對人眼小梁細胞RhoGDI和RhoA蛋白表達的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

6 袁洪峰;賀翔鴿;;NF—κB對人眼小梁細胞TIGR基因表達調控的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

7 劉婭利;劉旭陽;陳曉明;;糖皮質激素和Rho激酶抑制劑Y-27632對體外培養(yǎng)的人小梁細胞及細胞骨架的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

8 袁洪峰;賀翔鴿;;NF—κB對人眼小梁細胞凋亡的影響[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

9 王錦屏;王雪丁;曾淑君;;抗青光眼藥物與小梁網(wǎng)細胞凋亡的研究[A];海峽兩岸三地藥理學學術報告會論文匯編[C];2001年

相關博士學位論文 前7條

1 周崎;內(nèi)皮細胞白細胞黏附分子-1在小梁細胞的表達和作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2004年

2 李妮;Rho激酶抑制劑H-1152降眼壓作用的實驗研究[D];四川大學;2007年

3 袁洪峰;核因子-κB對人眼小梁細胞生長及分泌功能影響的實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學;2006年

4 王霽雪;氯離子通道在小梁網(wǎng)表達及相關功能的實驗研究[D];吉林大學;2010年

5 曾紅艷;青光安顆粒劑對體外培養(yǎng)小梁細胞凋亡相關基因產(chǎn)物和細胞外基質作用的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學;2007年

6 林芳宇;基于CRISPR/Cas9敲除小梁細胞Atg7后細胞外基質的改變及Melatonin對睫狀體上皮CT流的影響[D];浙江大學;2016年

7 呂瀛娟;維生素D與原發(fā)性開角型青光眼發(fā)病的相關性研究[D];天津醫(yī)科大學;2017年

相關碩士學位論文 前10條

1 孟杰;牛眼小梁細胞與視網(wǎng)膜色素上皮細胞共培養(yǎng)體系在缺氧條件下ET-1和VEGF的表達及相互關系[D];濱州醫(yī)學院;2018年

2 章艷;體外培養(yǎng)人眼小梁細胞血管緊張素Ⅱ的表達[D];華中科技大學;2008年

3 李超;白細胞介素-1β對人眼小梁細胞基質金屬蛋白酶-3表達的影響[D];福建醫(yī)科大學;2008年

4 徐慧;牛眼小梁細胞體外高壓培養(yǎng)模型的建立及中藥滴明眼液有效部位配比研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2006年

5 蘇靜;萊菔硫烷對體外培養(yǎng)牛眼小梁細胞氧還蛋白表達的影響及其機制研究[D];濱州醫(yī)學院;2016年

6 鄭紅梅;體外培養(yǎng)的牛眼小梁細胞血管緊張素轉換酶的表達[D];華中科技大學;2008年

7 王盈盈;茶多酚對POAG來源的小梁細胞抗氧化損傷的實驗研究[D];南昌大學;2013年

8 陳慧;雄激素促進組織型谷氨酰胺轉移酶表達與原發(fā)性開角型青光眼的發(fā)病關系的研究[D];華中科技大學;2007年

9 郭黎霞;正常人和急性閉角型青光眼患者小梁網(wǎng)中一氧化氮合酶的表達[D];河北醫(yī)科大學;2004年

10 喬羽;c-Ski基因對小梁通道房水外流阻力的調控及機制研究[D];瀘州醫(yī)學院;2013年

本文編號：2602935