【摘要】：研究背景:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一種EB病毒(Epstein-Barr virus)相關(guān)的頭頸部腫瘤,具有種族差異和地域分布差異,主要發(fā)生于東亞、東南亞及北非國(guó)家。據(jù)流行病學(xué)估計(jì),2013年中國(guó)鼻咽癌新發(fā)病例及死亡病例分別為42100人、21320人,分別占當(dāng)年癌癥新發(fā)人數(shù)和死亡人數(shù)的1.14%及0.96%。隨著鼻咽癌早期診斷和放化療為主的綜合治療措施的完善,大多數(shù)鼻咽癌患者的病情能得到有效控制,但仍有少部分患者對(duì)放化療抵抗或治療后復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,導(dǎo)致治療效果不佳。經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào)通路與人類多種惡性腫瘤的發(fā)生與演進(jìn)密切相關(guān),其下游核心分子β-catenin具有雙重作用。正常情況下,β-catenin水平受負(fù)性降解復(fù)合體(Axin、APC、GSK3β、CK1α)調(diào)節(jié),β-catenin被GSK3β磷酸化后,可被泛素蛋白酶體降解;由于缺少β-catenin,LEF/TCF能利用自身的HMG盒與其他蛋白結(jié)合,不發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用,亦可通過(guò)轉(zhuǎn)錄阻抑蛋白結(jié)合靶基因啟動(dòng)子,從而抑制靶基因轉(zhuǎn)錄。當(dāng)Wnt與Frizzed和LRP5/6受體結(jié)合后,GSK3β的活性被抑制,從而抑制β-catenin磷酸化,導(dǎo)致β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)聚集,激活LEF/TCF轉(zhuǎn)錄復(fù)合體,上調(diào)其下游CCND1、MMP7、MYCL1、和AXIN2等基因的表達(dá),從而抑制腫瘤細(xì)胞凋亡,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。LEF/TCF作為經(jīng)典的Wnt/β-catenin信號(hào)通路的重要組成部分,在人類多種惡性腫瘤中都存在異常。免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry,IHC)檢測(cè)LEF和TCF蛋白的表達(dá)主要集中在結(jié)直腸癌、白血病、乳腺癌等惡性腫瘤。僅極少數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道LEF1及TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌組織中存在異常表達(dá)。查閱近年的文獻(xiàn),目前沒有檢索到運(yùn)用IHC手段同時(shí)檢測(cè)和研究LEF1和TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌組織中表達(dá)的相關(guān)報(bào)道�；谏鲜鲅芯勘尘�,本課題收集了391例鼻咽癌組織、53例非癌患者的鼻咽粘膜組織及28對(duì)(56例)鼻咽原發(fā)癌及其相匹配的鼻咽轉(zhuǎn)移癌組織,IHC分別檢測(cè)LEF1、TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌組織及非癌鼻咽粘膜組織中單獨(dú)及共同表達(dá)水平、在鼻咽原發(fā)癌和其相匹配的轉(zhuǎn)移癌組織中的單獨(dú)及共同表達(dá)水平,多種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析LEF1和TCF1(TCF7)蛋白單獨(dú)表達(dá)和共同表達(dá)水平與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系,旨在初步探討LEF1和TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,分析評(píng)估其能否作為鼻咽癌診斷、治療和預(yù)后判斷的新型獨(dú)立分子標(biāo)志物。研究方法:隨機(jī)抽取中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院病理科組織標(biāo)本庫(kù)中2000年1月至2009年12月間391例鼻咽癌組織、53例非癌患者的鼻咽粘膜組織和28對(duì)(56例)鼻咽原發(fā)癌及其相匹配的鼻咽轉(zhuǎn)移癌組織,所有鼻咽癌患者均具有完整的臨床隨訪資料,而且全部患者活檢前均未進(jìn)行化療或放療。IHC檢測(cè)LEF1和TCF1(TCF7)蛋白在鼻咽癌、非癌鼻咽粘膜、鼻咽原發(fā)癌和其相匹配的鼻咽轉(zhuǎn)移癌組織中的表達(dá)(單獨(dú)表達(dá)及共同表達(dá)),以LEF1和TCF1(TCF7)陽(yáng)性表達(dá)的喉部低分化鱗狀細(xì)胞癌組織作為每次實(shí)驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照,PBS代替一抗作為每次實(shí)驗(yàn)的陰性對(duì)照。多種高級(jí)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析鼻咽癌組織中LEF1和TCF1(TCF7)蛋白的表達(dá)水平及其與鼻咽癌患者臨床病理特征和預(yù)后的相關(guān)性。以雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn),P0.05確定差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:(1)鼻咽癌組織中LEF1和TCF1(TCF7)蛋白的表達(dá)水平(單獨(dú)表達(dá)及共同表達(dá))均明顯高于非癌鼻咽粘膜組織(P0.001、P0.001、P0.001)。(2)LEF1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的鼻咽癌患者容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001),其臨床分期更晚(P0.001),死亡率更高(P0.001)。但TCF1(TCF7)蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者的性別、年齡、組織學(xué)分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期以及生存狀態(tài)均無(wú)顯著相關(guān)性(P0.05)。(3)LEF1和TCF1(TCF7)蛋白共同陽(yáng)性的鼻咽癌患者容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.020),其臨床分期更晚(P=0.027),死亡率更高(P=0.004)。(4)鼻咽轉(zhuǎn)移癌組織中LEF1蛋白陽(yáng)性率及LEF1、TCF1(TCF7)蛋白共同陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于其匹配的鼻咽原發(fā)癌(P0.001、P=0.003)。(5)鼻咽癌組織中LEF1與TCF1(TCF7)蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.103,P0.030)。(6)Kaplan-Meier生存曲線和log-rank檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示:LEF1蛋白陽(yáng)性及LEF1和TCF1(TCF7)蛋白共同陽(yáng)性的鼻咽癌患者總生存時(shí)間短(P0.001,P=0.002),但TCF1(TCF7)蛋白表達(dá)與鼻咽癌患者的總生存時(shí)間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性(P=0.416)。(7)多因素Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸分析結(jié)果顯示:除鼻咽癌的臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移外(P=0.047、P=0.019),LEF1蛋白可作為判斷鼻咽癌患者預(yù)后的獨(dú)立分子標(biāo)志物(P0.001)。結(jié)論:1、鼻咽癌組織中LEF1、TCF1(TCF7)蛋白表達(dá)水平(單獨(dú)表達(dá)及共同表達(dá))均顯著高于非癌鼻咽粘膜組織,且二者在鼻咽癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān),提示LEF1和TCF1(TCF7)蛋白可能協(xié)同促進(jìn)鼻咽癌的發(fā)生。2、鼻咽轉(zhuǎn)移癌組織中LEF1蛋白表達(dá)顯著高于其匹配的鼻咽原發(fā)癌;LEF1蛋白陽(yáng)性及LEF1和TCF1(TCF7)蛋白共同陽(yáng)性的鼻咽癌患者容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,總生存時(shí)間短,提示LEF1和TCF1(TCF7)蛋白可能具有促進(jìn)鼻咽癌臨床進(jìn)展的作用,患者預(yù)后差。3、LEF1蛋白有可能作為獨(dú)立判斷鼻咽癌預(yù)后的新型分子標(biāo)志物。
【圖文】：

新疆醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文13圖1 具有完整臨床資料及隨訪資料的391例鼻咽癌病人信息（部分）2.2.2 H&E 染色方法（1）烤片：切片置于75℃烤箱內(nèi)，等待35分鐘以上使石蠟徹底熔解。（2）脫蠟及水化：切片按照以下順序依次經(jīng)過(guò)：松節(jié)油Ⅰ10分鐘 松節(jié)油Ⅱ 10分鐘 無(wú)水乙醇5分鐘 75%乙醇5分鐘 自來(lái)水 蒸餾水5分鐘（注意：應(yīng)迅速將切片從烤箱中拿出放入松節(jié)油，以免切片冷卻影響脫蠟效果）。（3）細(xì)胞核染色：切片置于蘇木素中染色8分鐘，自來(lái)水清洗5分鐘后放入1%鹽酸酒精內(nèi)2秒鐘，再用自來(lái)水洗5分鐘（根據(jù)蘇木素使用時(shí)間、次數(shù)、當(dāng)日室溫等，蘇木素染色時(shí)間可相應(yīng)延長(zhǎng)或縮短）。（4）細(xì)胞漿染色：切片置于0.5%伊紅酒精溶液染色5秒鐘，自來(lái)水沖洗5分鐘。（5）脫水、封片：瀝干切片上的自來(lái)水，，將切片置于梯度乙醇及松節(jié)油中脫水并透明：70%乙醇2分鐘 80%乙醇2分鐘 95%乙醇2分鐘 無(wú)水乙醇Ⅰ 2分鐘 無(wú)水乙醇Ⅱ 2分鐘 松節(jié)油Ⅰ 10分鐘 松節(jié)油Ⅱ 10分鐘

18圖2 IHC檢測(cè)LEF1蛋白在鼻咽癌和非癌鼻咽粘膜組織中的表達(dá)情況LEF1 蛋白實(shí)驗(yàn)濃度為 1:50；鼻咽癌（A.+++;B.++;C.+;D.-）；非癌鼻咽粘膜組織（E.+;F.-）;（IHC，DAB 顯色，200×）。
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.63

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2 黎騁;鄭裕明;郭俊宇;馬麗萍;陸愛英;湯敏中;吳惠惠;蔡永林;;鼻咽癌組織中多聚免疫球蛋白受體的表達(dá)及意義[J];山東醫(yī)藥;2015年46期

3 葉浩昕;范紹

本文編號(hào)：2595460