發(fā)布時間：2020-03-20 22:06

【摘要】：目的:白內(nèi)障是全球高發(fā)的主要致盲眼病,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,其發(fā)生的分子機(jī)制一直是研究熱點(diǎn)。正常晶狀體本身透明,其結(jié)構(gòu)與組成成分單純,無血供,由晶狀體囊膜、晶狀體上皮細(xì)胞和最終分化形成的晶狀體纖維組成。近年來研究發(fā)現(xiàn),骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)在眼部組織有豐富表達(dá),尤其在晶狀體的發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用~([1])。有研究顯示,鼠晶狀體在發(fā)生發(fā)育過程中存在BMPs及其受體(BMPRⅠA和BMPRⅡ)的表達(dá)。在BMPⅠ型受體Acvr1敲除的小鼠,其晶狀體形成后形態(tài)較正常要小~([2])。在鼠胚胎中,目的性BMP-7基因的缺陷或失活,不僅影響胚眼晶狀體泡和晶狀體板的正常發(fā)育,也影響視泡和外胚葉的正常發(fā)育,而后兩者對于晶狀體的形成是必需的~([3])。但是在晶狀體發(fā)育成熟后,BMPs信號是否參與了晶狀體疾病的發(fā)生,目前的研究并不明了�，F(xiàn)有的關(guān)于白內(nèi)障發(fā)病機(jī)制的大量研究顯示:白內(nèi)障的發(fā)生與氧化損傷、自由基產(chǎn)生、晶體蛋白的改變以及人晶狀體上皮細(xì)胞(Human lens epithelia cells,HLEC)的凋亡有關(guān)。因而,本課題旨在探究在晶狀體發(fā)育過程中起重要作用的BMPs是否在晶狀體發(fā)育成熟進(jìn)而在白內(nèi)障的發(fā)生過程中,其依然對晶體上皮細(xì)胞有調(diào)控作用。本課題通過觀察BMPs在人晶狀體組織中的表達(dá)特點(diǎn),以及BMPs對正常和應(yīng)激狀態(tài)下人晶狀體上皮細(xì)胞的影響,探討B(tài)MPs對人晶狀體上皮細(xì)胞的作用機(jī)制,為白內(nèi)障發(fā)生的分子機(jī)制提供新的思路和理論依據(jù)。方法:1.取白內(nèi)障患者混濁晶狀體的囊膜、皮質(zhì)和核,應(yīng)用免疫組化染色檢測囊膜BMP-4和BMP-7的表達(dá),應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)檢測皮質(zhì)和核的BMP-4和BMP-7的表達(dá),觀察白內(nèi)障患者晶狀體組織BMP-4和BMP-7在不同部位的差異化表達(dá)特點(diǎn);2.體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞系(HLE-B3),應(yīng)用CCK-8法、細(xì)胞劃痕實驗觀察BMP-4和BMP-7對人晶狀體上皮細(xì)胞的作用;3.體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞系(HLE-B3),并建立應(yīng)激(熱刺激、紫外線照射、過氧化氫)細(xì)胞模型,應(yīng)用CCK-8檢測BMP-4和BMP-7對人晶狀體上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響,進(jìn)一步檢測H_2O_2誘導(dǎo)下以及BMP-4/7作用下凋亡蛋白Caspase-3和活性氧(ROS)的表達(dá);4.使用RT-PCR和免疫熒光檢測BMP-4和BMP-7對氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞凋亡的作用及其與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激之間的關(guān)系;結(jié)果:1.在老年性白內(nèi)障患者的混濁晶狀體中,囊膜、皮質(zhì)和核中均有BMP-4和BMP-7的表達(dá),且不同部位的BMP-4和BMP-7表達(dá)不同,由外到內(nèi)(從皮質(zhì)到核),BMP-4和BMP-7的表達(dá)呈下降趨勢;2.在正常狀態(tài)下,BMP-4和BMP-7對人晶狀體上皮細(xì)胞的增殖無明顯作用,但能夠明顯抑制人晶狀體上皮細(xì)胞的遷移;3.在氧化應(yīng)激下,BMP-4和BMP-7能明顯抑制人晶狀體上皮細(xì)胞的凋亡,降低凋亡蛋白Caspase-3和活性氧(ROS)的表達(dá);4.人晶狀體上皮細(xì)胞在氧化應(yīng)激狀態(tài)下引發(fā)了ATF-6通路的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激級聯(lián)反應(yīng),導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,BMP-4和BMP-7能有效抑制ATF-6的基因表達(dá)水平,通過對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)控發(fā)揮其保護(hù)作用。結(jié)論:BMP-4和BMP-7能夠維持晶狀體上皮細(xì)胞生理活動的穩(wěn)態(tài),在氧化應(yīng)激作用下,誘發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激導(dǎo)致晶狀體上皮細(xì)胞凋亡,BMP-4和BMP-7能夠有效地抑制凋亡,降低凋亡產(chǎn)物的表達(dá),發(fā)揮保護(hù)作用。
【圖文】：

論文 一、白內(nèi)障患者晶狀體不同部位 BM狀體皮質(zhì)和核中 BMP-4 的表達(dá)，，在老年性白內(nèi)障晶狀體和老年性白內(nèi)障-4 的表達(dá)水平明顯高于核，差異有統(tǒng)計學(xué)人群之間皮質(zhì)和核中 BMP-4 的表達(dá)結(jié)果

1.1 白內(nèi)障患者晶狀體中 BMP-4 的表狀體皮質(zhì)和核中 BMP-7 的表達(dá)在老年性白內(nèi)障晶狀體中 BMP-7 有表在老年性白內(nèi)障合并高度近視晶狀體中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）（見圖 1P-7 的表達(dá)結(jié)果無差異（p>0.05）。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R776.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 馮驍;田聆;黃倩;;Caspase-3基因表達(dá)調(diào)控研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2014年09期

2 張軍;黃才國;李聞捷;汪佳祺;;βB2晶體蛋白基因敲除小鼠模型的建立[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年11期

3 Rafnsson V;Olafsdottir E;Hrafnkelsson J;韓靜;;宇宙輻射可升高飛行員發(fā)生核性白內(nèi)障的風(fēng)險:一項基于人群病例對照研究[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘.眼科學(xué)分冊;2005年12期

本文編號：2592271