【摘要】：第一章：氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變模型鼠視網(wǎng)膜中蛋白激酶B(Akt)表達(dá)的動態(tài)變化 目的：檢測氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜Akt和磷酸化Akt(pAkt)的蛋白及(Akt)mRNA表達(dá),探討其動態(tài)變化和意義。 方法：出生后第7(P7)天的C57/BL6小鼠102只隨機(jī)分為模型組(51只)正常組(51只),模型組小鼠和母鼠一起放入氧氣含量為(75%±2%)的飼養(yǎng)箱中飼養(yǎng)5天,第12天(P12)回到正常大氣環(huán)境中飼養(yǎng)。正常組小鼠和母鼠一直置于正常大氣環(huán)境中飼養(yǎng)。第17天取模型組和正常組各3只小鼠分別做FITC-Dextran造影視網(wǎng)膜鋪片。分別提取模型組和正常組小鼠出生后在第7(P7),9(P9),11(P11)天3個時間點,和第12(P12),14(P14),16(P16),17(P17),23(P23)天5個時間點(每組每個時間點各3只小鼠)的視網(wǎng)膜總RNA及蛋白,用Western blot及RT-PCR技術(shù)檢測視網(wǎng)膜組織中Akt表達(dá)的動態(tài)變化。 結(jié)果：FITC-Dextran造影視網(wǎng)膜鋪片示：與正常組小鼠視網(wǎng)膜比較,模型組小鼠可見到圍繞著視乳頭有大面積的無灌注區(qū),血管高度不規(guī)則擴(kuò)張,走形迂曲,有新生血管叢,并可見熒光滲漏。 模型組鼠視網(wǎng)膜組織中的(Akt)mRNA在第7(P7),9(P9),11(P11)天灰度值分別為0.096±0.012、0.056±0.011、0.021±0.010(P＜0.05),呈下降趨勢；而在第12(P12),14(P14),16(P16),17(P17),23(P23)天灰度值分別為0.278±0.014、0.524±0.015、0.659±0.013、0.842±0.016、0.421±0.002(P＜0.05),呈上升趨勢,并在P17達(dá)到高峰。在正常組中(Akt)mRNA的表達(dá)無明顯趨勢(P＞0.05)。 模型鼠視網(wǎng)膜組織中Akt蛋白質(zhì)表達(dá)水平第7(P7),9(P9),11(P11)天灰度值分別為1.080±0.210、0.535±0.152、0.206±±0.124(P＜0.05),呈下降趨勢；而在第12(P12),14(P14),16(P16),17(P17),23(P23)天灰度值分別為0.249±0.110、0.481±0.152、0.704±0.240、0.978±0.270、0.491±0.161(P＜0.05),呈上升趨勢,并在P17達(dá)到高峰。在正常組中Akt蛋白質(zhì)的表達(dá)無明顯趨勢(P＞0.05)。 模型鼠視網(wǎng)膜組織中p-Akt蛋白質(zhì)表達(dá)水平第7(P7),9(P9),11(P11)天灰度值分別為0.864±0.141、0.482±0.110、0.162±0.082(P＜0.05),呈下降趨勢；而在第12(P12),14(P14),16(P16),17(P17),23(P23)天灰度值分別為0.086±0.013、0.099±0.017、0.164±0.021、0.208±0.031、0.042±0.014(P＜0.05),呈上升趨勢,并在P17達(dá)到高峰。在正常組中p-Akt蛋白質(zhì)的表達(dá)無明顯趨勢(P＞0.05)。 結(jié)論：(Akt)mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)水平在氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變小鼠視網(wǎng)膜中,高氧環(huán)境下明顯下降,在缺氧環(huán)境下明顯上調(diào)。 第二章：外源性Akt抑制高氧環(huán)境下誘發(fā)的鼠視網(wǎng)膜血管丟失的研究 目的：檢測活性重組體Akt對高氧環(huán)境下視網(wǎng)膜血管丟失的抑制作用,探討Akt信號通路對視網(wǎng)膜血管的保護(hù)作用。 方法：在P6和P7天,C57/BL6小鼠8只通過腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉,并隨機(jī)分為實驗組和對照組各4只。實驗組小鼠4只于玻璃體腔內(nèi)注射1ul活性重組體Akt,對照組小鼠4只玻璃體腔內(nèi)注射PBS。將兩組小鼠共8只置于濃度為75%±2%高氧艙環(huán)境中生活。在P8天,FITC-dextran左心室造影視網(wǎng)膜鋪片了解視網(wǎng)膜的無灌注區(qū)的改變。 結(jié)果：實驗組小鼠玻璃體腔內(nèi)注射活性重組體Akt后,視網(wǎng)膜鋪片結(jié)果顯示無灌注區(qū)面積/全視網(wǎng)膜面積為32%,對照組玻璃體腔內(nèi)注射PBS后無灌注區(qū)面積/全視網(wǎng)膜面積為13%。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：高氧環(huán)境下運用外源性Akt矯正Akt的缺乏能夠抑制視網(wǎng)膜血管的丟失,減少無灌注區(qū)。 第三章：Akt抑制劑在低氧環(huán)境下抑制鼠視網(wǎng)膜新生血管形成的研究 目的：觀察Akt抑制劑(1L-6-hydroxymethyl-chiro-inositol2-(R)-2-O-methyl-3-Ooctadecylcarbonate)對低氧環(huán)境下視網(wǎng)膜新生血管形成的抑制作用,探討Akt活性的抑制對于新生血管抑制的作用。 方法：將鼠齡為7天的C56BL/6小鼠14只置于濃度為75%±2%高氧艙環(huán)境中生活5天,然后返回正常氧環(huán)境中。小鼠于出氧艙后當(dāng)日被隨機(jī)分為實驗組和對照組各7只,實驗組小鼠玻璃體腔內(nèi)注射1.5ulAkt抑制劑,對照組小鼠玻璃體腔內(nèi)注射1.5ulPBS。在P17天,實驗組和對照組各取4只小鼠FITC-dextran左心室造影視網(wǎng)膜鋪片了解視網(wǎng)膜的血管形態(tài)的改變。實驗組及對照組各3只小鼠組織學(xué)切片觀察突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)量。 結(jié)果：視網(wǎng)膜鋪片結(jié)果顯示實驗組視網(wǎng)膜新生血管的面積/全視網(wǎng)膜面積為6%,對照組的視網(wǎng)膜新生血管的面積/全視網(wǎng)膜面積為14%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。但兩組的無灌注區(qū)無明顯差異(實驗組無灌注區(qū)面積/全視網(wǎng)膜面積為21%,對照組無灌注區(qū)面積/全視網(wǎng)膜面積為22%,P＞0.05)；組織學(xué)切片結(jié)果表明與對照組相比較,Akt抑制劑注射實驗組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)量明顯減少,實驗組突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)量為17個,對照組為51個。差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 結(jié)論：在缺氧環(huán)境下運用Akt抑制劑能夠抑制視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)生但不減少無灌注區(qū)。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R774.1

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 韓越博;大鼠帶瓣血管液氮凍存時間對其活性和組織中IGF-I水平的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

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本文編號：2580119