發(fā)布時間：2020-02-12 20:28

【摘要】： 背景和目的 視網(wǎng)膜中央動脈阻塞(central retinal artery occlusion, CRAO)是一種嚴重的致盲性眼病,是急性視網(wǎng)膜缺血性病變,目前尚無理想的治療方法。Schmidt等1992首次應(yīng)用尿激酶選擇性眼動脈溶栓技術(shù)治療CRAO獲得初步的效果,患者的視網(wǎng)膜水腫減輕、缺血改善、視力顯著提高。隨著方法不斷改進,有研究顯示局部介入動脈內(nèi)溶栓治療能明顯改善視力,但臨床有發(fā)生偏癱等嚴重并發(fā)癥的報道。這些嚴重的系統(tǒng)并發(fā)癥是由于尿激酶的作用范圍太廣產(chǎn)生的,如果能使尿激酶的作用僅局限在眼內(nèi),就能有效的避免中樞神經(jīng)系統(tǒng)的嚴重并發(fā)癥。 尿激酶(Urokinase, UK)是目前臨床應(yīng)用最廣泛的溶栓藥,用于前房沖洗、結(jié)膜下注射等局部治療未見發(fā)生嚴重并發(fā)癥的報道。UK屬于非纖維蛋白特異性纖溶酶原激活劑,具有半衰期短但降解纖維蛋白原和凝血因子的作用卻能持續(xù)達12-24小時之久的特點,而且對人體無抗原性,不會引起過敏反應(yīng)。 Kamei等曾報道玻璃體腔內(nèi)注射纖溶酶原激活劑能穿透家兔視網(wǎng)膜,并溶解視網(wǎng)膜下血凝塊,未見明顯副作用。但是玻璃體腔注射纖溶酶原激活劑能否治療視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病,目前尚不清楚。 我們假設(shè)存在玻璃體腔注射UK的技術(shù)治療視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病的可能性,首先要觀察UK能否進入視網(wǎng)膜血管內(nèi)。本研究通過對兔眼進行視神經(jīng)結(jié)扎后玻璃體腔內(nèi)注射尿激酶,觀察尿激酶的對視網(wǎng)膜血管的穿透能力,從而為玻璃體腔注射UK治療視網(wǎng)膜血管阻塞性疾病奠定基礎(chǔ)。 材料與方法 方法選用健康成年家兔54只,隨機分為A、B、C、三組,每組18只,A、B組為實驗組,C組為對照組,均以右眼為實驗眼。 A組對家兔視神經(jīng)進行結(jié)扎,然后玻璃體腔內(nèi)注射濃度容量為5000U/0.1ml的尿激酶(Urokinase, UK), B組不做視神經(jīng)處的結(jié)扎處理,直接在玻璃體腔內(nèi)注射濃度容量為5000U/0.1 ml的尿激酶(Urokinase, UK), C組直接在玻璃體腔內(nèi)注射0.1ml磷酸緩沖液(Phosphate Buffered Saline, PBS)。 以玻璃體腔內(nèi)注射后24小時為觀察時間點,A、B組分別隨機選取10只家兔,C組隨機選取2只家兔摘除眼球,制作視網(wǎng)膜組織的石蠟切片,進行視網(wǎng)膜組織常規(guī)病理檢查和免疫組織化學(xué)染色觀察尿激酶的滲透能力,使用Nikon DS-Ril生物顯微鏡進行圖像采集并用及Image-Pro Plus 6.0醫(yī)學(xué)專業(yè)圖像分析軟件計算切片中每個血管染色的平均光密度(Mean Optical Density, MOD)值。 統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析,采用兩獨立樣本的檢驗(t檢驗)比較,檢驗水準為a=0.05。 結(jié)果 1.滲透進入視網(wǎng)膜血管中UK的定性與定位表達：C組及實驗組陰性對照切片的血管腔中均未見陽性表達的棕黃色顆粒,A、B組的免疫組織化學(xué)染色的切片中可見陽性表達的棕黃色顆粒, A組陽性表達定位主要在視網(wǎng)膜血管壁、血管腔內(nèi)和視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層、神經(jīng)節(jié)細胞層、內(nèi)叢狀層、內(nèi)核層、外叢狀層及外核層。B組均可見沿內(nèi)界膜表面呈棕黃色的帶狀分布,在視網(wǎng)膜血管壁及其他層次內(nèi)也可以見棕黃色顆粒。 2.UK的視網(wǎng)膜血管穿透能力分析：A組免疫組織化學(xué)染色切片中可見視網(wǎng)膜血管腔和其他各層內(nèi)有棕黃色顆粒, B組免疫組織化學(xué)染色切片均可見沿內(nèi)界膜表面呈棕黃色的帶狀分布,在視網(wǎng)膜血管壁及其他層次內(nèi)也可以見棕黃色顆粒,但是視網(wǎng)膜血管腔內(nèi)未見棕黃色顆粒。 玻璃體腔內(nèi)注射相同藥物濃度和作用時間A組與B組間視網(wǎng)膜血管穿透能力的比較：視神經(jīng)結(jié)扎和無視神經(jīng)結(jié)扎因素,兩組間UK的視網(wǎng)膜血管穿透能力的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=14.603,p0.05)。 3.尿激酶的視網(wǎng)膜毒性作用：C組家兔視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)完整,各層次結(jié)構(gòu)完整,排列整齊規(guī)則。B組視網(wǎng)膜表面光滑,視網(wǎng)膜各層分界清晰,外核層細胞數(shù)量有減少,內(nèi)外核層細胞核間隙稍稀疏,其余層次未見明顯變化�？梢�5000U/0.1ml的尿激酶對視網(wǎng)膜組織有一定的毒性作用。 結(jié)論 1.兔眼視神經(jīng)結(jié)扎后1小時玻璃體腔內(nèi)注射的尿激酶,24小時后能夠穿透視網(wǎng)膜血管壁進入視網(wǎng)膜血管腔內(nèi)。 2.尿激酶對視網(wǎng)膜組織有一定的毒性作用。
【圖文】：

圖H.視神經(jīng)結(jié)扎組(A組)可見視網(wǎng)膜靜脈血管腔內(nèi)有陽性表達的棕黃色顆粒。免疫組化染色(X400)圖12.無視神經(jīng)結(jié)扎組(B組)光鏡卜可見沿內(nèi)界膜表面陽性表達的棕黃色顆粒呈帶狀分布，在視網(wǎng)膜血管壁及其他層次內(nèi)也可以見棕黃色顆粒，但是視網(wǎng)膜血管腔內(nèi)未見棕黃色顆粒。免疫組化染色(x4OO)

圖H.視神經(jīng)結(jié)扎組(A組)可見視網(wǎng)膜靜脈血管腔內(nèi)有陽性表達的棕黃色顆粒。免疫組化染色(X400)圖12.無視神經(jīng)結(jié)扎組(B組)光鏡卜可見沿內(nèi)界膜表面陽性表達的棕黃色顆粒呈帶狀分布，在視網(wǎng)膜血管壁及其他層次內(nèi)也可以見棕黃色顆粒，但是視網(wǎng)膜血管腔內(nèi)未見棕黃色顆粒。免疫組化染色(x4OO)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R774.1

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張勇全;磁性藥物靶向遞送中藥物捕獲效率建模及影響因素分析[D];上海交通大學(xué);2012年

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本文編號：2578932