【摘要】：第一部分間歇低氧對大鼠血清HDL及肝臟PPARa. ABCA1表達的影響 目的： 本實驗旨在動物水平上模擬體內(nèi)間歇低氧狀態(tài),通過對雄性SD大鼠的慢性間歇性低氧及復(fù)氧干預(yù),探討間歇性低氧對大鼠血脂的影響,在組織水平上,檢測肝臟HDL代謝相關(guān)代謝指標(biāo)PPARα、ABCA1的變化,觀察目的指標(biāo)在不同間歇缺氧濃度及對應(yīng)復(fù)氧組中表達的差異,進而了解低氧與脂質(zhì)代謝的關(guān)系,初步探討復(fù)氧后上述指標(biāo)恢復(fù)情況及可能機制,尋找對間歇低氧刺激敏感的靶指標(biāo),為疾病的早期診斷、早期干預(yù)提供新的思路及實驗依據(jù)。 方法： 建立間歇低氧大鼠模型并隨機分為6組,即對照3周組,對照6周組,10%間歇低氧3周(10%CIH-3)組,5%間歇低氧3周(5%CIH-3)組,10%復(fù)氧-6組即給予10%CIH處理3周后轉(zhuǎn)為常氧恢復(fù)3周,5%復(fù)氧-6組即給予5%CIH處理3周后轉(zhuǎn)為常氧恢復(fù)3周共6組,比較各組血脂有無差異；并觀察各組大鼠肝組織形態(tài)改變,比較各組大鼠肝臟PPARα、ABCA1表達有無差異(免疫組化法)。 結(jié)果： 一、血脂分析： 1、間歇低氧組大鼠血CHOL水平較對照組明顯升高(10%CIH-3周:2.46±0.14VS2.09±0.18mmol/L;5%CIH-3周2.26±0.10vs2.09±0.18mmol/L;P0.01);復(fù)氧組大鼠血CHOL水平較CIH組明顯降低(10%復(fù)氧-6周VS10%CIH-3:1.63±0.05VS2.46±0.14mmol/L;5%復(fù)氧-6周VS5%CIH-3:1.70±0.22VS2.26±0.10mmol/L;P0.01);10%復(fù)氧-6組大鼠血CHOL較對照-6組(1.63±0.05VS1.67±0.24mmol/L, P0.05)無顯著性差異,認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平；5%復(fù)氧-6組大鼠血CHOL與對照-6組無顯著性差異(1.70±0.22VS1.67±0.24mniol/L, P0.05),認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。 2、與對照組大鼠比較,各組間TG無統(tǒng)計學(xué)差異(p0.05)； 3、10%CIH-3組大鼠血LDL-C水平較對照-3組明顯升高(0.33±0.06VS0.23±0.05mmol/L, P0.01);5%CIH-3組大鼠血LDL-C水平較對照-3組明顯升高(0.35±0.03VS0.26±0.05mmol/L,P0.01); 復(fù)氧組大鼠血LDL-C水平較CIH組明顯降低(10%復(fù)氧-6周VS10%CIH-3:0.24±0.02VS0.33±0.06mmol/L;5%復(fù)氧-6周VS5%CIH-3:0.19±0.03VS0.35±0.03mmol/L; P0.01); 10%復(fù)氧-6組大鼠血LDL-C較對照-6組升高但無顯著性差異,認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平(0.24±0.02VS0.20±0.03mmol/L, P0.01);5%復(fù)氧-6組大鼠血LDL-C較對照-6組升高但無顯著性差異,認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平(0.19±0.03VS0.20±0.03mmol/L, P0.01)o 4、間歇低氧組大鼠血HDL-C水平對照組明顯降低(10%CIH-3:0.40±0.05VS0.53±0.05mmol/L;5%CIH-3:0.34±0.04VS0.53±0.06mmol/L,P0.01);復(fù)氧組大鼠血HDL-C水平較CIH組明顯升高(10%復(fù)氧-6周VS10%CIH-3:0.52±0.04VS0.40±0.05mmol/L;5%復(fù)氧-6周VS5%CIH-3:0.48±0.04VS0.34±0.04mmol/L; P0.01)；10%復(fù)氧-6組大鼠血HDL-C較對照-6組(0.52±0.04VS0.49±0.06mmol/L, p0.05)無顯著性差異,認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平；5%復(fù)氧-6組大鼠血HDL-C與對照-6組組無顯著性差異(0.48土0.04VS0.49±0.05mniol/L, P0.05),認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。 三、PPARα、ABCA1免疫組化結(jié)果： 1、間歇低氧組大鼠PPARα較對照組明顯降低(10%CIH-3:132.85±4.56VS178.553±2.63;5%CIH-3:102.40±4.06VS180.42±2.58,P0.01);復(fù)氧組大鼠PPARα較CIH組明顯升高(10%復(fù)氧-6周VS10%CIH-3:175.23±5.34VS132.85±4.56;5%復(fù)氧-6周VS5%CIH-3:168.70±6.12VS102.40±4.06; P0.01);10%復(fù)氧-6組大鼠PPARα較對照-6組(175.23±5.34VS180.42±2.58, p0.05)無顯著性差異,認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平；5%復(fù)氧-6組大鼠PPARα較對照-6組無顯著性差異(168.70±6.12VS180.42±2.58,P0.05),認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。 2、間歇低氧組大鼠ABCA1較對照組明顯降低(10%CIH-3:202.85±12.50VS318.62±13.60;5%CIH-3:172.24±9.08VS330.42±13.57,P0.01);復(fù)氧組大鼠ABCA1較CIH組明顯升高(10%復(fù)氧-6周VS10%CIH-3:305.22±15.24VS202.85±12.50; P0.01;5%復(fù)氧-6周VS5%CIH-3:301.72±12.22VS172.24±9.08; P0.01)；10%復(fù)氧-6組大鼠ABCA1較對照-6組(305.22±15.24VS330.42±13.57(p0.05)無顯著性差異,認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平；5%復(fù)氧-6組大鼠ABCA1與對照-6組無顯著性差異(301.72士12.22VS330.42±13.57,P0.05),認(rèn)為恢復(fù)至常氧水平。 結(jié)論： 1、OSAHS模式的CIH大鼠模型可致血清LDL-C和CHOL升高、HDL-C降低,而TG的結(jié)果分析無統(tǒng)計學(xué)意義； 2、復(fù)氧干預(yù)后可有效提高HDL-C水平； 3、OSAHS模式的CIH大鼠模型可能通過PPARa-ABCA1通路導(dǎo)致HDL紊亂,復(fù)氧3周干預(yù)治療可有效使大鼠PPARα、ABCA1表達水平基本恢復(fù)至常氧水平,提示CIH只要及時得到干預(yù)治療就有可能逆轉(zhuǎn)其造成的肝臟PPARα、ABCA1改變,從而逆轉(zhuǎn)血脂紊亂。 第二部分間歇低氧對HepG2細(xì)胞中HDL相關(guān)蛋白PPARα、 ABCA1、apoM表達的影響及機制研究 目的： 本研究擬通過建立HepG2細(xì)胞慢性間歇低氧模型,用分子生物學(xué)方法從細(xì)胞學(xué)水平探討不同濃度OSAHS模式CIH環(huán)境下HepG2細(xì)胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA及蛋白的變化,探討OSAHS模式慢性間歇性低氧對HDL代謝的上游PPARa, ABCA1, apoM調(diào)控途徑的可能的影響,從而探討CIH相關(guān)HDL代謝紊亂的發(fā)病機制,為臨床預(yù)防及治療OSAHS與高脂血癥提供理論基礎(chǔ)。 方法： 建立間歇低氧培養(yǎng)HepG2細(xì)胞模型,設(shè)立三組,分別為對照(A組)、10%間歇低氧(B組)、5%間歇低氧(C組)3組。通過光鏡觀察細(xì)胞生長形態(tài),油紅0染色法檢測細(xì)胞脂變率。采用RT-PCR檢測各組細(xì)胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA表達；并用蛋白印跡法檢測各組PPARα、ABCA1及apoM蛋白表達。 結(jié)果： 1、間歇低氧培養(yǎng)下HepG2細(xì)胞生長速度明顯緩慢,出現(xiàn)脂變,與間歇低氧程度相關(guān)；10%間歇低氧(B組)、5%間歇低氧(C組)細(xì)胞存活率分別為(80.1士2.1)%、(48.3±2.3)%.與A組相比,B、C細(xì)胞存活率明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),兩組間歇低氧組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。間歇低氧以濃度依賴性方式抑制HepG2細(xì)胞生長,HepG2細(xì)胞存活率與間歇低氧嚴(yán)重程度相關(guān)。 2、RT-PCR顯示B、C組細(xì)胞PPARα、ABCA1及apoM mRNA表達較A組減少(p0.01),且C組低于B組(p0.05)。 3、Western blot檢測顯示B、C組HepG2的PPARα、ABCA1及apoM蛋白表達降低(p0.01)；且C組低于B組(p0.01)。 結(jié)論： OSAHS模式間歇低氧誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞脂肪變性；OSAHS模式間歇低氧可能通過誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞PPARα、ABCA1、apoM表達的減少參與HDL代謝紊亂。 第三部分OSAHS患者血清apoM、apoA5水平與HDL關(guān)系及nCPAP干預(yù)研究 目的： 本研究擬觀察阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征(OSAHS)患者的血清HDL與血清apoM、apoA5水平以及nCPAP治療干預(yù)作用,OSAHS相關(guān)脂代謝紊亂的進一步深入研究以及診治提供新的理論方向。 方法： 1、隨機選擇18例確診的中、重度OSAHS患者和18例性別、年齡、體重指數(shù)、疾病分布相匹配的對照者。檢測并分析比較兩組。血脂及血清apoM、apoA5水平有無差異。通過對18例中、重度OSAHS患者進行nCPAP治療3月,比較治療前后患者上述指標(biāo)有無差異。 結(jié)果： 1、OSAHS組患者的AHI和血清TG水平高于對照組(P0.05),HDL-C、apoM、apoA5水平低于對照組(P0.05),夜間平均Sa02、最低Sa02明顯低于對照者(P0.05),但兩組CHOL、LDL-C無差異性(P0.05)； 2、所有研究對象血清TG與AHI呈正相關(guān),]HDL-C、apoM、apoA5與AHI呈負(fù)相關(guān)；所有研究對象血清TG與夜間平均Sa02、最低Sa02呈負(fù)相關(guān),而HDL-C、apoM、apoA5與夜間平均Sa02、最低Sa02呈正相關(guān)(P0.05)； 3、ApoM與apoA5與HDL-C均呈正相關(guān)(P0.001); ApoM與apoA5之間呈正相關(guān)(r=0.536,P0.001)。多元逐步回歸分析顯示apoM與平均Sa02有良好的相關(guān)性(P0.01),ApoA5與平均Sa02有良好的相關(guān)性(P0.01)。 4、中、重度OSAHS患者nCPAP治療3月后血清TG水平均較前明顯降低(P0.05), HDL-C、apoM、apoA5水平均較前明顯增高(P0.05)。 結(jié)論： 1、OSAHS患者HDL-C明顯降低。2、OSAHS患者血清apoM、 apoA5水平降低,與OSAHS嚴(yán)重程度及HDL-C水平相關(guān)。3、nCPAP治療增加OSAHS患者血清apoM、apoA5及HDL-C水平。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R766

【參考文獻】

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本文編號：2575187