【摘要】：目的：研究重組人促紅細胞生成素(recombinant human erythropoietin, rhEPO)對高糖作用下體外培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞凋亡的保護作用及其可能的機制。 方法：將出生1-3天大鼠視網(wǎng)膜通過0.125%胰蛋白酶消化制成單細胞懸液,建立一種穩(wěn)定、可靠的體外培養(yǎng)視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的方法,并采用免疫細胞化學(xué)技術(shù)對視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞進行鑒定。用臺盼藍染色觀察不同濃度葡萄糖對視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞形態(tài)、生長狀態(tài)及存活數(shù)的影響。將體外混合培養(yǎng)3天的原代大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞隨機分為對照組、高糖培養(yǎng)組和不同濃度rhEPO干預(yù)組,rhEPO干預(yù)組分別在高糖培養(yǎng)液中加入終濃度為5、10、20、40U/ml rhEPO。培養(yǎng)48h后,MTT法檢測評價rhEPO干預(yù)對高糖損傷視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的活力影響,并通過免疫細胞化學(xué)方法半定量檢測不同濃度rhEPO干預(yù)高糖損傷神經(jīng)細胞caspase-3蛋白的表達水平。 結(jié)果：體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞免疫細胞化學(xué)染色顯示,所培養(yǎng)細胞大部分抗神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)抗體反應(yīng)陽性,神經(jīng)細胞純度達到90%以上。視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞在高濃度葡萄糖條件下活性下降并出現(xiàn)大量凋亡細胞,并最終選取30mmol／L葡萄糖干預(yù)48小時制備神經(jīng)細胞高糖模型。應(yīng)用外源性rhEPO干預(yù)對神經(jīng)細胞的高糖損傷具有保護作用,加入5～40U/ml rhEPO干預(yù)后均可有效抑制caspase-3蛋白的表達(P0.01),并且具有一定濃度依賴性。 結(jié)論：rhEPO干預(yù)可以抑制神經(jīng)細胞高糖損傷導(dǎo)致的細胞凋亡,而且其神經(jīng)保護作用具有一定濃度依賴性,抑制細胞凋亡因子caspase-3的表達可能是其保護作用機制之一
【圖文】：

其中以30mm0比、50mmol幾葡萄糖處理組下降最明顯，根據(jù)細胞形態(tài)變化及生長狀態(tài)情況，同時為進一步實驗，我們最終選取30mm0比葡萄糖干預(yù)48小時來制備神經(jīng)細胞高糖模型(表2.1，圖2.10，圖2.n)。表2.1不同濃度葡萄糖下神經(jīng)細胞的存活率(x士s)分組n=8時間 36h48h1三常對照組5~oI/L葡萄糖組20mmol/L葡萄糖組30mmol/L葡萄糖組50~oI/L葡萄糖組99.73士 1.19992份 2.2596.96士2.5778.36士1.9598.02士 1.2197.23士 3.2996.42士1.3776.34士 1.4696.07士 2.2792.08士 3.3885.98士1.4793.18士1.36* 91.27土2.42*78.98士1.29*48‘70士 1.71*25.74士1.46*62.12土2.4192.78士 1.3378.14士 2.3672.39士1.6825.39士1.7590.54士 1.4971.07士 1.3553.06:I=1.2516.74士1.26*:表示與36h組相比P<0.05. 1009O一一‘一__決議 議 ~~~、，~_、、、、 、祖祖\華 華、、\、 、 .....lll口口

caspase一3蛋白表達呈顯著性升高(P<o.ol)。經(jīng)thEPO干預(yù)后，各干預(yù)組carpase一3蛋白表達顯著性下降，且呈一定劑量依賴關(guān)系，與高糖培養(yǎng)組比較有顯著性下降伊<0.01)(表2.3，圖2.14)。結(jié)果表明，rhEPO抑制caspase一3蛋白的表達，并呈濃度依賴性，，其中以40u/mlthEPO的作用為最優(yōu)。表2.3各實驗組視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞casPase一3蛋白的表達(n=8，x燈)組別正常對照組高糖培養(yǎng)組高糖巧 U/mlrhEPO組高糖 +10U/mlrhEPO組高糖+20U/mlrhEPO組高糖 +40U/mlthEPO組Caspase一3蛋白 0.554士0.054 1.534士0.049* 1.424士0.078** 1.026士0.053** 0.692土0.046** 0.62肚0.037***:表示與正常對照組相比尸<0.05;**:表示與高糖培養(yǎng)組相比尸<0.01�？谡φ战M.高糖培養(yǎng)組口高糖 +SU/mlrhEPO組.高糖 +IOU/mlrhEPO組口高糖 +ZOU/mlrhEPO組D高糖 +4OU/mlrhEPO組CasPase一3圖2.14各實驗組視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞casPase一3蛋白的表達
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R774.1

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本文編號：2558171