【摘要】：鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)為我國南方常見惡性腫瘤,尤其是在廣東地區(qū),據(jù)統(tǒng)計廣東地區(qū)的世界年齡標(biāo)化發(fā)病率可達20/10萬以上。鼻咽癌一般位置較深,周圍鄰近大量重要器官及組織,手術(shù)難以徹底切除干凈,故手術(shù)并非鼻咽癌治療的首選。鼻咽癌一般對放射線極為敏感,其解剖學(xué)及生物學(xué)特點決定了其主要治療方式為放射治療。早期鼻咽癌單純放射治療5年生存率可達90%以上。然而,放療本身也難以避免帶來一系列不良反應(yīng)。更遺憾的是,由于鼻咽癌早期多無特異性的癥狀,使得大多數(shù)患者就診時即已為晚期。局部晚期鼻咽癌患者單純放療效果差,多需聯(lián)合化療,目前一般主張同步放化療。放療與化療的聯(lián)合應(yīng)用,毒副反應(yīng)也疊加,部分患者難以耐受,使得不能完成全程的同步放化療,故生存率的提高更無從談起�？梢�,鼻咽癌是嚴(yán)重影響我國南方尤其是廣東地區(qū)人民身體健康的疾病。 鼻咽癌確切發(fā)病原因尚不明確。目前普遍認(rèn)為與理化環(huán)境因素、EBV感染和HLA基因等遺傳因素有關(guān)。HLA(人類白細(xì)胞抗原)基因具有高度多態(tài)性,其編碼的HLA分子在免疫識別“非我”抗原、呈遞內(nèi)外源性抗原,對免疫應(yīng)答中起著決定性的作用,同時HLA基因具有的地區(qū)和種族差異也可以作為一種遺傳標(biāo)記,用于有遺傳傾向性疾病的關(guān)聯(lián)研究,連鎖分析提示HLA具有NPC遺傳易感性。文獻報道,中國南方人群中HLA-A*02.B*58和DRB1*03可能是NPC易感基因,B*40可能是NPC保護基因,但是關(guān)于廣東漢族鼻咽癌患者與]HLLA-A、B、DRB1高分辨等位基因易感關(guān)聯(lián)分析卻鮮有報道。 中醫(yī)體質(zhì)學(xué)是以中醫(yī)理論為指導(dǎo),研究人體體質(zhì)特征、體質(zhì)類型的生理病理特點,分析疾病反應(yīng)狀態(tài)、病變性質(zhì)及發(fā)展趨勢的一門學(xué)科。而HLA系統(tǒng)的特性與中醫(yī)學(xué)“體質(zhì)”學(xué)說之間存在某些內(nèi)在聯(lián)系,反映了體質(zhì)的先天遺傳特征和穩(wěn)定性。HLA系統(tǒng)為數(shù)眾多的等位基因具有的多態(tài)性與中醫(yī)體質(zhì)類型的多態(tài)性相似。對廣東漢族鼻咽癌患者進行體質(zhì)分析及關(guān)聯(lián)研究,將有助于解釋不同的中醫(yī)體質(zhì)對NPC發(fā)生發(fā)展的影響,進一步認(rèn)識中醫(yī)體質(zhì)與疾病的相關(guān)性。 基于此,本課題通過研究廣東漢族鼻咽癌患者和廣東漢族健康志愿者進行的HLA等位基因,探討廣東漢族鼻咽癌患者的HLA易感關(guān)聯(lián)。同時對上述兩組研究對象中年齡介乎18-65周歲且同意進行中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查的NPC患者和健康志愿者進行中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查,探討廣東漢族鼻咽癌患者的中醫(yī)易感體質(zhì),試圖為鼻咽癌的早防早治提供中西醫(yī)兩方面的思考。 目的： 為探尋廣東漢族鼻咽癌患者的HLA基因易感性及中醫(yī)易感體質(zhì),試圖為鼻咽癌的早防早治提供一些思路和參考。 方法： 2012年1月-2012年10月期間在廣東省內(nèi)兩所醫(yī)院(均為大學(xué)附屬醫(yī)院)隨機選取廣東漢族鼻咽癌患者114例為NPC患者組和121例廣東漢族健康志愿者為對照組,運用SBT基因測序技術(shù)對該114例廣東漢族鼻咽癌患者和該121例廣東漢族健康志愿者進行HLA-A、B、DRB1高分辨等位基因分析,探討廣東漢族鼻咽癌的HLA基因易感關(guān)聯(lián)。在上述114例廣東漢族NPC患者中隨機選取年齡介乎18-65周歲且同意進行中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查的NPC患者(共收集到100例NPC患者)；在上述121例健康志愿者體檢中隨機選取年齡介乎18-65周歲且同意進行中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查的健康志愿者(共收到100例健康志愿者)。對該100例NPC患者和該100例健康志愿者運用中華中醫(yī)藥學(xué)會2009年4月頒布的《中醫(yī)體質(zhì)分類和評定標(biāo)準(zhǔn)》中的中醫(yī)體質(zhì)量表進行中醫(yī)體質(zhì)問卷調(diào)查。在中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查前,告知NPC組被調(diào)查對象根據(jù)本次患病一個月前,一年以內(nèi)的實際情況完成問卷；告知健康志愿者組被調(diào)查對象,根據(jù)近一年以內(nèi)的實際情況完成問卷。廣東漢族鼻咽癌患者HLA等位基因易感關(guān)聯(lián)分析中采用以下統(tǒng)計學(xué)方法： 應(yīng)用Arlequin軟件3.11對健康對照組進行Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(P0.05,說明所該組達到遺傳平衡)。分別計算NPC組和健康對照組中HLA等位基因的表現(xiàn)型頻率以及基因頻率,并比較兩組間HLA等位基因頻率分布的差異,采用Pearson卡方檢驗對患者組與對照組的HLA-A、B、DRB1抗原頻率逐一進行關(guān)聯(lián)分析(純合子計作一個),必要時采用Yates檢驗方法與Fisher確切概率法計算確切P值,同時按Woolf公式計算相OR值及95%的可信區(qū)間(CI)。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,計數(shù)資料用率表示,均數(shù)比較用兩樣本t檢驗,率的比較用卡方檢驗,均為雙側(cè)檢驗,檢驗水準(zhǔn)a=0.05。采用Excel表格和SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。 廣東漢族鼻咽癌患者中醫(yī)易感體質(zhì)初探中采用以下統(tǒng)計學(xué)方法： 兩組率的比較用卡方檢驗,雙側(cè)檢驗,檢驗水準(zhǔn)a=0.05,其中氣虛質(zhì)(qideficiency constitution)、氣郁質(zhì)(Qi depression constitutionO的比較使用了Bonferroni校正檢驗水準(zhǔn)a=0.025。 結(jié)果： 對NPC組進行HLA-A、B、DRB1基因多態(tài)性分析結(jié)果表明,114例NPC患者共表達75個HLA等位基因,占目前發(fā)現(xiàn)的總HLA等位基因的1.0267%,其中HLA-A、B、DRB1分別為16、34和25個,分別占目前發(fā)現(xiàn)的總HLA等位基因的0.620%,1.035%和1.388%(IMGT/HLA database2014年01月17日公布Release3.15.0, HLA-A、B、DRB1等位基因數(shù)為7305個,其中HLA-A位點2579個,B位點3285個,DRB1位點1441個)。NPC患者組與健康對照組共表達21個HLA-A等位基因,其中NPC組共表達16個,占]MGT/HLA database已公布的0.6226%,對照組表達20個,占HLA-A等位基因0.7782%,其中HLA-A*24:10僅在患者組表達,A*01:02、A*11:04、A*24:07、A*31:01和A*66：01僅在對照組中表達。NPC組中,基因頻率0.1的等位基因為A*02:07(0.194)、A*11:01(0.257)、A*24:02(0.157)和A*33：03(0.107),健康對照組基因頻率0.1的等位基因為A*02：07(0.142)、A*11：01(0.357)和A*24：02(0.167)。分別對兩組間HLA-A等位基因頻率進行比較,其中NPC組中A*11：01的基因頻率與正常對照組相比存在顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(A*11:01,0.257vs0.357,OR=0.570,95%CI=0.340-0.956,X2=4.57,P=0.033)。兩組間其余HLA-A等位基因頻率的分布均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。NPC患者組與健康對照組共表達44個HLA-B等位基因,其中NPC組共表達34個,占IMGT/HLA database已公布HLA-B等位基因的0.6226%,對照組表達36個,占全部HLA-B等位基因的1.035%,其中B*15:05、B*15:17、B*15:25、B*27:04、B*27:05、B*27:06、 B*37:01、B*52:01、B*54:02、B*54:02和B*55：02僅在患者組表達,B*08：01、B*14：02、B*15:18、B*44:02、B*50:01、B*55:01、B*56:01和B*57：01僅在對照組中表達。NPC患者組頻率0.1的基因為B*40：01(0.111)、B*46：01(0.233)和B*58：01(0.121),健康對照組頻率0.1的基因為B*40：01(0.157)、B*46：01(0.162)和B*58：01(0.0662)；分別對兩組間HLA-B等位基因頻率進行比較,其中NPC組中B*58：01基因頻率與正常對照組存在顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(0.121vs0.064,OR=2.0879,95%CI=1.041-4.186,X2=4.17,P=0.036)。兩組間其余HLA-B等位基因頻率的分布均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。NPC患者組與健康對照組共表達個27個HLA-DRB1等位基因,其中NPC組共表達25個,占MGT/HLA database已公布HLA-DRB1等位基因的1.7349%,對照組表達25個,占HLA-DRB1等位基因的1.7349%,其中DRB1*04:07、DRB1*08:02、DRB1*08:09和DRB1*14:07僅在患者組表達,DRB1*01:02、DRB1*04:01、DRB1*11:03和DRB1*13:01僅在對照組中表達。NPC患者組基因頻率0.1的基因為DRB1*03:01(0.116)、DRB1*09:01(0.141)和DRB1*15:01(0.121),健康對照組基因頻率0.1的基因為DRB1*09:01(0.167)、 DRB1*12:02(0.100)和DRB1*15:01(0.128),分別比較兩組間HLA-DRB1*等位基因頻率,其中NPC組中DRB1*03:01和DRB1*04:03基因頻率與正常對照組存在顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(DRB1*03:01:0.116vs0.047,OR=2.088,95%CI=1.311-6.020,X2=7459,P=0.006；DRB1*04:03:0.022vs0.0064,OR=0.324,95%CI=0.114-0.923,χ2=4.57,P=0.028)。兩組間其余HLA-DRB1等位基因頻率的分布均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。114例NPC患者中,EBV-EA-IgG陽性94例,占82.456%,陰性20例,占17.544%。對EBV-EA-IgG陽性及陰性的NPC患者的HLA-A、B、DRB1等位基因頻率分布進行比較,其中HLA-A*33:03、B*38:01和DRB1*01:01在兩組間分布差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(A*33:03:OR=1.282,95%CI:1.149-1.429,X2=6.130,P=0.013； B*38:01,OR=6.222,95%CI:4.075-9.501,P=0.029；DRB1*01:01,OR=6.222,95%CI：4.075-9.501,P=0.029),其余HLA等位基因頻率均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。對114例NPC患者使用熒光定量PCR技術(shù)(real-time PCR進行EBV-DNA檢測,其中NPC患者組92例為陽性,占79.8246%,22例為陰性,占20.1754%。對EBV-DNA陽性及陰性的NPC患者的HLA-A、B、DRB1等位基因頻率分布進行比較,其中對HLA-B*15:19和B*46：01在兩組間的分布差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(B*15：19,OR=5.600,95%CI:3.764-8.331,P=0.036；B*46:01:OR=6.222,95％CI:1.240-12.575,χ2=5.976,P=0.015),其余HLA等位基因頻率均無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。中醫(yī)體質(zhì)調(diào)查發(fā)現(xiàn)：廣東漢族鼻咽癌患者此次患病一個月以前、近一年以內(nèi),其中醫(yī)體質(zhì)以偏頗體質(zhì)為主,其中以氣虛質(zhì)最多見,其次為氣郁質(zhì)。健康志愿者組近一年以內(nèi)的中醫(yī)體質(zhì)以平和質(zhì)為主,共占全部健康志愿者的55%。 結(jié)論： 從等位基因?qū)哟蝸碚f,在廣東漢族人群中HLA-B*58:01和DRB1*03:01可能是NPC易感關(guān)聯(lián)的致病基因,而HLA-A*11:01和DRB1*04:03可能是NPC易感關(guān)聯(lián)的保護基因。研究顯示,NPC患者中攜帶HLA-A*33:03等位基因者EBV-EA-IgG抗體產(chǎn)生呈正相關(guān),攜帶B*38：01和DRB1*01：01等位基因者可能EBV-EA-IgG抗體產(chǎn)生呈負(fù)相關(guān),而NPC患者中攜帶HLA-B*46:01等位基因者與EBV DNA陽性呈正相關(guān),攜帶B*15：19等位基因者可能與EBV DNA陽性呈負(fù)相關(guān)。因此,機體對在EBV的固有免疫的免疫應(yīng)答過程中,EBV-EA-IgG抗體的出現(xiàn)與否,可能與HLA多態(tài)性有關(guān),然而,攜帶保護性HLA等位基因的機體,可以更有效提呈EBV,其CTL(細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞)對EBV感染細(xì)胞的殺傷能力更強,患NPC的風(fēng)險也相應(yīng)減低。 對廣東漢族鼻咽癌患者中醫(yī)易感體質(zhì)調(diào)查,結(jié)果提示氣虛質(zhì)、氣郁質(zhì)可能是廣東漢族鼻咽癌患者的中醫(yī)易感體質(zhì)；平和質(zhì)可能是廣東漢族人群鼻咽癌的保護性體質(zhì)
【圖文】：

圖2 MHC I類抗原位于ai、巧結(jié)構(gòu)域之間裂隙可結(jié)合多肽部分的結(jié)構(gòu)圖b)用P顯示氨基酸的碳末端殘基，顯示九肽的氨基酸殘基數(shù)目b)顯示位于裂隙中的多肽與MHC I氧基酸殘基以范德華力相互吸引抗原決定族的多態(tài)性集中表現(xiàn)在a.710.1、a2區(qū)域P2m段則相對保守具有

HLA-I分子結(jié)構(gòu)模擬圖
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.63

【參考文獻】

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本文編號：2555542