【摘要】： 目的 隨著白內(nèi)障手術(shù)的不斷完善,以往的白內(nèi)障手術(shù)并發(fā)癥,如：玻璃體前界膜破裂致玻璃體脫出、角膜失代償、虹膜睫狀體炎、眼內(nèi)炎、青光眼、人工晶狀體脫位及半脫位等已明顯減少,而晶狀體后囊膜混濁(Posterier Capsuler Opacification, PCO)已成為現(xiàn)代白內(nèi)障手術(shù)(囊外摘除及人工晶體植入)術(shù)后的主要并發(fā)癥之一。 多年來(lái)預(yù)防后發(fā)障發(fā)生的研究主要集中在抑制殘留的晶體上皮細(xì)胞繼續(xù)增殖和遷移。其中包括非藥物性和藥物性?xún)蓚�(gè)方面。因非藥物性抑制晶體上皮細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的研究沒(méi)能得出滿(mǎn)意的結(jié)果,目前的研究則主要集中在藥物抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖。而近些年研究的一些藥物,如：抗代謝藥物,天然草藥,組織纖溶酶原激活劑,抗炎藥,免疫毒素及細(xì)胞毒素等均因其毒副作用較強(qiáng)而未應(yīng)用于臨床。近幾年的研究則側(cè)重于通過(guò)不同途徑影響bFGF的促增殖作用而抑制晶狀體上皮細(xì)胞的增殖和遷移。 LY294002為磷酸肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)通道抑制劑,PI3K是許多生命活動(dòng)中關(guān)鍵的信號(hào)分子,參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的分裂、分化、凋亡等活動(dòng),并已報(bào)道其也參與LECs的增殖。絲氨酸/蘇氨酸激酶AKT(serine/theonine kinase AKT,又稱(chēng)為PKB)是PI3K下游直接的靶蛋白,AKT是一種多功能調(diào)節(jié)因子,參與細(xì)胞生存和凋亡的調(diào)控。 多種生長(zhǎng)因子都能通過(guò)生長(zhǎng)因子受體上酪氨酸(Y740/Y751)位點(diǎn)磷酸化后產(chǎn)生與PI3K的p85亞基結(jié)合的高親和位點(diǎn),誘導(dǎo)PKB的激活,此激活過(guò)程能被PI3K特異抑制齊刂wortmannin及LY294002所阻斷。主要機(jī)制為wortmannin及LY294002與PI3K的p110亞基呈非競(jìng)爭(zhēng)性不可逆性結(jié)合,從而阻斷下游AKT的激活,起到抑制細(xì)胞增殖和遷移的作用。磷酸肌醇3激酶(PI3K)通道抑制劑的毒副作用較小有望成為預(yù)防PCO的理想藥物。 本實(shí)驗(yàn)將不同濃度的LY294002加入體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞干預(yù)其增殖。通過(guò)MTT檢測(cè)細(xì)胞抑制率及流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。觀察LY294002對(duì)兔眼晶狀體上皮細(xì)胞的抑制程度及對(duì)bFGF促進(jìn)增殖作用的影響。 材料與方法 體外培養(yǎng)的兔晶狀體上皮細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,其中對(duì)照組包括空白對(duì)照和bFGF對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組包括單獨(dú)用LY294002和聯(lián)合用bFGF組,空白對(duì)照組為不含血清的DMEM培養(yǎng)液,bFGF對(duì)照組為空白對(duì)照這組+bFGF (10ng/mL),藥物處理組分為兩組：①5個(gè)單獨(dú)用藥組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)；②5個(gè)聯(lián)合用藥組(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L)+bFGF (10ng/mL)。取生長(zhǎng)良好的第3代兔LEC細(xì)胞傳代于培養(yǎng)板及培養(yǎng)瓶中,常規(guī)培養(yǎng)后,按上述分組加入不同濃度藥物,培養(yǎng)48小時(shí)后MTT檢測(cè)抑制率及流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期。 結(jié)果 1.MTT檢測(cè)LY294002對(duì)LEC增殖的抑制作用 在單獨(dú)應(yīng)用LY294002組內(nèi),各LY294002組與空白對(duì)照組相比顯示：10-8mol/L作用48h后對(duì)兔LECs無(wú)明顯抑制作用(P0.01),10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度作用48h后均對(duì)兔LECs有明顯的抑制作用(P0.01)；各聯(lián)合用藥組與陽(yáng)性對(duì)照組相比,10-8 mol/L作用48 h后對(duì)兔LECs有輕微抑制作用(P=0.008),10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48 h后均對(duì)兔LECs有明顯的抑制作用(P0.01)；空白對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 2.LY294002對(duì)兔LEC的細(xì)胞周期的影響 兔LEC經(jīng)LY294002作用48h后,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比,G0/G1期細(xì)胞增多,而S期和G2/M期細(xì)胞減少。細(xì)胞G0/G1期分析示：LY294002組,10-8mol/L濃度作用48 h后,與空白對(duì)照組相比對(duì)兔LECs無(wú)明顯抑制作用(P0.01); 10-4、10-5、10-6、10-7mol/L作用48h后,與空白對(duì)照組相比對(duì)兔LECs均有明顯的抑制作用(P0.01)；聯(lián)合用藥組內(nèi),10-8 mol/L濃度作用48h后,與陽(yáng)性對(duì)照組相比對(duì)兔LECs無(wú)明顯抑制作用(P0.01),10-4、10-5、10-6、10-7mol/L濃度作用48h后,與陽(yáng)性對(duì)照組相比對(duì)兔LECs均有明顯的抑制作用(P0.01)；空白對(duì)照組與陽(yáng)性對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),S期及G2/M期分析結(jié)果大致同G0/G1期。 結(jié)論 1.LY294002能抑制兔眼晶狀體上皮細(xì)胞的增殖。 2.bFGF能促進(jìn)兔眼晶狀體上皮細(xì)胞的增殖,并作用后處于增殖期的兔眼晶狀體上皮細(xì)胞明顯增多。 3.高濃度LY294002能將bFGF的促細(xì)胞增殖作用阻斷,并作用后處于增殖期的兔眼晶狀體上皮細(xì)胞明顯減少而靜止期細(xì)胞明顯增多。
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【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R776.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉芳;孔瑋;孔s，

本文編號(hào)：2473359