【摘要】：目的:構(gòu)建EB病毒(epstein-barr virus,EBV)EBNA1基因原核表達(dá)載體,并探討其在鼻咽癌血清學(xué)診斷中的應(yīng)用。方法:收集2003-02-01-2005-08-30中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院(216例)和江蘇省腫瘤醫(yī)院(84例)300例鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者的血清樣本,同時收集2003-07-01-2005-07-30中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院500名健康體檢者標(biāo)本作為對照組。以EBV DNA為模板,采用PCR法擴增目的基因EBNA1,定向克隆到原核表達(dá)載體pGEX-5X-1中,構(gòu)建pGEX-5X-EBNA1重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)GST/EBNA1融合蛋白。經(jīng)SDS-PAGE、蛋白質(zhì)印跡法鑒定表達(dá)產(chǎn)物后,純化目的蛋白作為包被抗原,制備ELISA試劑檢測鼻咽癌患者和正常人群EBNA1-IgA抗體。結(jié)果:在大腸埃希菌中成功表達(dá)了GST/EBNA1融合蛋白,相對分子質(zhì)量為54×103,ELISA法檢測結(jié)果顯示,鼻咽癌患者EBNA1-IgA抗體陽性檢出率為80.7%(242/300),對照組陰性檢出率為91.0%(455/500);EBV-IgA檢測鼻咽癌患者抗體陽性檢出率為82.3%(247/300),對照組陰性檢出率為93.0%(465/500),2種檢測方法的陽性檢出率(χ2=1.77,P=0.19)和陰性檢出率(χ2=1.36,P=0.25)比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:初步評估了EB病毒GST/EBNA1重組融合蛋白在鼻咽癌血清篩選中的診斷價值,獲得了在鼻咽癌篩選中有一定應(yīng)用價值的pGEX-5X-EBNA1大腸埃希菌工程菌株。
[Abstract]:Aim: to construct prokaryotic expression vector of EB virus (epstein-barr virus,EBV) EBNA1 gene and to explore its application in serological diagnosis of nasopharyngeal carcinoma (NPC). Methods: serum samples of 300 patients with nasopharyngeal carcinoma (nasopharyngeal carcinoma,NPC) were collected from the affiliated tumor Hospital of Sun Yat-sen University (216 cases) and Jiangsu Cancer Hospital (84 cases). At the same time, 500 healthy specimens were collected from the third affiliated Hospital of Sun Yat-sen University in 2003 / 07 / 01 / 2005 / 07 / 30 as the control group. The target gene EBNA1, was amplified by PCR using EBV DNA as template and cloned into prokaryotic expression vector pGEX-5X-1. The recombinant plasmid pGEX-5X-EBNA1 was constructed and transformed into E. coli BL21 (DE3), IPTG-induced expression of GST/EBNA1 fusion protein). The recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 (DE3), IPTG-induced expression of GST/EBNA1 fusion protein). The expressed product was identified by SDS-PAGE, Western blot, and the target protein was purified as the coated antigen. The ELISA reagent was prepared to detect the EBNA1-IgA antibody in NPC patients and normal population. Results: GST/EBNA1 fusion protein was successfully expressed in Escherichia coli with a molecular weight of 54 脳 103. Elisa showed that the positive rate of EBNA1-IgA antibody in NPC patients was 80.7% (242 脳 300). The negative detection rate in the control group was 91.0% (455,500). The positive rate of antibody detected by EBV-IgA was 82.3% (247 / 300) in nasopharyngeal carcinoma patients and 93.0% (465 / 500) in control group, and the positive rate of two methods (蠂 ~ 2 / 1.77, P < 0.01) was higher than that of control group (93.0%). There was no significant difference between the negative detection rate (蠂 ~ 2 = 1.36, P < 0.05) and the negative rate (P = 0.19, 蠂 ~ 2 = 1.36, P = 0.25). Conclusion: the diagnostic value of recombinant GST/EBNA1 fusion protein of EB virus in serum screening of nasopharyngeal carcinoma (NPC) was evaluated, and the engineering strains of pGEX-5X-EBNA1 Escherichia coli with certain application value in NPC screening were obtained.
【作者單位】： 中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院檢驗科;中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院檢驗科;江蘇省腫瘤醫(yī)院檢驗科;
【基金】：廣東省科技計劃(2006B36001010) 教育部第44批留學(xué)回國人員科研啟動基金〔教外司留(2012)940〕
【分類號】：R739.63

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 徐凜峰;朱進(jìn);焦永軍;張建平;;肝細(xì)胞癌患者組織中MAGE-1基因的原核表達(dá)及鑒定[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2006年07期

2 王宏麗;石瑩;石晶;楊媚婷;鮑永利;于春雷;孫穎;烏垠;李玉新;;人畸胎瘤衍化生長因子原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];中國婦幼保健;2009年35期

3 陳汐敏;丁貴鵬;馮振卿;曹伯良;;人腫瘤蛋白D52重組融合蛋白的原核表達(dá)及特性鑒定[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年06期

4 鄭晶;陸惠玲;劉加軍;陳森;呂德堅;孫宏鈺;;人MMP-11原核表達(dá)載體pGEX-5X-3/MMP-11的構(gòu)建及其融合蛋白的表達(dá)和純化[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

5 溫儒民;張俊杰;陳家存;薛松;胡書群;孫亞峰;裴冬生;;抗人膀胱癌單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因的克隆及原核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];江蘇醫(yī)藥;2007年04期

6 應(yīng)敏剛;林紹峰;謝云青;鄭秋紅;;人熱休克蛋白70的原核表達(dá)和純化的實驗研究[J];實用癌癥雜志;2007年03期

7 師紅磊;陳偉;李寧;湯旭東;余松濤;王健;楊仕明;;人肝素酶蛋白的表達(dá)及其單克隆抗體的制備[J];實用臨床醫(yī)藥雜志;2010年05期

8 肖飛;晁耐霞;曾慶堂;黃健;蔣日婷;羅國容;;GCF2基因片段原核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];廣西醫(yī)學(xué);2011年05期

9 曾蕾;曹江;;HAI-1基因不同功能域的原核表達(dá)載體構(gòu)建及融合蛋白表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2006年02期

10 郎旭宇;閆萍;王惠珍;張悅紅;程牛亮;郭睿;;原癌基因Pokemon的克隆原核表達(dá)及純化[J];中國藥物與臨床;2006年08期

相關(guān)會議論文 前10條

1 鐘春燕;柳長柏;;pET15b-GFP-HCTP、pET15b-Apoptin-HCTP原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及其意義[A];第十屆全國生化與分子藥理學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2007年

2 鄭駿年;武藝;吳陽;李望;劉俊杰;溫儒民;朱海濤;孫曉青;;腎癌腫瘤相關(guān)抗原G250及G250蛋白多糖(PG)區(qū)基因的克隆、表達(dá)及鑒定[A];第十五屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

3 吳漢林;周清華;朱文;王艷萍;車國衛(wèi);陳曉禾;孫芝琳;;人NIT1基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建和鑒定[A];第二屆湖北省腫瘤靶向治療學(xué)術(shù)會議論文選[C];2007年

4 王甲甲;郭鋒杰;李躍輝;李官成;;人源鼻咽癌雙價抗獨特型抗體疫苗的制備及活性鑒定[A];中國病理生理學(xué)會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯(lián)合學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

5 石瑩;鮑永利;烏垠;于春雷;孫穎;孟祥穎;李玉新;;Cripto—1的原核表達(dá)及多克隆抗體的制備[A];吉林省第六屆生命科學(xué)大型學(xué)術(shù)報告會論文集[C];2008年

6 趙劍華;劉芝華;王秀琴;駱愛萍;吳敏;;維甲酸誘導(dǎo)的基因RA109的染色體定位、蛋白質(zhì)定位及蛋白質(zhì)原核表達(dá)[A];2000全國腫瘤學(xué)術(shù)大會論文集[C];2000年

7 段小藝;;EGFRvⅢ／PEP-3 cDNA與HBcAg重組基因的構(gòu)建、原核表達(dá)與免疫分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

8 賈麗;仲愛芳;虞偉;李曉軍;;人分化抑制因子3基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及融合蛋白表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

9 郭W，

本文編號：2469321