【摘要】：目的：糖尿病（diabetes mellitus, DM）作為一種人們熟知的代謝性疾病，隨著國家的發(fā)展以及人們生活方式的改變，已經(jīng)成為導(dǎo)致人類死亡的第三大原因。糖尿病視網(wǎng)膜病變（diabetic retinopathy, DR）作為糖尿病眼部病變最嚴(yán)重的并發(fā)癥，導(dǎo)致了每年不可逆的視力喪失的人數(shù)持續(xù)上升。其中老年黃斑變性（age-related macular degeneration，AMD）成為老年人群視力喪失的最常見原因，在65歲以上的老年人中，每3個(gè)人中就會(huì)有一個(gè)受到AMD的影響。而國內(nèi)外許多實(shí)驗(yàn)研究以及臨床試驗(yàn)都顯示：氧化應(yīng)激以及炎癥已經(jīng)成為AMD發(fā)生發(fā)展的兩大非常重要的原因。而視網(wǎng)膜本身也容易受到氧化應(yīng)激的影響，原因是代謝旺盛的視網(wǎng)膜的氧消耗量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于機(jī)體其他任何組織，多不飽和脂肪酸易被氧化且會(huì)激發(fā)具有細(xì)胞毒性的連鎖反應(yīng)。當(dāng)前已經(jīng)有大量的研究顯示：應(yīng)用高糖培養(yǎng)基刺激視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（retinal pigment epithelial, RPE），模擬糖尿病時(shí)RPE細(xì)胞在體內(nèi)的高糖環(huán)境，造成細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)，并應(yīng)用藥物進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示高糖使細(xì)胞的活力下降，使一些細(xì)胞因子、炎性因子的表達(dá)發(fā)生變化，對(duì)RPE細(xì)胞造成損傷。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用不同濃度的八肽膽囊收縮素（Cholecystokinin octapeptide，CCK-8)作用于高糖培養(yǎng)的大鼠RPE細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后，MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力以及NRF2、SOD1、γ-GCS、NQO1、TNF-α、IL-1α、及IL-6的表達(dá)的變化，根據(jù)結(jié)果篩選出CCK-8合適的治療濃度，觀察此濃度作用RPE細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)及72小時(shí)上述因子的表達(dá)變化。 方法： 1篩選CCK-8治療濃度：培養(yǎng)大鼠RPE細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為8組：①正常對(duì)照組（葡萄糖濃度：5.56mmol/L）②高糖組（葡萄糖濃度：30mmol/L）③高滲對(duì)照組（葡萄糖濃度：5.56mmol/L+甘露醇：24.44mmol/L）④高糖+CCK-8治療組（葡萄糖濃度：30mmol/L+CCK-8濃度：10-5mmol/L）⑤高糖+CCK-8治療組（葡萄糖濃度：30mmol/L+CCK-8濃度：10-6mmol/L）⑥高糖+CCK-8治療組（葡萄糖濃度：30mmol/L+CCK-8濃度：10-7mmol/L）⑦高糖+CCK-8治療組（葡萄糖濃度：30mmol/L+CCK-8濃度：10-8mmol/L）⑧高糖+CCK-8治療組（葡萄糖濃度：30mmol/L+CCK-8濃度：10-9mmol/L），各組細(xì)胞應(yīng)用同種培養(yǎng)液培養(yǎng)24小時(shí)后換成條件培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度CCK-8對(duì)細(xì)胞活力的影響，同時(shí)收集細(xì)胞標(biāo)本，進(jìn)行RT-PCR實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)NRF2、SOD1、γ-GCS、NQO1、TNF-α、IL-1α、IL-6表達(dá)的變化。 2不同時(shí)間段CCK-8治療濃度10-6mmol/L相關(guān)因子變化：根據(jù)MTT及RT-PCR的結(jié)果得出CCK-8的治療濃度為10-6mmol/L，再次分組：①正常對(duì)照組（葡萄糖濃度：5.56mmol/L）②高糖組(葡萄糖濃度：30mmol/L)③高滲對(duì)照組(葡萄糖濃度：5.56mmol/L+甘露醇：24.44mmol/L)④高糖+CCK-8治療組（葡萄糖濃度：30mmol/L+CCK-8濃度：10-6mmol/L），各組細(xì)胞分別培養(yǎng)24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)，取相應(yīng)時(shí)間段細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行RT-PCR檢測(cè)上述7種因子表達(dá)。 結(jié)果： 1MTT法檢測(cè)結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，高糖組細(xì)胞的活力明顯降低（P0.05），高滲對(duì)照組細(xì)胞活力未見明顯改變；各不同濃度治療組的細(xì)胞活力低于正常對(duì)照組，具有明顯差異（P0.05），CCK-8濃度為10-7mmol/L、10-8mmol/L、10-9mmol/L三組之間細(xì)胞活力無明顯差異，三組與高糖組相比無明顯差異，CCK-8濃度為10-6mmol/L與10-5mmol/L兩組之間細(xì)胞活力無明顯差異，但要高于其他三組治療組和高糖組（P0.05）。 2篩選CCK-8治療濃度階段RT-PCR結(jié)果：與正常對(duì)照組比較，高糖組NRF2、SOD1、γ-GCS、NQO1、TNF-α、IL-1α、IL-6的表達(dá)上升（P0.05），高滲對(duì)照組的表達(dá)未見明顯差異。各不同濃度治療組與正常對(duì)照組相比，其中NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1的表達(dá)明顯上升（P0.05），TNF-α、IL-1α及IL-6的表達(dá)明顯下降（P0.05）。與高糖組相比，CCK-8濃度為10-7mmol/L、10-8mmol/L、10-9mmol/L三組中NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1的表達(dá)上升（P0.05），TNF-α、IL-1α及IL-6的表達(dá)下降（P0.05），，但是三組之間未見明顯差異。CCK-8濃度為10-6mmol/L與10-5mmol/L兩組之間未見明顯差異，但與其他三組治療組及高糖組相比，NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1的表達(dá)明顯上升（P0.05），TNF-α、IL-1α及IL-6的表達(dá)明顯下降（P0.05）。 3不同時(shí)間段CCK-8治療濃度10-6mmol/L相關(guān)因子變化：與正常對(duì)照組相比，高滲對(duì)照組7因子的表達(dá)未見明顯差異；高糖組與正常對(duì)照組及高滲對(duì)照組相比，上述7種因子的表達(dá)明顯上升（P0.05）；與高糖組相比，治療組NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1表達(dá)明顯上升（P0.05），48小時(shí)高于24小時(shí)及72小時(shí)（P0.05），24小時(shí)及72小時(shí)之間無明顯差異；與高糖組相比，治療組TNF-α、IL-1α及IL-6表達(dá)下降（P0.05），72小時(shí)的表達(dá)低于24小時(shí)和48小時(shí)（P0.05），24小時(shí)和48小時(shí)間的表達(dá)無明顯差異。 結(jié)論： 1高糖環(huán)境可導(dǎo)致大鼠RPE細(xì)胞損傷，細(xì)胞活力降低。 210-6mmol/L濃度的CCK-8以及一定的作用時(shí)間后可以抑制高糖對(duì)細(xì)胞帶來的損傷，使NRF2、SOD1、γ-GCS及NQO1表達(dá)明顯上升，TNF-α、IL-1α及IL-6的表達(dá)明顯下降，提示了CCK-8可能通過抗氧化作用以及抗炎癥作用維持了細(xì)胞內(nèi)平衡狀態(tài)，保護(hù)大鼠RPE細(xì)胞。為CCK-8在臨床中的應(yīng)用奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.2;R774.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 馬麗琴;谷振勇;董國凱;李娜;高峰;劉霞;馬春玲;叢斌;凌亦凌;;CCK-8對(duì)LPS誘導(dǎo)大鼠血管平滑肌細(xì)胞SOD基因表達(dá)及NF-κB活性增高的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年20期

2 郝麗娜,王秋紅,凌亦凌,孟祥艷,張曉靜,梁俊清,羨曉輝,何守志;八肽膽囊收縮素對(duì)大鼠糖尿病性白內(nèi)障的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年07期

3 凌亦凌,黃善生,張君嵐,萬梅,郝榮利;膽囊收縮素對(duì)內(nèi)毒素性休克大鼠SOD、MDA及吞噬細(xì)胞發(fā)光的影響[J];中國病理生理雜志;1997年05期

4 李淑瑾,叢斌,閻蘊(yùn)力,姚玉霞,馬春玲,凌亦凌;八肽膽囊收縮素抑制脂多糖誘導(dǎo)的大鼠肺間質(zhì)巨噬細(xì)胞CD14的表達(dá)(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年02期

5 嚴(yán)密,陸方,張軍軍,孟丹,杜彩鳳;光動(dòng)力療法治療滲出型老年性黃斑變性的初步報(bào)告[J];中華眼底病雜志;2000年04期

6 何守志,李曉陵,王瑋,湯如;光動(dòng)力療法治療老年性黃斑變性合并脈絡(luò)膜新生血管的臨床觀察[J];中華眼底病雜志;2002年03期

7 張美霞,陸方,嚴(yán)密,張軍軍,孟丹,杜彩鳳,沈齊,王順清,廖晉英;光動(dòng)力療法治療滲出型老年性黃斑變性四年臨床觀察總結(jié)[J];中華眼底病雜志;2004年05期

本文編號(hào)：2469197