【摘要】： [研究背景]真菌性角膜炎是嚴重的致盲性眼病,如不能及時的診斷和治療將導致角膜穿孔、失明甚至眼球摘除。近年來真菌性角膜炎的發(fā)病率明顯上升,其中鐮刀菌和曲霉菌是最主要的致病菌。 在角膜細胞的固有免疫反應中,Toll樣受體(TLR)通過識別不同的病原相關(guān)分子模式(PAMP)起重要作用。TLR4能夠識別革蘭氏陰性菌細胞壁的主要成分—脂多糖(LPS)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)TLR2和TLR4能夠識別煙曲霉菌(AF)的PAMP,誘導炎性因子表達,趨化多型核中性粒細胞(PMN)向感染灶遷移。 目前,TLR的配體預處理引起對病原體刺激的耐受反應的研究是當前抗感染研究的熱點方向之一。TLR的配體預處理引起的耐受反應不僅僅是一種低反應性免疫狀態(tài),還是一個功能轉(zhuǎn)換過程,這種耐受表型是“細胞再編程”的結(jié)果。 [目的]探討小劑量LPS預處理能否引起角膜對真菌刺激的細胞再編程,從而調(diào)控角膜細胞抗感染的固有免疫反應。 [方法]LPS分別刺激人永生化角膜上皮細胞(THCE)和人永生化角膜基質(zhì)細胞(THSF), ELISA法檢測培養(yǎng)上清中細胞因子TNF-α、IL-8和IL-6的分泌。小劑量LPS刺激THSF一定時間后再給予大劑量LPS或AF刺激,1h后收集細胞,實時RT-PCR檢測LPS預處理THSF對LPS或AF引起細胞因子及抗菌肽mRNA表達的影響；4h后收集細胞上清,ELISA檢測LPS預處理對LPS或AF引起細胞因子及抗菌肽分泌的影響。小劑量LPS預處理THSF一定時間后,給予大劑量LPS或AF刺激4h,收集細胞上清,24孔Transwell小室檢測LPS預處理對PMN遷移的影響。 [結(jié)果] 1.角膜細胞細胞因子的分泌：與對照組比較,LPS刺激THCE未明顯增加IL-8的分泌；AF刺激THCE增加IL-8的分泌,其分泌量達對照組的12倍。與對照組比較,LPS刺激可引起THSF的IL-8分泌的增加,其分泌量隨刺激時間延長而上升；TNF-α的分泌未見明顯改變。 2.預處理角膜細胞對再次刺激引起的細胞因子產(chǎn)生的影響：與對照組比較,小劑量LPS預處理THSF可抑制大劑量LPS或AF誘導的炎性細胞因子在基因和蛋白水平的表達。 3.LPS預處理對再次刺激引起的抗菌肽表達的影響：LPS刺激實驗中,小劑量LPS預處理THSF一定時間后再用大劑量LPS刺激,抗菌肽CCL20的表達較單純用大劑量LPS刺激顯著增加,而LL-37表達的無明顯改變。AF刺激實驗中,小劑量LPS預處理THSF一定時間后再用大劑量AF刺激,抗菌肽CCL20和Tβ4mRNA的表達較對照組顯著增加。 4.LPS預處理對PMN遷移的影響：小劑量LPS預處理一定時間抑制大劑量LPS或AF誘導的PMN向THSF的遷移。 [結(jié)論]本研究發(fā)現(xiàn)小劑量脂多糖預處理可抑制大劑量脂多糖或煙曲霉菌刺激引起的角膜細胞炎性反應,增加抗感染的能力,主要表現(xiàn)為炎性細胞因子表達減少、抗菌肽表達增加及PMN的遷移受到抑制。這表明角膜細胞再編程的誘導可能為預防和控制真菌性角膜感染提供新的方法。
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【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R772.2

【參考文獻】

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1 高建魯,吳欣怡;Toll樣受體在人眼角膜上皮和永生化人角膜上皮細胞系的表達及功能研究[J];中華醫(yī)學雜志;2005年32期

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本文編號：2445469