【摘要】：目的探討人玻璃體體外培養(yǎng)對人視網(wǎng)膜色素上皮細胞收縮性的影響。方法低傳代(3-5代)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞分兩組體外培養(yǎng),一組用普通培養(yǎng)液(含體積分數(shù)10%胎牛血清的DMEM/F12)培養(yǎng),一組用體積分數(shù)25%玻璃體培養(yǎng),應用I型膠原凝膠收縮實驗檢測收縮力的變化,應用免疫熒光技術檢測細胞骨架蛋白F-actin、α-SMA和vinculin的定位染色,應用免疫印跡技術檢測α-SMA和vinculin蛋白的表達。結果與普通培養(yǎng)液培養(yǎng)相比,低傳代的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞玻璃體中培養(yǎng)48 h,膠原凝膠面積為(22 127±2072)像素,明顯大于在普通培養(yǎng)液中的凝膠面積(16 084±1154)像素,細胞收縮能力顯著下降,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(t=4.412,P=0.012)。在普通培養(yǎng)液中,Factin、vinculin主要分布于細胞周邊,vinculin形成的粘連斑粗大;而在玻璃體中培養(yǎng)后,Factin重組,在細胞的一端形成扁平偽足結構,vinculin主要分布于細胞扁平偽足端和細胞中央,形成的粘連斑明顯變小。玻璃體培養(yǎng)后α-SMA蛋白表達顯著下降,與普通培養(yǎng)液相比差異有統(tǒng)計學意義(t=2.845,P=0.047);vinculin蛋白表達無顯著變化(t=0.198,P=0.852)。結論玻璃體培養(yǎng)可導致視網(wǎng)膜色素上皮細胞收縮性下降,這一作用可能與α-SMA蛋白表達下調及vinculin重新分布有關。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of human vitreous culture in vitro on the contractility of human retinal pigment epithelial cells (RPE). Methods low passage (3 ~ 5 passages) of human retinal pigment epithelial cells (RPE) were cultured in vitro. The first group was cultured in normal medium (containing 10% fetal bovine serum) and the other group was cultured in 25% vitreous medium. I collagen gel contraction test was used to detect the contractile force, immunofluorescence technique was used to detect the localization staining of cytoskeleton protein, 偽-SMA and vinculin, and the expression of 偽-SMA and vinculin protein was detected by immunoblotting technique. Results compared with the normal culture medium, the collagen gel area of human retinal pigment epithelial cells cultured in low passage medium for 48 hours was (22 127 鹵2072) pixels, which was significantly larger than that in normal medium (16 084 鹵1154) pixels. The contractility of the cells decreased significantly (t = 4.412, P = 0.012), and there was a significant difference between the two groups (t = 4.412, P = 0.012). In the normal culture medium, Factin,vinculin was mainly distributed around the cells, and the adhesion spots formed by vinculin were thick. After cultured in vitreous body, Factin reconstituted to form a flat pseudopod structure at one end of the cell, and vinculin was mainly distributed in the end and center of the cell, and the adhesion spots became smaller obviously. The expression of 偽-SMA protein decreased significantly after vitreous culture (t = 2.845, P = 0.047, P = 0.852, t = 2.845, P = 0.047, t = 0.198, P = 0.852), and there was no significant difference between the two groups (t = 2.845, P = 0.047). Conclusion vitreous culture can decrease the contractility of retinal pigment epithelial cells, which may be related to the down-regulation of 偽-SMA protein expression and the redistribution of vinculin.
【作者單位】： 中山大學中山眼科中心;中山眼科中心;海南眼科醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學基金資助(編號:81170866) 海南省自然科學基金資助(編號:814367)~~
【分類號】：R774.1

【共引文獻】

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