發(fā)布時間：2019-03-08 14:12

【摘要】：目的觀察缺氧、氧化應激對體外培養(yǎng)的視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細胞增殖的影響及GRP78表達的變化。方法體外培養(yǎng)人RPE細胞,采用CoCl2誘發(fā)細胞缺氧模型、H2O2誘發(fā)氧化應激模型。實驗分為量-效關(guān)系組:細胞分別經(jīng)濃度為100μmol·L-1、200μmol·L-1、400μmol·L-1、800μmol·L-1的CoCl2、H2O2作用12h,用MTT法檢測細胞增殖情況;時-效關(guān)系組:在CoCl2濃度為200μmol·L-1、H2O2濃度為400μmol·L-1的基礎(chǔ)上,分別選取藥物作用8h、12h、16h3個時間點收集細胞,采用免疫細胞化學染色檢測GRP78蛋白的表達情況。結(jié)果量-效關(guān)系組:不同濃度CoCl2組RPE細胞活性與空白對照組相比均明顯下降(均為P0.05);400μmol·L-1及800μmol·L-1 H2O2組細胞存活率較空白對照組均明顯下降(均為P0.05)。時-效關(guān)系組:空白對照組GRP78表達陽性細胞率為(5.4±3.0)%;CoCl2作用8h、12h、16h GRP78陽性細胞率分別為(34.2±7.1)%、(54.4±9.1)%、(34.7±6.8)%;H2O2作用8h、12h、16hGRP78陽性細胞率分別為(37.8±7.1)%、(57.4±5.1)%、(42.5±3.9)%。經(jīng)統(tǒng)計學分析,CoCl2、H2O2處理8h后,RPE細胞中GRP78表達均較空白對照組明顯升高(均為P0.01),作用12h時GRP78的表達量最高,作用16h時GRP78的表達量又有下降。結(jié)論 GRP78可以作為RPE細胞缺氧、氧化應激的生化標志物,GRP78的表達變化與細胞應激狀態(tài)有一定依賴關(guān)系。
[Abstract]:Aim to observe the effects of hypoxia and oxidative stress on the proliferation and expression of GRP78 in cultured retinal pigment epithelium (retinal pigment epithelium,RPE) cells. Methods Human RPE cells were cultured in vitro. CoCl2-induced hypoxia model and H2O2-induced oxidative stress model were used. The cells were treated with 100 渭 mol 路L-1 200 渭 mol 路L-1 400 渭 mol 路L-1 200 渭 mol 路L-1 800 渭 mol 路L-1 CoCl2,H2O2 for 12 h, and the cell proliferation was detected by MTT assay. Time-effect relationship group: on the basis of 200 渭 mol 路L-1 CoCl2 and 400 渭 mol 路L-1 H2O2, the cells were collected at 8 h, 12 h, 16 h, respectively, and the expression of GRP78 protein was detected by immunocytochemical staining. Fruit dose-response relationship group: the activity of RPE cells in different concentrations of CoCl2 group was significantly lower than that in blank control group (all P0.05). The survival rate of cells in 400 渭 mol 路L-1 and 800 渭 mol 路L-1 H2O2 groups was significantly lower than that in the control group (P 0.05). The positive rate of GRP78 expression was (5.4 鹵3.0)% in the blank control group, and (34.2 鹵7.1)%, (54.4 鹵9.1)%, (34.7 鹵6.8)% in the GRP78 positive cells at 8 h, 12 h and 16 h after CoCl2 treatment, respectively. The positive rate of GRP78 cells was (37.8 鹵7.1)%, (57.4 鹵5.1)%, (42.5 鹵3.9)% at 8 h, 12 h and 16 h after H2O2 treatment, respectively. After treatment with CoCl2,H2O2 for 8 h, the expression of GRP78 in RPE cells was significantly higher than that in the control group (P0.01), the expression of GRP78 was the highest at 12 h and decreased at 16 h. Conclusion GRP78 can be used as a biochemical marker of hypoxia and oxidative stress in RPE cells. The change of GRP78 expression is dependent on the state of cell stress.
【作者單位】： 河南省立眼科醫(yī)院;河南省眼科研究所;吉林大學第二醫(yī)院眼科;
【分類號】：R774.1

【參考文獻】

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1 張士勝;熱休克蛋白與視網(wǎng)膜[J];國外醫(yī)學.眼科學分冊;2002年02期

2 ;Calcium Overload Is A Critical Step in Programmed Necrosis of ARPE-19 Cells Induced by High-Concentration H_2O_2[J];Biomedical and Environmental Sciences;2010年05期

3 張瑩,孫黎光;GRP78的研究進展[J];國外醫(yī)學(生理、病理科學與臨床分冊);2005年03期

4 郝曉鳳;惠延年;王雨生;張鵬;謝曉繁;劉曉娟;趙煒;朱潔;;Rac1在缺氧條件下培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細胞的表達[J];眼科新進展;2007年05期

【共引文獻】

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3 管靜芝;管維平;朱文華;;阿爾茨海默病患者體內(nèi)端粒甲基化分析[J];軍醫(yī)進修學院學報;2011年02期

4 韓廣超;王紅陽;禹江濤;張麗麗;王袁;;氧自由基對間歇低氧所致細胞凋亡的作用[J];河北聯(lián)合大學學報(醫(yī)學版);2013年01期

5 秦艷芳;祝嘯先;劉愛菊;;GRP78、VEGF在子癇前期患者中的研究[J];疾病監(jiān)測與控制;2014年03期

6 申樹林;劉德銘;賀大林;;GRP_(78)在弱精癥精子和活力正常精子蛋白中的表達差異研究[J];陜西醫(yī)學雜志;2012年01期

7 王樹樹;吳芹;陳玉萍;高璀鄉(xiāng);朱衛(wèi)忠;;CaMKⅡ活性抑制降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導的大鼠心肌細胞死亡[J];蘇州大學學報(醫(yī)學版);2009年06期

8 于海豐;黃旭;甄春英;王永亮;葉磊光;劉寶剛;;GRP78的表達與非小細胞肺癌生物學特性及預后的關(guān)系[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2012年22期

9 鞏杰;葉海輝;于坤;黃輝洋;李少菁;;擬穴青蟹GRP78基因的克隆與應激表達[J];水產(chǎn)學報;2013年10期

10 李漫麗;戚卉;孫蕾;吳雅臻;;葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78真核表達載體及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜色素上皮細胞株的構(gòu)建[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年46期

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10 朱玉嬌;草魚（Ctenopharyngodon idella）GRP78和抗氧化酶在抵抗溫度、Pb~(2+)脅迫中的功能[D];南昌大學;2012年

【二級參考文獻】

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2 張鵬,王雨生,惠延年,白建偉,胡丹;缺氧誘導因子1與眼內(nèi)新生血管[J];眼科新進展;2004年03期

3 朱潔,王雨生,張金山,張鵬,王海燕,趙煒;缺氧對培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞線粒體酶活性的影響[J];眼科新進展;2005年02期

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