【摘要】：目的研究非轉(zhuǎn)移性黑色素瘤糖蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein b,GPNMB)在增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy,PVR)及視網(wǎng)膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)細(xì)胞中的作用。方法首先,采用免疫熒光法對(duì)18例PVR患者行玻璃體切除術(shù)時(shí)切除的視網(wǎng)膜進(jìn)行定量分析;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)PVR患者血清中GPNMB的含量;然后,以人RPE細(xì)胞為研究對(duì)象,構(gòu)建GPNMB的siRNA以及過(guò)表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后采用MTT法和流式細(xì)胞儀觀察其對(duì)RPE細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期的影響。結(jié)果免疫熒光實(shí)驗(yàn)表明,隨著PVR增生膜病變程度的加重,其GPNMB的熒光強(qiáng)度加強(qiáng),A、B、C級(jí)PVR的增生膜中GPNMB陽(yáng)性熒光總量分別為5.07、11.21、19.34;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示,PVR患者血清中GPNMB的含量遠(yuǎn)高于對(duì)照組;細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GPNMB過(guò)表達(dá)可以顯著促進(jìn)RPE細(xì)胞的增殖,其OD值是對(duì)照組的3.7倍;然后以GPNMB過(guò)表達(dá)的人RPE細(xì)胞為研究對(duì)象,結(jié)果表明GPNMB-siRNA轉(zhuǎn)染組可以顯著抑制RPE細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)GPNMB對(duì)RPE細(xì)胞周期有顯著影響。結(jié)論 GPNMB作為RPE細(xì)胞中的一個(gè)關(guān)鍵分子,通過(guò)細(xì)胞周期調(diào)控途徑影響其增殖,為進(jìn)一步研究GPNMB在PVR中的作用及機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to investigate the role of non-metastatic melanoma glycoprotein (B (glycoprotein non-metastatic melanoma protein bnmb) in proliferative vitreoretinopathy (proliferative vitreoretinopathy,PVR) and retinal pigment epithelium (retinal pigment epithelium,RPE) cells. Methods first of all, 18 patients with PVR underwent vitrectomy were quantitatively analyzed by immunofluorescence method, and the serum GPNMB content of 18 patients with PVR was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa). Then, the siRNA and overexpression vector of GPNMB were constructed by using human RPE cells as the research object. After transfection into the cells, the effects of MTT and flow cytometry on the proliferation and cell cycle of RPE cells were observed. Results Immunofluorescence assay showed that the fluorescence intensity of GPNMB increased with the severity of PVR proliferative membrane lesion, and the total amount of GPNMB positive fluorescence in the proliferative membrane of PVR was 5.07 ~ 11.21 ~ 19.34, respectively. The results of enzyme-linked immunosorbent assay (Elisa) showed that the content of GPNMB in the serum of PVR patients was much higher than that of the control group, and the results of cell proliferation assay showed that GPNMB overexpression could significantly promote the proliferation of RPE cells, and its OD value was 3.7-fold higher than that of the control group. The results showed that GPNMB-siRNA transfection group could significantly inhibit the proliferation of RPE cells, and flow cytometry showed that GPNMB had a significant effect on the cell cycle of RPE. Conclusion as a key molecule in RPE cells, GPNMB affects its proliferation through cell cycle regulation pathway, which lays a foundation for further study on the role and mechanism of GPNMB in PVR.
【作者單位】： 北京市解放軍第309醫(yī)院眼科;
【分類(lèi)號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：2414630