發(fā)布時間：2018-10-26 08:34

【摘要】：目的制備攜帶P16a基因的聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒并在喉癌細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。方法選用乳化聚合法制備PBCA-NPs,以激光粒度分析儀及透射電子顯微鏡分析納米粒的形態(tài)和粒徑。用陽離子表面活性劑十六烷基三乙基溴化銨(CTAB)對納米粒進(jìn)行表面修飾。構(gòu)建真核表達(dá)載體pIRES2-EGFP-P16a經(jīng)過酶切鑒定及測序后與PBCA-NPs連接,轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞Hep-2,熒光顯微鏡檢測轉(zhuǎn)染效率,蛋白印跡法檢驗P16a基因的表達(dá),流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率。結(jié)果所制PBCA-NPs粒徑均勻、Zeta電位較高,較為理想;重組質(zhì)粒pIRES2-EGFP-P16a經(jīng)過酶切鑒定及測序后,表明真核表達(dá)載體構(gòu)建正確;PBCA-NPs可以介導(dǎo)pIRES2-EGFP-P16a高效轉(zhuǎn)染喉癌細(xì)胞,蛋白印跡檢測表明轉(zhuǎn)染后喉癌細(xì)胞能夠表達(dá)外源P16a基因,在其介導(dǎo)下P16a能有效抑制喉癌細(xì)胞的增殖并能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。結(jié)論聚氰基丙烯酸正丁酯納米�？梢宰鳛橐环N良好的基因載體,為喉癌的基因治療提供了新思路。
[Abstract]:Objective to prepare polybutyl cyanoacrylate nanoparticles carrying P16a gene and express them in laryngeal cancer cells. Methods PBCA-NPs, was prepared by emulsion polymerization method. The morphology and particle size of nanoparticles were analyzed by laser particle size analyzer and transmission electron microscope. Cationic surfactant cetyltriethylammonium bromide (CTAB) was used to modify the surface of nanoparticles. The eukaryotic expression vector pIRES2-EGFP-P16a was ligated with PBCA-NPs after restriction endonuclease digestion and sequencing. The transfection efficiency was detected by Hep-2, fluorescence microscope and the expression of P16a gene was detected by Western blot. Apoptosis rate was detected by flow cytometry. Results the size of PBCA-NPs was uniform and the potential of Zeta was high. The recombinant plasmid pIRES2-EGFP-P16a was identified by restriction endonuclease digestion and sequenced, which indicated that the eukaryotic expression vector was constructed correctly. PBCA-NPs can efficiently transfect pIRES2-EGFP-P16a into laryngeal carcinoma cells. Western blot analysis shows that the transfected laryngeal carcinoma cells can express exogenous P16a gene, and P16a can effectively inhibit the proliferation of laryngeal cancer cells and induce apoptosis. Conclusion Poly (n-butyl cyanoacrylate) nanoparticles can be used as a good gene vector for gene therapy of laryngeal cancer.
【作者單位】： 福建醫(yī)科大學(xué)附屬廈門第一醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科;廈門大學(xué)生命科學(xué)院;
【基金】：廈門市衛(wèi)生局科研立項專項資金(序號wsk09)資助
【分類號】：R739.65

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2295160