【摘要】： 目的： 喉癌生存率年來(lái)無(wú)法改變的原因主要是術(shù)后無(wú)法控制的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。血管生成擬態(tài)是一種新的血供方式,與腫瘤的侵襲性行為和腫瘤相關(guān)的死亡有關(guān)。本研究旨在探討血管生成擬態(tài)在喉癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用。評(píng)估其臨床病理意義及預(yù)后價(jià)值。進(jìn)一步觀察血管生成擬態(tài)在動(dòng)物移植瘤模型中表達(dá)的時(shí)空規(guī)律；探討上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換在喉癌血管生成擬態(tài)形成中的可能作用機(jī)制。并在此基礎(chǔ)上深入探討EphA2調(diào)節(jié)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換在喉癌血管生成擬態(tài)形成中的作用機(jī)制。 方法： 1)回顧性分析203例喉癌患者臨床病理資料及隨訪(fǎng)結(jié)果。 2) CD31/PAS免疫組化雙重染色及CD31染色標(biāo)記石蠟包埋喉癌組織中血管生成擬態(tài)及內(nèi)皮依賴(lài)性血管,比較其在喉癌中的臨床病理意義和預(yù)后價(jià)值。 3)進(jìn)一步用Hep-2細(xì)胞建立喉癌動(dòng)物移植瘤模型,于不同時(shí)段處死小鼠,獲取腫瘤組織。分別通過(guò)CD31/PAS免疫組化雙重染色、免疫組織化學(xué)染色,real time RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)段動(dòng)物移植瘤組織及人體喉癌標(biāo)本中血管生成擬態(tài)、內(nèi)皮依賴(lài)性血管、EphA2及EMT相關(guān)分子的表達(dá)。比較其表達(dá)的差異。 4)小RNA干擾技術(shù)在體外降低EphA2在頭頸部鱗癌細(xì)胞系Hep-2,Tb和CEN-2中的表達(dá)。 5)體外三維培養(yǎng)檢測(cè)Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞管腔結(jié)構(gòu)形成能力變化。 6)劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞遷移能力變化。 7) Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞侵襲能力改變。 8) Western blotting檢測(cè)Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換相關(guān)分子及細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)的改變。 結(jié)果： 1)血管生成擬態(tài)是喉癌中不依賴(lài)于內(nèi)皮依賴(lài)性血管的一種新的血管生成方式。 2)血管生成擬態(tài)與喉癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和組織病理學(xué)分級(jí)有關(guān)(p0.05)。而內(nèi)皮依賴(lài)性血管與喉癌患者的發(fā)病部位、TNM分期、T分級(jí)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)(p0.05)。 3)單因素分析表明,血管生成擬態(tài)、TNM分期、T分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織病理學(xué)分級(jí)、腫瘤大小和放療與喉癌患者總生存期有關(guān)。而血管生成擬態(tài)、發(fā)病部位、腫瘤大小和放療與與喉癌患者無(wú)病生存期有關(guān)。多因素分析結(jié)果表明血管生成擬態(tài)而非內(nèi)皮依賴(lài)性血管,是喉癌患疾病總生存期和無(wú)病生存期的獨(dú)立預(yù)后因素。 4)血管生成擬態(tài)和內(nèi)皮依賴(lài)性血管的密度在喉癌動(dòng)物移植瘤模型中表達(dá)成時(shí)間依賴(lài)性。血管生成擬態(tài)與內(nèi)皮依賴(lài)性血管密度成負(fù)相關(guān)。 5)血管生成擬態(tài)、EphA2及EMT相關(guān)分子的表達(dá)在喉癌動(dòng)物移植瘤模型中表達(dá)成時(shí)間依賴(lài)性。動(dòng)物移植瘤模型中不同時(shí)段血管生成擬態(tài)密度與EphA2, Twist和Vimentin的mRNA表達(dá)水平成正相關(guān)(r=0.941,0.858,p=0.000,0.000)；與E-cadherin, claudin4和DSG-3的mRNA表達(dá)水平成負(fù)相關(guān)(r=-0.736,-0.769,-0.650；p=0.000,0.000,0.000)。 6)人體喉癌標(biāo)本中免疫組織化學(xué)染色和real time RT-PCR表明EphA2, Twist和Vimentin的表達(dá)VM+組高于VM-組(p0.05), E-cadherin, claudin4和DSG-3的表達(dá)VM+組低于VM-組(p0.05)。 7)體外敲除EphA2的表達(dá),降低了Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞體外管腔結(jié)構(gòu)形成、腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力。 8)體外敲除EphA2的表達(dá),使Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換相關(guān)分子表達(dá)發(fā)生逆轉(zhuǎn),Twist和Vimentin表達(dá)水平下降,而E-cadherin, claudin 4和DSG-3表達(dá)水平升高。 9)體外敲除EphA2的表達(dá),使Hep-2,Tb和CEN-2細(xì)胞骨架蛋白Arp2表達(dá)水平下降。 結(jié)論： 1)喉癌組織中存在血管生成擬態(tài)。 2)血管生成擬態(tài)陽(yáng)性的喉癌具有更強(qiáng)的侵襲轉(zhuǎn)移能力,它可能通過(guò)促進(jìn)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響喉癌患者的生存,對(duì)預(yù)測(cè)喉癌患者的轉(zhuǎn)移和生存具有重要價(jià)值。 3)血管生成擬態(tài)在喉癌動(dòng)物移植瘤模型中表達(dá)水平呈時(shí)間依賴(lài)性,在腫瘤快速生長(zhǎng)過(guò)程中補(bǔ)充內(nèi)皮依賴(lài)性血管血供不足。 4) EphA2及上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換可能參與了喉癌中血管生成擬態(tài)的形成。在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力中起到一定作用。 5) EphA2可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架的重排,啟動(dòng)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)換,完成細(xì)胞塑形,促進(jìn)了喉癌血管生成擬態(tài)的形成,提高了腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,在喉癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R739.65

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 盧燦榮,陳凜,林晨,吳世凱;arresten cDNA在人胃癌細(xì)胞SGC-7901中的表達(dá)及活性鑒定[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2004年03期

2 王彥君,孔維佳,熊新高,張松,孫大為;Survivin和VEGF蛋白在喉癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[J];臨床耳鼻咽喉科雜志;2005年18期

3 韓義明;王靜;王國(guó)平;敖啟林;;肺癌組織中血管生成擬態(tài)和HIF-1α的表達(dá)及意義[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2008年03期

4 張丹芳;張?jiān)娢?郭華;張文治;趙秀蘭;孫保存;;缺血缺氧對(duì)黑色素瘤局部浸潤(rùn)的相關(guān)分子機(jī)制影響的初步研究[J];中華腫瘤防治雜志;2007年06期

5 孫保存,張?jiān)娢?倪春生,劉志勇,戚紅,張丹芳;377例雙向分化惡性腫瘤血管生成擬態(tài)臨床意義分析[J];中國(guó)腫瘤臨床;2005年02期

6 張?jiān)娢?郭華;張丹芳;谷彥軍;趙秀蘭;孫保存;;黑色素瘤組織內(nèi)三種血液供應(yīng)模式時(shí)間關(guān)系的初步探討[J];中國(guó)腫瘤臨床;2007年02期

7 孫保存,張?jiān)娢?趙秀蘭,郝希山;惡性黑色素瘤血管生成擬態(tài)的研究[J];中華病理學(xué)雜志;2003年06期

8 趙秀蘭;杜靜;張?jiān)娢?劉易欣;王欣;孫保存;;肝細(xì)胞肝癌中血管生成擬態(tài)的研究[J];中華肝臟病雜志;2006年01期

9 趙暉;顧曉萌;叢波;李希波;;惡性食管間質(zhì)瘤的血管生成擬態(tài)研究[J];中華消化雜志;2006年06期

10 蔡宣松,賈永偉,梅炯,湯如勇;Tumor blood vessels formation in osteosarcoma:vasculogenesis mimicry[J];Chinese Medical Journal;2004年01期

，

本文編號(hào)：2275002