本文選題：喉癌 + Tiam1　； 參考：《中南大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：第一章Tiam1在喉癌中的表達(dá)及其臨床意義 目的：檢測T淋巴細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移誘導(dǎo)因子1(Tiam1)蛋白在喉癌組織中的表達(dá),并探討其表達(dá)水平與喉癌臨床病理特征和預(yù)后之間的關(guān)系。 方法：采用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測Tiam1蛋白在98例喉癌石蠟組織切片中的表達(dá),并統(tǒng)計(jì)分析Tiam1蛋白表達(dá)水平與喉癌臨床病理特征和預(yù)后之間的關(guān)系；另外,運(yùn)用Western blot檢測Tiam1蛋白在12例配對(duì)的喉癌組織及癌旁黏膜組織中的表達(dá)。 結(jié)果：Tiam1蛋白的表達(dá)與喉癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P0.001)、臨床分期(Ⅰ期+Ⅱ期/Ⅲ期+Ⅳ期)(P=0.027)、組織病理學(xué)分級(jí)(P=0.020)及復(fù)發(fā)(P=0.003)密切相關(guān)；Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示Tiam1高表達(dá)組的5年無復(fù)發(fā)生存率(P=0.001)和5年總生存率(P0.001)均明顯低于Tiam1低表達(dá)組；而且通過Kaplan-Meier生存曲線分析Tiam1蛋白表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與頭頸鱗癌患者預(yù)后之間的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)Tiam1高表達(dá)并有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的5年無復(fù)發(fā)生存率和5年總生存率明顯低于其它(Tiam1低表達(dá)或無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)組(P均0.001)；多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)一步顯示,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)及Tiam1表達(dá)水平(P=0.020)為喉癌的獨(dú)立預(yù)后因素。Western blot結(jié)果顯示Tiam1蛋白在喉癌組織中的表達(dá)水平均高于癌旁黏膜組織(P0.001)。 結(jié)論：Tiam1在喉癌組織中表達(dá)顯著升高,且其高表達(dá)與喉癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后密切相關(guān)。Tiam1可能在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,其表達(dá)水平對(duì)喉癌的復(fù)發(fā)及預(yù)后具有評(píng)估價(jià)值。 第二章Tiam1調(diào)控喉癌細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的體外實(shí)驗(yàn)研究 目的：我們前期的研究表明Tiam1蛋白在喉癌組織中有表達(dá),并與患者的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及預(yù)后密切相關(guān)。因此,該部分將上調(diào)Tiam1在喉癌細(xì)胞株中的表達(dá),并觀察Tiam1基因表達(dá)上調(diào)后對(duì)喉癌細(xì)胞體外增殖、遷移和侵襲能力等生物學(xué)行為的影響。 方法：利用Tiam1/C1199質(zhì)粒轉(zhuǎn)染喉癌Hep-2細(xì)胞,G418篩選Tiam1基因穩(wěn)定高表達(dá)的人喉癌Hep-2細(xì)胞,Western blot、細(xì)胞免疫熒光及細(xì)胞免疫組化檢測轉(zhuǎn)染效果；通過MTT、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察Tiam1過表達(dá)后對(duì)Hep-2細(xì)胞的體外增殖能力、遷移及侵襲能力的影響。 結(jié)果：Tiam1/C1199質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染入Hep-2細(xì)胞,G418篩選后成功構(gòu)建出Tiam1穩(wěn)定高表達(dá)的Hep-2細(xì)胞(Hep-2/Tiam1)。與對(duì)照組Hep-2及轉(zhuǎn)染空載體的Hep-2細(xì)胞(Hep-2/Mock)比較,各組之間細(xì)胞的增殖能力無明顯差異(P0.05),處于G1期、S期和G2期的細(xì)胞比率亦無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),而Hep-2/Tiam1的凋亡率與Hep-2及Hep-2/Mock相比則有明顯下降(2.50±1.33vs.5.61±1.08,5.83±1.02)(P=0.021)。劃痕48小時(shí)后Hep-2/Tiaml細(xì)胞的遷移距離明顯多于Hep-2及Hep-2/Mock (147.00±26.06vs.83.33±23.18,96.33±16.01)(P=0.028)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)24小時(shí)后穿過Transwell聚碳酸酯膜的Hep-2/Tiam1細(xì)胞較兩對(duì)照組明顯增多(68.33±6.66vs.43.00±8.89,45.00±7.55)(P=0.013)。 結(jié)論：Tiam1過表達(dá)后對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞的體外增殖能力無明顯影響,但能增強(qiáng)Hep-2細(xì)胞的遷移及侵襲能力,提示其在喉癌的進(jìn)展中發(fā)揮了重要作用。 第三章Tiaml調(diào)控喉癌細(xì)胞增殖的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究 目的：進(jìn)一步從體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來證實(shí)Tiaml在組織及細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 方法：利用Tiam1/C1199質(zhì)粒轉(zhuǎn)染喉癌Hep-2細(xì)胞,G418篩選Tiaml基因穩(wěn)定高表達(dá)的人喉癌Hep-2細(xì)胞,Western blot檢測轉(zhuǎn)染效果；構(gòu)建喉癌裸鼠移植瘤動(dòng)物模型,通過HE染色驗(yàn)證其成瘤情況；免疫組織化學(xué)及Western blot技術(shù)檢測移植瘤標(biāo)本中Tiam1的表達(dá)情況。 結(jié)果：篩選出Tiam1基因穩(wěn)定過表達(dá)的Hep-2細(xì)胞,并成功構(gòu)建喉癌裸鼠移植瘤動(dòng)物模型,成瘤率達(dá)100%。HE染色符合Hep-2細(xì)胞移植瘤的特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)組Hep-2/Tiaml細(xì)胞移植瘤體積與對(duì)照組Hep-2及Hep-2/Mock細(xì)胞相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。實(shí)驗(yàn)組Hep-2/Tiam1細(xì)胞移植瘤重量與對(duì)照組Hep-2及Hep-2/Mock細(xì)胞相比亦無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。免疫組織化學(xué)及Western blot技術(shù)檢測均顯示實(shí)驗(yàn)組移植瘤組織中Tiam1蛋白表達(dá)顯著增加(P0.05)。 結(jié)論：Tiam1過表達(dá)對(duì)喉癌細(xì)胞在動(dòng)物體內(nèi)的生長無明顯影響。
[Abstract]:The expression of Tiam1 in laryngeal carcinoma and its clinical significance

Objective : To detect the expression of Tiam1 protein in laryngeal carcinoma tissues and to explore the relationship between the expression level and the clinicopathological features and prognosis of laryngeal carcinoma .

Methods : The expression of Tiam1 protein in 98 cases of laryngeal carcinoma paraffin was detected by immunohistochemical staining technique , and the relationship between the expression level of Tiam1 protein and the clinicopathological features and prognosis of laryngeal carcinoma was analyzed statistically .
In addition , the expression of Tiam1 protein in 12 paired laryngeal carcinoma tissues and adjacent mucosa tissues was detected by Western blot .

Results : The expression of Tiam1 protein was closely related to lymph node metastasis ( P0.001 ) , clinical stage ( stage 鈪，

本文編號(hào)：1925575