發(fā)布時間：2018-04-17 04:32

  本文選題：葡萄膜黑色素瘤 + legumain　； 參考：《天津醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文

【摘要】： [目的]葡萄膜黑色素瘤是一種成人最常見的原發(fā)性眼內(nèi)惡性腫瘤,主要來源于葡萄膜黑色素細(xì)胞,因其血運豐富,主要經(jīng)血行轉(zhuǎn)移,而且特異性轉(zhuǎn)移到肝臟,轉(zhuǎn)移是主要的致死因素,尤其葡萄膜黑色素瘤的轉(zhuǎn)移往往具有隱匿性,即在腫瘤早期就容易出現(xiàn)臨床影像學(xué)無法診斷發(fā)現(xiàn)的微轉(zhuǎn)移灶。因而目前對葡萄膜黑色素瘤研究的熱點是確立轉(zhuǎn)移潛能的預(yù)后標(biāo)志,尋找可以早期準(zhǔn)確客觀預(yù)判葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的生物標(biāo)記物。legumain是一個新發(fā)現(xiàn)的半胱氨酸蛋白酶,其特點：在腫瘤組織中特異性表達(dá),正常組織中無明顯表達(dá),與腫瘤免疫關(guān)系密切,而且與腫瘤生成,侵襲,轉(zhuǎn)移,擴散密切相關(guān)。本研究旨在明確legumain在葡萄膜黑色素瘤中的表達(dá),探討legumain對葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的影響,及其與影響葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后各因素(病理類型,腫瘤體積,轉(zhuǎn)移情況,視神經(jīng)受累,侵潤程度)的關(guān)系。 [方法]本研究首先選取兩株葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞株Mum-2B和Mum-2C,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)傳代,提取RNA和蛋白質(zhì),進(jìn)行RT-PCR和Western-blot檢測,同時利用兩株細(xì)胞系進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光的染色,從而在基因和蛋白水平明確legumain在葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系的表達(dá)。在這個實驗基礎(chǔ)上,進(jìn)而收集82例葡萄膜黑色素瘤患者的臨床及預(yù)后資料,同時將這些患者保存的石蠟標(biāo)本制作組織切片,進(jìn)行l(wèi)egumain免疫組織化學(xué)染色,統(tǒng)計legumain的表達(dá)情況,運用Kaplan-meier單因素生存分析的原理與方法進(jìn)行統(tǒng)計分析,將legumain的表達(dá)情況作為待檢驗的預(yù)后因素,與患者預(yù)后結(jié)果相聯(lián)系,并運用Log-rank、Brelow、Tarone-Ware三種方法進(jìn)行顯著性檢驗,明確legumain對葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的影響,同時對82例葡萄膜黑色素瘤的臨床預(yù)后資料進(jìn)行Kaplan-meier單因素生存分析,并運用Log-rank、Brelow、Tarone-Ware三種方法進(jìn)行顯著性檢驗,篩選出與葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后相關(guān)的因素,然后將legumain免疫組化結(jié)果分別與葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后相關(guān)的各因素進(jìn)行相關(guān)分析,明確legumain與影響葡萄膜黑色素瘤預(yù)后各相關(guān)因素的關(guān)系。 [結(jié)果]在細(xì)胞實驗中,通過RT-PCR的檢測,表明在基因水平上兩株葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系legumain為高表達(dá),從細(xì)胞免疫熒光也可見legumain在兩株葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系細(xì)胞膜呈現(xiàn)為綠色熒光的高表達(dá),利用western-blot技術(shù)對兩株細(xì)胞系進(jìn)行l(wèi)egumain的蛋白檢測,可見legumain在兩株細(xì)胞系中均為高表達(dá),且在Mum-2B中表達(dá)較高。對82例葡萄膜黑色素瘤患者的石蠟病理切片進(jìn)行免疫組化染色,結(jié)果顯示在葡萄膜黑色素瘤的三種基本病理類型(上皮細(xì)胞型,梭形細(xì)胞型,混合細(xì)胞型)中l(wèi)egumain均有陽性(高表達(dá))和陰性(低表達(dá))的表達(dá)。通過Kaplan-meier單因素生存分析和Log-rank、Brelow、Tarone-Ware三種方法進(jìn)行顯著性檢驗,發(fā)現(xiàn)葡萄膜黑色素瘤患者性別的不同對患者預(yù)后無明顯影響(P0.05),其余因素legumain,病理類型,腫瘤體積,轉(zhuǎn)移情況,視神經(jīng)受累,侵潤程度均對葡萄膜黑色素瘤患者的預(yù)后有顯著性的影響(P0.05)。經(jīng)過雙變量的相關(guān)分析,legumain與影響葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的各因素(病理類型,腫瘤體積,轉(zhuǎn)移情況,侵襲視神經(jīng),侵潤程度)均呈正相關(guān)(P0.01),而且與腫瘤侵潤程度關(guān)系密切(相關(guān)系數(shù)大于0.5)。 [結(jié)論]本研究通過對葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系和石蠟包埋病理標(biāo)本進(jìn)行l(wèi)egumain表達(dá)情況的檢測,發(fā)現(xiàn)legumain在葡萄膜黑色素瘤中有明顯的高表達(dá),然后結(jié)合患者臨床及預(yù)后資料進(jìn)行葡萄膜黑色素瘤的預(yù)后研究和相關(guān)分析,明確legumain與葡萄膜黑色素瘤預(yù)后及影響預(yù)后各因素的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)legumain不但與葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后有關(guān),而且與影響葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的各因素有一定的相關(guān)性,從而說明legumain不僅是判斷葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后的一個重要指標(biāo),而且在葡萄膜黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能起著重要作用,legumain也有可能成為葡萄膜黑色素瘤治療的一個新的靶點。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R739.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1762101