本文選題：非綜合征型耳聾　切入點(diǎn)：突變　出處：《中南大學(xué)》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：全國性聾病分子流行病學(xué)研究數(shù)據(jù)顯示,盡管遺傳性耳聾具有廣泛的遺傳異質(zhì)性,但大多數(shù)非綜合征性遺傳性耳聾僅由為數(shù)不多的幾個基因突變所致,如GJB2基因、線粒體DNA基因、SLC26A4基因等,從而奠定了在中國開展耳聾基因診斷的理論基礎(chǔ),同時也催生出新的耳聾整體預(yù)防思路和方法。本課題致力于通過設(shè)計經(jīng)濟(jì)、高效、快速、高通量適合中國國情的耳聾基因診斷方法,為建立標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的耳聾基因診斷、遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷模式提供技術(shù)支持,使耳聾基因組研究所取得的偉大成果能夠被廣泛應(yīng)用于中國臨床遺傳性耳聾病因?qū)W診斷和聾兒出生缺陷防控的實踐,實現(xiàn)其“基礎(chǔ)-臨床”的順利轉(zhuǎn)化,從而推動國內(nèi)臨床耳聾基因診斷、遺傳咨詢和基于耳聾基因診斷的產(chǎn)前診斷工作的廣泛開展,最終實現(xiàn)總體降低耳聾發(fā)生及出生缺陷的目標(biāo)。本課題另外一個重要內(nèi)容就是收集到湖南地區(qū)一個表現(xiàn)為X-連鎖或母系遺傳方式的遺傳性耳聾大家系,通過對這一家系的臨床特征及分子病因?qū)W研究,進(jìn)一步探討mtDNA突變同非綜合征耳聾之間的關(guān)系,并為進(jìn)行耳聾致病基因的功能研究打下了基礎(chǔ)。本研究包括以下三個部分。 第一部分運(yùn)用PE-DHPLC技術(shù)快速檢測中國人群非綜合征型耳聾熱點(diǎn)基因突變 目的：建立針對中國人幾種常見的遺傳性耳聾基因型的基因診斷新方法。方法：PCR擴(kuò)增的靶序列,經(jīng)引物延伸,得到中國人非綜合征性耳聾6個常見突變的特異性延伸片段(GJB2-235delC GJB2-299delAT、PDS IVS7-2AG、PDS A2168G、mtDNA A1555G. mtDNA C1494T),用全變性高效液相色譜分析延伸片段混合物,分離圖譜可鑒定被檢樣本的基因型。結(jié)果：所選擇的120例散發(fā)非綜合征性耳聾樣品的引物延伸變性高效液相色譜與經(jīng)測序驗證在結(jié)果吻合,前來遺傳咨詢的4個小家系的引物延伸變性高效液相色譜與測序結(jié)果亦相吻合,該法的準(zhǔn)確率達(dá)100%。結(jié)論：該法是一種準(zhǔn)確、高效的檢測非綜合征性耳聾基因突變的分析方法,可用于非綜合征性耳聾基因及其他遺傳疾病的診斷及遺傳咨詢。 第二部分基因芯片技術(shù)在散發(fā)非綜合征性耳聾基因診斷中的應(yīng)用 第一章基因芯片技術(shù)應(yīng)用于耳聾基因檢測的可行性研究 目的：分析基因芯片技術(shù)應(yīng)用于非綜合征性耳聾基因檢測的準(zhǔn)確性,為建立新的基因檢測方法提供依據(jù)。方法：通過對122例散發(fā)的非綜合征性耳聾患者進(jìn)行芯片及測序的雙盲檢測實驗,驗證GJB2_235delC在這些散發(fā)樣本中的分布情況結(jié)果：隨機(jī)選取的122例樣本的GJB2_235delC的芯片檢測與測序結(jié)果基本吻合,該法的準(zhǔn)確率達(dá)89.9%。結(jié)論：該款芯片具有快速、高通量、高準(zhǔn)確性、等特點(diǎn),適合于大樣本量遺傳性耳聾的基因檢測。 第二章基因芯片檢測技術(shù)在散發(fā)非綜合征性耳聾患者中的應(yīng)用 目的：應(yīng)用Goldengate耳聾基因芯片檢測散發(fā)非綜合征性耳聾患者,研究散發(fā)非綜合征性耳聾的熱點(diǎn)突變基因及耳聾基因位點(diǎn)的關(guān)聯(lián)分析,為建立新的基因檢測方法提供依據(jù)及模型。方法：對389例散發(fā)DNA樣本(其中正常人DNA樣本102例,散發(fā)非綜合征性耳聾患者的DNA樣本287例)進(jìn)行芯片檢測,應(yīng)用關(guān)聯(lián)分析研究耳聾及所選位點(diǎn)的相關(guān)性結(jié)果：6個位點(diǎn)WFS1_Leu829Pro、GJB3_Arg32Trp、OTOF IVS5+1、TMIE IVS2 2、PCDH15 3 BP DEL 5601 5603aac及SLC26A4_Gly497Ser與耳聾的關(guān)聯(lián)分析為負(fù)相關(guān)；rs4809261、rs7421943、MYH14_Arg726Ser、TMPRSS3_PRO404LEU、rs878042、COCH_MET512THR、MYO3A_IVS7_2、TMC1_Tyr259Cys. GJB2_Arg165Trp、rs10515535、rs568619、rs7600176、rs3664、WHRN_IVS2+1、rs46791555及COL9A3_9_BP_DEL_541_549ggtccccca與耳聾的關(guān)聯(lián)分析為正相關(guān)。結(jié)論：基因芯片技術(shù)的建立及成功運(yùn)用是對聾病基因檢測手段的創(chuàng)新和突破,同時表明NSHL具有高度的遺傳異質(zhì)性。 第三部分線粒體12SrRNA 1555AG突變在一個中國耳聾大家系的特殊表現(xiàn)及分析 目的線粒體突變是導(dǎo)致耳聾的重要原因,本文旨在探討線粒體基因組1555AG突變在一個中國耳聾大家系的特殊表現(xiàn)及分析。方法收集一遺傳性耳聾大家系5代48人,提取樣品DNA后,首先采用X-linkage連鎖分析,未發(fā)現(xiàn)變異,再采用DNA直接測序法對家系成員進(jìn)行線粒體全基因組、GJB2編碼區(qū)及POU3F4基因進(jìn)行序列分析。結(jié)果經(jīng)過計算,連鎖分析所有位點(diǎn)LOD值結(jié)果均小于1,不支持連鎖；經(jīng)mtDNA基因組序列分析發(fā)現(xiàn)12 SrRNA基因A1555G突變是此家系的唯一致病突變,同時患者均攜帶一新的變異14163CT。結(jié)論線粒體A1555G突變是本家系耳聾的主要原因,環(huán)境因素及氨基甙類抗生素可能參與A1555G突變表型表達(dá)的調(diào)節(jié),14163CT為中國人群未報道新突變,可能對該家系A(chǔ)1555G突變所致耳聾的外顯率及表型有影響。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R764.43

【參考文獻(xiàn)】

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1 王彤;葉軍;韓連書;邱文娟;張惠文;張雅芬;高曉嵐;王瑜;顧學(xué)范;;羧化全酶合成酶缺陷病的臨床診治及基因突變分析[J];中國當(dāng)代兒科雜志;2009年08期

2 郭永剛;張冠斌;熊強(qiáng);郭e，

本文編號：1605024