發(fā)布時(shí)間：2018-03-05 15:16

  本文選題：鼻咽癌　切入點(diǎn)：高壓氧　出處：《中南大學(xué)》2010年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 研究背景：鼻咽癌是常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤,在東南亞地區(qū),尤其我國(guó)南方,如廣東、廣西、湖南、江西、福建等省高發(fā)。成為癌癥死亡的主要原因,鼻咽癌首選放射治療,5年生存率50%左右。調(diào)強(qiáng)適形放療(intensity modulated radiotherapy IMRT)和三維適形放療(3 dimensional conformal radiotherapy 3D-CRT)的出現(xiàn),提高了腫瘤組織的放射劑量,降低了正常組織的放射劑量,使鼻咽癌5年生存率有進(jìn)一步的提高。但鼻咽癌對(duì)放療中度敏感,部分患者放療后仍有腫瘤殘留,為提高局控率增加放射劑量將增加放射并發(fā)癥,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。因此尋找放射增敏手段,減少放射并發(fā)癥,提高患者生活質(zhì)量,成為世界范圍內(nèi)放射腫瘤學(xué)研究的內(nèi)容。 高壓氧是吸入氧分壓大于一個(gè)大氣壓的氧氣的治療方法,由于高壓氧可以增加組織氧濃度、氧分壓、增大氧的彌散距離,具有減輕水腫和各種缺血缺氧性損傷,促進(jìn)血管生成,激活纖維母細(xì)胞,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力等多種作用。因此廣泛應(yīng)用于組織壞死感染、創(chuàng)傷。已有研究表明高壓氧能增強(qiáng)放射治療對(duì)腫瘤乏氧細(xì)胞的殺傷作用,提高腫瘤局控率,減少腫瘤復(fù)發(fā),降低放療并發(fā)癥。 研究目的：通過(guò)體外及體內(nèi)試驗(yàn)探索高壓氧對(duì)鼻咽癌放射敏感性的影響及其作用機(jī)制,為高壓氧輔助放射治療應(yīng)用于鼻咽癌的臨床研究提供理論和實(shí)踐依據(jù)。整個(gè)研究?jī)?nèi)容分兩部分進(jìn)行,第一部分是高壓氧對(duì)鼻咽癌放射敏感性影響的體外研究。 研究方法：鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2經(jīng)傳代培養(yǎng)后,分為對(duì)照組、高壓氧組、放射組、高壓氧+放射組。 (1)應(yīng)用MTT檢測(cè)高壓氧和放射治療對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞增殖能力的影響； (2)應(yīng)用克隆形成試驗(yàn)通過(guò)線(xiàn)性二次方程擬合細(xì)胞存活曲線(xiàn),單擊多靶模型計(jì)算放射生物學(xué)參數(shù),評(píng)價(jià)高壓氧治療對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞放射敏感性的影響； (3)應(yīng)用FCM分析高壓氧和放射治療對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果： (1)MTT觀(guān)察：放射組2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy治療后CNE-2細(xì)胞增殖抑制率分別為0.1038±0.0151、0.1533±0.0135和0.2097±0.1076,0.2227±0.0353,0.2102±0.0112；2.0ATA高壓氧±2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy治療后CNE-2細(xì)胞增殖抑制率分別為0.1532±0.0155、0.2088±0.0188、0.2538±0.0128、0.2518±0.0220、0.2485±0.0184,各組與放射各組比較均有差異(P0.05)；2.5ATA高壓氧+2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy治療后CNE-2細(xì)胞增殖抑制率分別為0.2062±0.0124、0.2502±0.0199、0.3093±0.0187、0.3030±0.0257、0.3127±0.0228,各組與放射各組比較均具有差異(P0.05)。2.5ATA高壓氧+不同劑量放射組CNE-2細(xì)胞增殖抑制率均高于2.0ATA高壓氧+不同劑量放射組,差異均具有顯著性(P0.05)。 (2)克隆形成試驗(yàn)顯示：放射組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組D0(一次照射殺死63%細(xì)胞的劑量)、SF2(照射2Gy時(shí)存活分?jǐn)?shù))分別為2.217,0.736；1.678,0.376；1.635,0.357。2.0ATA高壓氧放射增敏比SER(D0)和SER(Dq)分別為1.321和6.033,2.5ATA高壓氧放射增敏比SER(D0)和SER(Dq)分別為1.341和6.908。 放射組4、6、8Gy CNE-2細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)分別為0.350±0.055、0.174±0.011、0.040±0.001；2.0ATA高壓氧+4、6、8Gy放射組CNE-2細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)分別為0.107±0.012、0.038±0.008、0.010±0.000,各組與放射各組比較均有差異(P0.05)；2.5ATA高壓氧+4、6、8Gy放射組CNE-2細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)分別為0.101±0.069、0.027±0.000、0.008±0.000,各組與放射各組比較均有差異(P0.05)。 (3)FCM檢測(cè)表明：放射組8、10Gy、2.0ATA高壓氧+6Gy、8、10Gy及2.5ATA高壓氧+4、6、8、10Gy組G2/M期細(xì)胞百分率均高于對(duì)照組(P0.05)；2.0ATA高壓氧組和2.5ATA高壓氧組S期細(xì)胞百分率分別為25.43±1.40和27.73±1.04,均高于對(duì)照組S期細(xì)胞百分率16.40±1.41(P0.05)；2.0ATA高壓氧+8、10Gy組和2.5ATA高壓氧+不同放射劑量組S期細(xì)胞百分比均高于對(duì)照組(P0.05)。 放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組、2.5ATA高壓氧+放射組細(xì)胞凋亡率均大于對(duì)照組(P0.05)。2.0ATA高壓氧+不同放射劑量組及2.5ATA高壓氧+不同劑量放射組細(xì)胞凋亡率均大于不同劑量放射組(P0.05)。 本研究的第二部分是高壓氧對(duì)鼻咽癌放射敏感性影響的體內(nèi)試驗(yàn)研究。 研究方法：試驗(yàn)動(dòng)物分為對(duì)照組、放射組、高壓氧組、高壓氧+放射組。 (1)建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,繪制移植瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn),計(jì)算各組腫瘤抑制率,評(píng)價(jià)高壓氧對(duì)鼻咽癌裸鼠移植瘤放射敏感性的影響； (2)應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)高壓氧和放射治療對(duì)鼻咽癌移植瘤組織中p53、Bcl-2、Bax、Ki67、CD31 (PECAM-1)表達(dá)的影響； (3)應(yīng)用TUNEL試驗(yàn)評(píng)價(jià)高壓氧和放射治療對(duì)鼻咽癌裸鼠移植瘤凋亡指數(shù)(apoptotic index AI)的影響； (4)應(yīng)用Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)高壓氧和放射治療對(duì)鼻咽癌移植瘤組織中p53、Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果： (1)放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組以及2.5ATA高壓氧+放射組腫瘤抑制率(%)分別為94.39±1.40,7.09±2.23,10.91±3.38,98.00±0.26和99.34±0.28。2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組腫瘤抑制率均大于放射組(P＜0.05)。 (2)免疫組化顯示：對(duì)照組、放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為16.67%、83.33%、83.33%、100.00%、100.00%和100.00%。各治療組p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率均高于對(duì)照組(P0.05)。說(shuō)明高壓氧和放射可不同程度誘導(dǎo)p53蛋白的表達(dá)；Bcl-2免疫組化顯示對(duì)照組、放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組Bcl-2蛋白表達(dá)陽(yáng)性表達(dá)率分別為83.33%,100.00%,100.00%,83.33%,83.33%,100.00%。各治療組與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異(P0.05)；Bax免疫組化顯示對(duì)照組、放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組Bax蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為16.67%、100.00%、83.33%、100.00%、100.00%、100.00%。各治療組與對(duì)照組比較均有明顯差異(P0.05)。說(shuō)明高壓氧和放射有促進(jìn)Bax蛋白表達(dá)增高的趨勢(shì)；Ki67免疫組化顯示對(duì)照組、放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組Ki67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為83.33%、100.00%、100.00%、83.33%、100.00%和100.00%。各組比較均無(wú)差異(P0.05)；CD31(PECAM-1)蛋白在各組移植瘤組織中有陰性至弱陽(yáng)性的表達(dá)。對(duì)照組、放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組CD31蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為0.00%、16.67%、0.00%、16.67%、0.00%、16.67%。各治療組和對(duì)照組表達(dá)無(wú)明顯差異(P0.05)。 (3)TUNEL試驗(yàn)顯示對(duì)照組、放射組、2.0ATA高壓氧組、2.5ATA高壓氧組、2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組凋亡指數(shù)AI(%)分別為2.21±0.97,5.54士1.24,4.43±1.09,4.89±0.94,10.67±2.62和15.69±3.78。各治療組與對(duì)照組比較均有顯著差異(P＜0.05)。 (4) Western blot和RT-PCR觀(guān)察到p53和Bax在鼻咽癌移植瘤組織中的蛋白和mRNA水平的表達(dá)與免疫組化分析的結(jié)果相似,對(duì)照組Bcl-2在蛋白和mRNA水平的表達(dá)明顯弱于高壓氧組和放射組,高壓氧+放射組Bcl-2蛋白和mRNA水平的表達(dá)又弱于高壓氧組或放射組,提示高壓氧和放射均抑制Bcl-2在移植瘤組織中的表達(dá),且表現(xiàn)為協(xié)同效應(yīng)。 本研究最后得到以下結(jié)論： (1)體外實(shí)驗(yàn)顯示放射治療對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用。高壓氧治療對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞有放射增敏作用。 (2)高壓氧治療引起鼻咽癌CNE-2細(xì)胞阻滯于S期,放射治療導(dǎo)致鼻咽癌CNE-2細(xì)胞阻滯于G2/M期,高壓氧+放射治療誘導(dǎo)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞阻滯于S期和G2/M期。 (3)高壓氧和放射治療均可誘導(dǎo)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞凋亡,高壓氧+放射治療對(duì)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的凋亡指數(shù)(AI)大于單純高壓氧或單純放射。 (4)體內(nèi)試驗(yàn)顯示2.0ATA高壓氧+放射組和2.5ATA高壓氧+放射組腫瘤抑制率均大于放射組。高壓氧對(duì)鼻咽癌裸鼠移植瘤有放射增敏作用。 (5)免疫組化顯示高壓氧和放射治療均可上調(diào)鼻咽癌p53、Bax基因的表達(dá),且具有協(xié)同作用。Western blot和RT-PCR進(jìn)一步顯示高壓氧和放射均可上調(diào)鼻咽癌p53、Bax基因的表達(dá),且具有協(xié)同作用。高壓氧上調(diào)p53、Bax基因在鼻咽癌組織中的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的凋亡,增強(qiáng)鼻咽癌的放射敏感性,可能是高壓氧對(duì)鼻咽癌放射增敏的機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1570781