發(fā)布時間：2018-03-04 22:26

  本文選題：柚皮素　切入點：CNE　出處：《醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報》2014年04期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的柚皮素重要的生理活性使其具有廣泛的開發(fā)應(yīng)用前景。文中探討不同劑量柚皮素對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞生長的影響及其相關(guān)作用機制。方法 MTT法檢測不同劑量柚皮素(0、0.005、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1、0.2、0.4、0.8 mg/mL)作用CNE2細(xì)胞不同時間(24、48、72 h)對其細(xì)胞生長率的影響;流式細(xì)胞儀檢測不同劑量柚皮素(0、0.02、0.04 mg/mL)作用CNE2細(xì)胞48 h對其細(xì)胞周期的影響;采用Hochest 33258熒光染色觀察不同劑量柚皮素(0、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2細(xì)胞48 h對其細(xì)胞凋亡形態(tài)的變化;采用Annexin V-FITC流式細(xì)胞術(shù)檢測不同劑量柚皮素(0、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2細(xì)胞48 h對其細(xì)胞凋亡率的影響;采用2,7-二氯乙酰乙酸(2,7-dichloro fluorescein diacetate,DCFH-DA)熒光探針檢測不同劑量柚皮素(0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2細(xì)胞48h對其細(xì)胞內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的變化;采用實時熒光定量PCR法(real-tmie fluorescence quantitative PCR,qPCR)檢測不同劑量柚皮素(0、0.02、0.04、0.2、0.4 mg/mL)作用CNE2細(xì)胞48 h對C-fos、Bax及Bcl-2基因mRNA表達水平的變化。結(jié)果與對照組相比,0.02、0.04 mg/mL柚皮素能引發(fā)CNE2細(xì)胞內(nèi)ROS含量低水平升高,ROS的MFI分別為5186±183.50、5508±155.37,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),由此誘導(dǎo)細(xì)胞增殖調(diào)控基因C-fos表達,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05或P0.01),加速細(xì)胞周期運轉(zhuǎn),促進CNE2細(xì)胞分裂增殖;而0.2、0.4 mg/mL柚皮素則能引發(fā)ROS大量產(chǎn)生,ROS的MFI分別為10 758±179.82、11 241±114.45,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),由此誘導(dǎo)促凋亡基因Bax及抑制抗凋亡基因Bcl-2表達,促進CNE2細(xì)胞凋亡,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),有效抑制CNE2細(xì)胞增殖。結(jié)論在0.005~0.8 mg/mL劑量范圍,柚皮素對CNE2細(xì)胞生長具有雙向調(diào)節(jié)作用,相對較低劑量體現(xiàn)為一定的促癌活性,相對較高劑量則體現(xiàn)為強烈的抑癌活性。
[Abstract]:Objective to study the effects of naringin on the growth of human nasopharyngeal carcinoma (NPC) CNE2 cells and its related mechanism due to its important physiological activity. Methods different doses of naringin were detected by MTT assay. The effect of naringin 0. 005, 0. 01C, 0. 02, 0. 04, 0. 4 (0. 8 mg / mL) on the cell growth rate of CNE2 cells at different time points (0. 041) and 0. 046 ~ 0. 010 (mg 路mL)) at different time points (P < 0. 05). The effect of naringin on the growth rate of CNE2 cells was studied. Flow cytometry was used to detect the effect of different doses of naringin 0. 02% 0. 04 mg / mL) on the cell cycle of CNE2 cells for 48 h, and Hochest 33258 fluorescence staining was used to observe the changes of apoptosis morphology of CNE2 cells treated with different doses of naringin 0. 22 mg / mL for 48 h. Annexin V-FITC flow cytometry was used to detect the effect of different doses of naringin (0.2 mg / mL) on the apoptosis of CNE2 cells for 48 h. The changes of reactive oxygen speciesrose in CNE2 cells treated with different doses of naringin 0. 02 ~ 0. 04 and 0. 2 mg / mL for 48 h were detected by using the fluorescence probe of 2 ~ 7 dichloro fluorescein diacetate (DCFH-DAA). The changes of mRNA expression of C-fossil-Bax and Bcl-2 gene in CNE2 cells treated with different doses of naringin 0.02 0.04 0.2g / mL for 48 h were detected by real-time fluorescence quantitative PCR qPCR.Results compared with the control group, naringin of 0.020.04 mg/mL could induce ROS content in CNE2 cells. The MFI of Ros increased at low level was 5186 鹵183.50 / 5508 鹵155.37, respectively, and the difference was statistically significant (P 0.05), which induced the expression of C-fos gene. The difference was statistically significant (P0.05 or P0.01), which accelerated the cell cycle and promoted the division and proliferation of CNE2 cells. On the other hand, the MFI of 0.2n 0.4 mg/mL naringin could induce a large amount of ROS to produce Ros, which was 10 758 鹵179.82 鹵11 241 鹵114.45, respectively. The difference was statistically significant (P 0.01), which could induce the apoptosis gene Bax and inhibit the expression of anti-apoptosis gene Bcl-2, and promote the apoptosis of CNE2 cells. Conclusion in the range of 0.0050.80 mg/mL, naringin has a bidirectional effect on the growth of CNE2 cells, and a relatively low dose of naringin can promote the proliferation of CNE2 cells. The relatively high dose showed strong tumor suppressor activity.
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院生物技術(shù)學(xué)院;
【基金】：廣西壯族自治區(qū)自然科學(xué)基金(2010GXNSFA 013254) 廣西壯族自治區(qū)醫(yī)學(xué)科學(xué)實驗中心開放基金(KFJJ2010-57) 廣西壯族自治區(qū)教育廳科研基金(201010LX328)
【分類號】：R739.63;Q253

【參考文獻】

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本文編號：1567588