本文關(guān)鍵詞： 慢性鼻-鼻竇炎 鼻息肉 嗜酸性粒細(xì)胞 Th1 Th2 Th17 Treg 慢性鼻-鼻竇炎 鼻息肉 嗜酸性粒細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 Th1 Th2 Th17 不伴息肉性慢性鼻-鼻竇炎 病理學(xué) 肥大細(xì)胞 嗜酸性粒細(xì)胞　出處：《華中科技大學(xué)》2011年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究目的： 源于白種人的研究揭示合并鼻息肉性慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinosinusitis with nasal polyps, CRSwNP)和不合并鼻息肉性慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps, CRSsNP)鼻腔粘膜表現(xiàn)出不同的炎癥形式。前者常表現(xiàn)為Th2反應(yīng)占主導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng),而后者則呈現(xiàn)Thl主導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。對非白種人CRSwNP和CRSsNP患者進(jìn)行系統(tǒng)研究更有利于了解慢性鼻-鼻竇炎(chronic rhinosinusitis, CRS)的發(fā)病機(jī)制。因此本研究第一步目的就是了解武漢及周邊地區(qū)CRSwNP及CRSsNP成人患者免疫病理學(xué)特點(diǎn)。 研究方法： 對50個正常下鼻甲組織、94個CRSsNP和151個CRSwNP手術(shù)樣本石蠟切片進(jìn)行HE染色并進(jìn)行組織學(xué)特征觀察(進(jìn)行總炎癥細(xì)胞,單個核細(xì)胞,嗜酸性粒細(xì)胞,漿細(xì)胞及粘液腺體計(jì)數(shù))。根據(jù)對照組織嗜酸性粒細(xì)胞占總炎性細(xì)胞百分比的均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差建立分界標(biāo)準(zhǔn)將CRSsNP和CRSwNP分為嗜酸性粒細(xì)胞性CRSsNP及CRSwNP和非嗜酸性粒細(xì)胞性CRSsNP及CRSwNP。另外通過對17個正常下鼻甲組織、36個CRSsNP和45個CRSwNP手術(shù)樣本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色分析探討各種免疫細(xì)胞在對照、CRSsNP和CRSwNP中的浸潤情況,包括總T細(xì)胞(CD3+),T輔助細(xì)胞(CD4+),細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CD8+),B細(xì)胞(CD20+),巨噬細(xì)胞(CD68+),中性粒細(xì)胞(MPO+),樹突狀細(xì)胞(DC-LAMP+)。利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測T輔助細(xì)胞亞型,包括Th1、Th2、Th17和Treg細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子和相應(yīng)細(xì)胞因子在對照、CRSsNP和CRSwNP中的表達(dá)情況。 結(jié)果： 大于50%CRSwNP患者表現(xiàn)為非嗜酸性粒細(xì)胞浸潤性炎癥反應(yīng)。CRSwNP較CRSsNP有更多的嗜酸性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞、CD3+、CD8+、CD20+和CD68+細(xì)胞浸潤,但是MPO陽性表達(dá)率下降。盡管Th1/Th2/Th17核轉(zhuǎn)錄因子及細(xì)胞因子在CRSwNP和CRSsNP均上調(diào),但是與對照相比二者FOXP3及TGF-β1 mRNA表達(dá)率下調(diào)。CRSsNP較CRSwNP含有更高水平的IFN-γ,然而僅有嗜酸性粒細(xì)胞性CRSwNP (eosinophilic CRSwNP, Eos-CRSwNP)較CRSsNP含有更高的Th2核轉(zhuǎn)錄因子GATA-3水平和細(xì)胞因子IL-5水平。除此之外,Eos-CRSwNP較non-Eos-CRSwNP含有更高的Th2炎癥反應(yīng)(Th2核轉(zhuǎn)錄因子GATA-3和細(xì)胞因子IL-5表達(dá)上調(diào))和Th17炎癥反應(yīng)(Th17核轉(zhuǎn)錄因子RORC及Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A、IL-22及IL-23表達(dá)顯著上調(diào))。 結(jié)論： 國人CRSsNP和CRSwNP成人患者均表現(xiàn)出Treg功能受損和增強(qiáng)的Th1/Th2/Th17混合型炎癥反應(yīng),但是CRSsNP表現(xiàn)出更為突出的Th1反應(yīng),以Th2為主導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞炎癥反應(yīng)和增高的Th17炎癥反應(yīng)僅存在于Eos-CRSwNP而不存在于non-Eos-CRSwNP。 研究目的： 在前面的研究中我們發(fā)現(xiàn)Th2極化和突出的嗜酸性粒細(xì)胞炎癥以及增強(qiáng)的Th17反應(yīng)僅存在于Eos-CRSwNP而并非non-Eos-CRSwNP,然而與Eos-CRSwNP相比中性粒細(xì)胞活化更多見于non-Eos-CRSwNP,這些數(shù)據(jù)提示我們Eos-CRSwNP與non-Eos-CRSwNP潛在的發(fā)病機(jī)制和過程可能存在差異,不同的T輔助細(xì)胞免疫反應(yīng)可能是導(dǎo)致二者差異的原因。因此本研究目的就是(1)進(jìn)一步驗(yàn)證嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞在Eos-CRSwNP與non-Eos-CRSwNP中的活化狀態(tài)是否存在差異,并探討炎癥組織局部趨化嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞浸潤的化學(xué)因子；(2)進(jìn)一步檢測各T輔助細(xì)胞細(xì)胞因子蛋白表達(dá)水平及其相應(yīng)趨化因子和趨化因子受體表達(dá)水平,驗(yàn)證前面實(shí)驗(yàn)結(jié)果及探討導(dǎo)致炎癥反應(yīng)局部各免疫細(xì)胞浸潤的直接原因；(3)比較兩者在臨床表現(xiàn)方面是否有差異；(4)探討Eos-CRSwNP與non-Eos-CRSwNP形成不同免疫病理學(xué)特點(diǎn)的可能的影響因素。 研究方法： 根據(jù)我們前面建立的判定標(biāo)準(zhǔn)將CRSwNP分為Eos-CRSwNP與non-Eos-CRSwNP,比較兩者臨床表現(xiàn)。利用免疫組織化學(xué)方法探討及比較Eos-CRSwNP、non-Eos-CRSwNP和對照組織中嗜酸性粒細(xì)胞(MBP+)和中性粒細(xì)胞(MPO+)的活化狀態(tài)。利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法或bio-plex蛋白檢測技術(shù)檢測嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子eotaxin、RANTES以及GM-CSF和中性粒細(xì)胞趨化因子IL-8及GRO-α在不同組別中的表達(dá)及差異。Bio-plex蛋白檢測技術(shù)檢測Th1/Th2/Th17細(xì)胞因子IFN-γ/IL-4、IL-5、IL-13/以及IL-17, ELISA檢測Th1、Th2趨化因子IP-10、TARC及MDC,實(shí)時(shí)定量RT-PCR分別檢測Th1/Th2/Th17細(xì)胞趨化因子受體CXCR3、CCR4、CCR6, Th1趨化因子MIG、I-TAC。檢測與探討外周血總IgE、常見吸入性過敏原特異性IgE以及炎性組織勻漿總IgE和常見吸入性過敏原及葡萄球菌腸毒素A、B(staphylococcus enterotoxin A、B, SEA、SEB)特異性IgE與嗜酸性粒細(xì)胞炎癥及T細(xì)胞免疫反應(yīng)的相關(guān)性。 研究結(jié)果： 39例CRSwNP患者,其中Eos-CRSwNP 16例占41%, non-Eos-CRSwNP 23例占59%,二者臨床表現(xiàn)方面未見明顯差異。Eos-CRSwNP中活化嗜酸性粒細(xì)胞增多且與嗜酸性粒細(xì)胞炎癥成正比,non-Eos-CRSwNP未見明顯嗜酸性粒細(xì)胞活化現(xiàn)象。與對照及non-Eos-CRSwNP相比,Eos-CRSwNP嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子eotaxin表達(dá)顯著升高,而趨化因子RANTES及GM-CSF的表達(dá)三者間并無差異。non-Eos-CRSwNP較Eos-CRSwNP具有更常見的中性粒細(xì)胞浸潤與活化,然而部分Eos-CRSwNP患者也表現(xiàn)出十分顯著的中性粒細(xì)胞炎癥。與對照相比中性粒細(xì)胞趨化因子IL-8在Eos-CRSwNP和non-Eos-CRSwNP均顯著上調(diào),然而細(xì)胞因子GRO-a在non-Eos-CRSwNP中的表達(dá)較對照和Eos-CRSwNP升高。與對照和non-Eos-CRSwNP相比,組織勻漿總IgE、Thl7特異性趨化受體、Th2細(xì)胞因子IL-5、IL-13以及Th2細(xì)胞特異性趨化因子受體CCR4和Th2細(xì)胞趨化因子TARC的表達(dá)在Eos-CRSwNP均顯著上調(diào)。與對照相比,Eos-CRSwNP中Th1細(xì)胞因子IFN-γ,Th1細(xì)胞特異性趨化因子受體CXCR3表達(dá)顯著升高,而non-Eos-CRSwNP卻并無升高。30% Eos-CRSwNP檢測出金黃色葡萄球菌A、B特異性IgE而non-Eos-CRSwNP及對照均未檢測出。局部總IgE與局部嗜酸性粒細(xì)胞炎癥及Th2細(xì)胞因子IL-13表達(dá)水平呈正相關(guān)。 研究結(jié)論： 本研究進(jìn)一步證實(shí)Eos-CRSwNP與non-Eos-CRSwNP具有不同的免疫病理學(xué)特性：Th2極化和增強(qiáng)的Th17反應(yīng)僅存在于Eos-CRSwNP而并不存在于non-Eos-CRSwNP,而non-Eos-CRSwNP具有更常見的中性粒細(xì)胞浸潤與活化。局部IgE可能是導(dǎo)致不同CRSwNP表型的重要原因而葡萄球菌超抗原僅參與部分Eos-CRSwNP的發(fā)病。Eos-CRSwNP中Th2免疫細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞分別主要由TARC和eotaxin趨化,而GRO-α可能在non-Eos-CRSwNP中中性粒細(xì)胞趨化和活化中起重要作用。 目的：觀察不伴息肉性慢性鼻-鼻竇炎(Chronic rhiosinusitis without nasal polyps, CRSsNP)病理學(xué)特點(diǎn),探討肥大細(xì)胞及活化肥大細(xì)胞在CRSsNP中的作用及其與嗜酸性粒細(xì)胞炎癥的關(guān)系。方法：1.采用HE染色對CRSsNP和對照下鼻甲組織學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行觀察以及對組織總炎細(xì)胞,單個核細(xì)胞,漿細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)分析.利用甲苯胺蘭和類胰蛋白酶免疫組化法分別檢測肥大細(xì)胞和活化肥大細(xì)胞在CRSsNP和對照中的浸潤情況,并探討其與組織嗜酸性粒細(xì)胞炎癥的相關(guān)性。結(jié)果：CRSsNP組織中總炎性細(xì)胞,單個核細(xì)胞以及漿細(xì)胞數(shù)均高于對照組,而嗜酸性粒細(xì)胞和粘膜固有層腺體數(shù)量于二者無明顯差異.肥大細(xì)胞和活化肥大細(xì)胞計(jì)數(shù)呈相關(guān)性,但二者在CRSsNP和對照組中均未見明顯差異,且二者與組織嗜酸性粒細(xì)胞炎癥均無相關(guān)性。結(jié)論：CRSsNP較正常對照具有更重的炎癥反應(yīng),但肥大細(xì)胞及其活化以及組織嗜酸性粒細(xì)胞二者無差異,且肥大細(xì)胞及其活化與嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)無相關(guān)性,提示肥大細(xì)胞及其介導(dǎo)的嗜酸性粒細(xì)胞炎癥在CRSsNP的發(fā)病中并不起重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R765.21

【參考文獻(xiàn)】

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1 何春燕,劉紅剛,王憲忠;慢性鼻竇炎炎癥細(xì)胞浸潤情況觀察[J];耳鼻咽喉頭頸外科;2003年01期

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本文編號：1540145