本文關(guān)鍵詞： 轉(zhuǎn)錄因子FOXM1 腺病毒載體AdFOXM1shRNA RNA干擾 腫瘤基因治療 鼻咽癌 乳腺癌　出處：《湖南大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：癌癥是21世紀(jì)困擾人類的難題之一，給人類健康和生命安全帶來嚴(yán)重威脅。其中，鼻咽癌是中國(guó)南方和東南亞最常見的惡性腫瘤之一，每年大約十萬人中就有20例鼻咽癌發(fā)生，其發(fā)病率和死亡率均居頭頸惡性腫瘤首位。乳腺癌是女性排名第一的常見惡性腫瘤，是導(dǎo)致女性死亡的重要原因，且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，成為全球公共衛(wèi)生的一大難題。由于傳統(tǒng)的治療癌癥的方法如化療，放療存在毒副作用等嚴(yán)重缺陷，尋找癌癥治療的新方法和新靶點(diǎn)已成為近年來的研究熱點(diǎn)。 FOXM1屬于Forkhead Box轉(zhuǎn)錄因子家族，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、細(xì)胞衰老、DNA損傷修復(fù)、器官形成等很多重要的生理過程。大量文獻(xiàn)表明FOXM1在多種人類惡性腫瘤中都有過表達(dá)的現(xiàn)象，其中包括乳腺癌，但是FOXM1在鼻咽癌中的作用還未見文章報(bào)道。本文中我們研究發(fā)現(xiàn)FOXM1在鼻咽癌組織和細(xì)胞株，以及乳腺導(dǎo)管癌組織和細(xì)胞株中均存在高水平的表達(dá)。另外，有研究發(fā)現(xiàn)FOXM1在維持腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)移的平衡方面扮演了重要的角色。這些證據(jù)預(yù)示著FOXM1有可能成為抗腫瘤新方法的靶標(biāo)。 腺病毒是目前基因治療的主要載體，，具有宿主范圍廣、感染效率高、滴度高、安全性好，能容納大片段的外源DNA等優(yōu)點(diǎn)。RNA干擾是基因治療中常用的分子工具之一，然而小分子干擾RNA導(dǎo)入靶細(xì)胞的效率高低是其成功應(yīng)用的關(guān)鍵。為了解決這一問題，本課題中我們構(gòu)建了一個(gè)腺病毒介導(dǎo)的shRNA表達(dá)系統(tǒng)，命名為AdFOXM1shRNA，用以在腫瘤細(xì)胞中特異性的干擾FOXM1的表達(dá)，進(jìn)而研究該載體在鼻咽癌和乳腺癌基因治療中的初步的療效分析。通過實(shí)驗(yàn)，我們得到了以下結(jié)果。 首先，摸索本研究所選擇的三株細(xì)胞中合適的病毒使用劑量，這三株細(xì)胞分別是鼻咽癌細(xì)胞CNE以及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和ZR-75-30。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用10pfu/cell的對(duì)照病毒AdLacZ感染這三株細(xì)胞都幾乎能達(dá)到100%的感染效率。并且，實(shí)驗(yàn)證明在該劑量下我們所構(gòu)建的AdFOXM1shRNA載體能夠非常有效的干擾鼻咽癌和乳腺癌細(xì)胞中FOXM1的表達(dá)。 接著，我們考察了干擾FOXM1的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響。與預(yù)期的一樣，鼻咽癌細(xì)胞CNE和乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231， ZR-75-30感染AdFOXM1shRNA后，由于FOXM1的表達(dá)下降，細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)也隨之下降，細(xì)胞周期被阻斷，細(xì)胞的增殖能力被嚴(yán)重抑制。 然后，我們檢驗(yàn)了FOXM1在腫瘤的發(fā)生過程中是否起作用。通過軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)我們看到，感染AdFOXM1shRNA的鼻咽癌細(xì)胞CNE和乳腺癌細(xì)胞ZR-75-30的克隆形成率大大降低，細(xì)胞的非貼壁依賴性生長(zhǎng)的能力被抑制；而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，F(xiàn)OXM1的缺失降低了乳腺癌細(xì)胞ZR-75-30生成腫瘤的能力。兩組實(shí)驗(yàn)分別在體外和體內(nèi)證實(shí)了腫瘤的發(fā)生有賴于FOXM1的存在。 最后，我們通過建立裸鼠移植瘤模型考察了FOXM1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。鼻咽癌和乳腺癌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，瘤內(nèi)注射AdFOXM1shRNA能夠降低腫瘤組織中FOXM1的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)，顯示出FOXM1對(duì)于腫瘤的生長(zhǎng)的重要性，預(yù)示著AdFOXM1shRNA應(yīng)用于鼻咽癌和乳腺癌基因治療的潛在可能。
[Abstract]:Cancer is one of the most common malignant tumors in the 21st century , which poses a serious threat to human health and life safety . Among them , nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) is one of the most common malignant tumors in South China and Southeast Asia . There are many important physiological processes involved in the regulation of cell proliferation , cell senescence , DNA damage repair , organ formation , and so on . In this paper , we have found that FoxM1 plays an important role in the maintenance of tumor cell proliferation , differentiation , apoptosis and metastasis . Adenovirus is the main carrier of gene therapy . It has the advantages of wide host range , high infection efficiency , high titer , good safety , and can accommodate large segments of foreign DNA . In order to solve this problem , we constructed an adenovirus - mediated shRNA expression system , which is named as Adjoint M1 shRNA , which is used to specifically interfere with the expression of FoxM1 in tumor cells , and further studies the preliminary therapeutic effect of the vector in the gene therapy of nasopharyngeal carcinoma and breast cancer . First , we groped for the appropriate dose of virus in three cells selected by the Institute . These three cells were nasopharyngeal carcinoma cell CNE and breast cancer cell MDA - MB - 231 and ZR - 75 - 30 , respectively . As expected , the expression of cell cycle related genes decreased and the cell cycle was blocked , and the cell proliferation ability was severely inhibited . The results showed that the expression of ZR - 75 - 30 in nasopharyngeal carcinoma cell CNE and breast cancer cell line ZR - 75 - 30 was significantly decreased and the ability of cell adhesion - dependent growth was inhibited ; and the results of animal experiment showed that the deletion of FoxM1 reduced the ability of ZR - 75 - 30 to generate tumor . Both groups demonstrated that the occurrence of tumor depended on the presence of FoxM1 in vitro and in vivo . Finally , we investigated the effect of FoxM1 on tumor growth by establishing a nude mouse xenograft model . The results of in vivo experiments of nasopharyngeal carcinoma and breast cancer show that the tumor growth can be reduced by injecting the Adjoint M1 shRNA into the tumor , which indicates the importance of FoxM1 for the growth of the tumor , and indicates the potential for the application of the AdFoxM1 shRNA in the gene therapy of nasopharyngeal carcinoma and breast cancer .

【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R450;R737.9;R739.63

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1540006