本文關鍵詞： 阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征 端粒 白細胞　出處：《南方醫(yī)科大學》2011年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：研究背景： 端粒(Telomere)是位于真核生物線性染色體末端的特殊序列,由端粒DNA和端粒結合蛋白組成,起保護和穩(wěn)定染色體的作用。 早在20世紀30年代,諾貝爾獎得主Hermnn Muller和Barbara Mcclintock就已經(jīng)觀測到染色體的末端結構在避免染色體之間的融合中起了重要的作用,從而猜測它可能有保護染色體的作用。1978年,Blackburn發(fā)現(xiàn)了富含小染色體的模式生物四膜蟲的端粒含有許多重復的5'-CCCCAA-3'六堿基序列,與此同時,Szostak發(fā)現(xiàn)微型染色體在導入酵母后會很快被降解這一現(xiàn)象,于是這兩位科學家將四膜蟲的CCCCAA序列偶聯(lián)到微型染色體上并導入酵母,結果發(fā)現(xiàn)這段端粒序列的加入使得微型染色體免受降解,從而證實了端粒對染色體的保護作用。進一步的研究發(fā)現(xiàn),端粒可通過形成t-loop緊湊結構,或者與Shelterin等端粒保護蛋白結合,從而防止染色體降解、避免末端融合,進一步調節(jié)細胞生長.隨著體細胞的不斷增殖,端粒會逐漸縮短,當端�？s短至一定程度,細胞停止分裂,進入靜止狀態(tài),故有人稱端粒為正常細胞的“分裂鐘”(mistosis clock). Benetos等對193例平均年齡為56歲的人群進行端粒平均長度的測量,發(fā)現(xiàn)端粒長度與人年齡成負相關的關系；Lee對猴子外周血單核細胞測量端粒長度發(fā)現(xiàn),端粒每年相應縮短62.7 bp。端粒長度可以作為研究細胞衰老與生物體年齡的一種很好的方式。 近幾年對中老年人群中發(fā)生睡眠呼吸暫停綜合征(sleep apnea sylndrome, SAS),尤其是阻塞型睡眠呼吸暫停綜合征(obstructive sleep apnea syndrome, OSAS)的研究越來越多,國外對該病的研究已有30余年,國內也有近20年。SAS是一嚴重的睡眠呼吸障礙性疾病,是由于某些原因而致上呼吸道阻塞,睡眠時有呼吸暫停,伴有缺氧、鼾聲、白天嗜睡等癥狀的一種較復雜的疾病。好發(fā)于肥胖者及中老年人,4050歲年齡段患病率較高,國外報道成年男性發(fā)病率為4%,女性發(fā)病率為2%,我國人群發(fā)病率為3.4%。目前35歲左右的患者發(fā)病也有上升趨勢。小兒的發(fā)病率約為1%-2%,男女發(fā)病率無差異,可見于各年齡階段,但以學齡前期最為多見。 SAS主要臨床表現(xiàn)為睡眠時打鼾,且鼾聲不規(guī)則,伴有呼吸暫停和呼吸表淺,有時憋醒,夜間反復的呼吸暫停和低通氣導致動脈血氧飽和度下降和組織缺氧,患者會表現(xiàn)為夜尿增多,晨起頭痛,白天乏力,嗜睡,嚴重者還可出現(xiàn)記憶力、智力下降,性格改變和性欲減低,許多研究報道OSAS會引致腦血管疾病、精神異常、肺心病和呼吸衰竭,糖尿病,性欲減退等一系列的并發(fā)癥,最直接的就是會誘發(fā)高血壓,導致冠心��；在腦卒中人群中高達60%。有1/5的心臟病是由睡眠呼吸暫停綜合征引起,其并發(fā)癥造成多臟器功能損害嚴重者甚至意識喪失,猝死,嚴重的影響患者的生活質量和壽命。 但目前人們對OSAS的嚴重后果不了解,對OSAS早期預防、早期診斷與早期治療認識不足,不主動前來就醫(yī),很多病例多是出現(xiàn)嚴重的心、腦、肺、腎等并發(fā)癥時才就診,以致錯過治療時機,睡眠醫(yī)學是近年來新興的一門邊緣學科,SAS越來越受到醫(yī)學界和社會各界的重視,尤其是OSAS對機體影響的研究也越來越廣泛越深入,對患者做到健康教育及早期診斷與早期治療是一項非常重要的工作。 有越來越多的研究報道說明端粒長度與冠心病、心血管疾病、腫瘤、胃癌、腸癌、肝癌、糖尿病、尿毒癥等疾病有關,所以關于端粒長度變化規(guī)律的各種機制的提出,無疑是生物醫(yī)學領域的重大突破,隨著我們不斷的發(fā)現(xiàn)和掌握端粒長度及其變化規(guī)律,可以看出通過端粒長度估計個體的即時年齡和預期壽命,闡述衰老機理；運用細胞端粒長度蘊涵的臨床病理參數(shù)和信息來調查缺氧的生物學行為和發(fā)生模式,把端粒長度作為缺氧的一種診斷依據(jù)和臨床治療指征;解決OSAS組織工程中細胞的老化問題,為阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(OSAS)的治療提供理論基礎。 研究目的 探討阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(OSAS)患者外周血白細胞端粒長度的變化及意義。 研究對象 根據(jù)2007年美國睡眠醫(yī)學會(American Academy of Sleep Medicine, AASM)的多道睡眠圖分析標準,選擇OSAS患者11例,健康對照組10例,提取外周血白細胞DNA,純度檢測合格后,用Q-PCR法檢測端粒長度相對T/S比率。 研究方法 1實驗用品 材料 兩組受試者的外周靜脈全血5ml, EDTA抗凝,置于-80℃冰箱中保存待測；定量PCR專用8聯(lián)管及及管蓋。 試劑Takara Blood Genome DNA Extraction試劑盒,SYBR(?) Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒,異丙醇,乙醇,1X TE緩沖液 T反應引物：tell GGTTTTTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGGTte12 TCCCGACTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTA S反應引物：36b4u CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC 36b4d CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA 設備水浴箱,紫外分光光度儀,ABI PRISM(?) 7500實時熒光定量PCR儀。 2實驗方法 基因組DNA的抽提 采用Takara Blood Genome DNA Extraction試劑盒抽提全血基因組DNA,測定濃度后,篩選合格標本進行實驗,稀釋DNA濃度到約20 ng/μL濃度。 DNA濃度及純度的測定 采用Eppendof Biophotometer測定提取的DNA濃度及A260/280比值,選擇合格標本進行實驗。 進行PCR反應的設置 T/S比率的計算 采用熒光定量PCR儀配套軟件,分別確定T反應及S反應的Ct值——Ct (telomeres)及Ct (36B4),根據(jù)PCR反應產(chǎn)物以2的指數(shù)倍遞增原理,T/S比率應該接近于公式[2Ct(telomeres)/2Ct(36B4)]-1-2-ΔCt 3統(tǒng)計方法 所得數(shù)據(jù)用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進行分析。組間差異的顯著性分析用兩個獨立樣本的t檢驗。數(shù)據(jù)間的相關性用Pearson相關分析法。 結果 1.端粒長度相對T/S比率的比較 本研究中,OSAS組端粒相對長度T/S比率為3494.71±2531.04,健康對照組端粒長度相對T/S比率為67536.01±87431.93,OSAS組端粒相對長度T/S比率較健康對照組小,二者之間存在統(tǒng)計學差異(P0.05) 2.端粒長度相對T/S比率與年齡、BMI、AHI、病程、病情分級的相關關系 OSAS組端粒長度相對T/S比率與年齡、BMI、AHI、病程、病情分級等均無顯著的相關性(P0.05)。健康對照組端粒長度相對T/S比率與年齡呈負相關,r=-0.713,P=0.021,但與BMI也無顯著相關性(P0.05) 結論 OSAS患者外周血白細胞端粒長度的縮短可能與其發(fā)病機制有關,低氧血癥和高碳酸血癥加速了端粒的損耗和細胞的凋亡。 OSAS所引起的慢性缺氧和(或)高碳酸血癥可能加速了端粒的損耗和細胞的凋亡,影響人類的健康與壽命,我們應當積極預防和治療OSAS。呼吸暫�？蓪е碌脱跹Y(P02↓),高碳酸血癥(PCO2T),甚至pH失代償,血氧飽和度可降到60%-80%。嚴重低氧可引起兒茶酚胺、腎素血管緊張素和內皮素分泌增加,微血管收縮,內分泌、神經(jīng)調節(jié)功能失調,血流動力學和流變學改變,微循環(huán)異常使組織器官缺血、缺氧加重而導致多系統(tǒng)器官損害。目前的研究已知OSAS對心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、腦血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、內分泌和性功能、腎臟和血液系統(tǒng)等存在危害,尚未發(fā)現(xiàn)OSAS與端粒長度變化的關系。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R766

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 任甫;李長勇;席煥久;黃克強;溫有鋒;蘇榮健;;人外周血白細胞端粒DNA長度與年齡的定量關系[J];中國法醫(yī)學雜志;2007年03期

2 柏智剛;徐平;;兒童阻塞性呼吸睡眠暫停綜合征研究進展[J];黑龍江醫(yī)學;2009年10期

3 方杰;劉書漫;吳景蘭;張欽憲;;胃癌組織端粒長度的變化[J];腫瘤基礎與臨床;2006年05期

4 曹東維;張苗;;尿毒癥患者染色體端粒長度改變的研究[J];軍醫(yī)進修學院學報;2006年04期

5 趙曉輝;尹揚光;黃嵐;;端粒和端粒酶與冠心病[J];中國動脈硬化雜志;2006年10期

6 張利敏;穆雙月;耿旭紅;;老年鼾癥患者的動態(tài)心電圖分析[J];現(xiàn)代電生理學雜志;2009年03期

7 鐘天映;陳媛媛;畢利軍;;端粒與端粒酶的研究——解讀2009年諾貝爾生理學或醫(yī)學獎[J];生物化學與生物物理進展;2009年10期

8 Brouilette S.W.;Moore J.S.;McMahon A.D.;N.J. Samani;奚群英;;西蘇格蘭冠心病一級預防研究中端粒長度、冠心病風險和他汀類藥物治療:一項巢式病例對照研究[J];世界核心醫(yī)學期刊文摘(心臟病學分冊);2007年07期

9 楊平勛;黃君健;;端粒及端粒酶的研究進展[J];生物技術通訊;2007年04期

10 鐘英成;羅朋立;靳國恩;楊慧蓮;韓淑芬;格日力;;熒光實時定量PCR檢測端粒長度[J];臨床和實驗醫(yī)學雜志;2008年04期

，

本文編號：1488315