本文關(guān)鍵詞： 鼻咽癌 NESG1 候選腫瘤抑制基因 信號(hào)通路　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 研究背景與目的 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma)是我國南方省份及東南亞高發(fā)的一種惡性腫瘤,具有明顯的種族聚集性和地域性。其發(fā)生是一個(gè)多階段、多途徑、多機(jī)制的過程。流行病學(xué)調(diào)查顯示,鼻咽癌的發(fā)生涉及到遺傳傾向性和環(huán)境致癌因素,很可能是遺傳易感性個(gè)體接受了致癌物的作用而發(fā)生的。EB病毒(EBV)、化學(xué)致癌物和胚性擊中(即遺傳因素或自發(fā)突變)構(gòu)成NPC的主要病因,而發(fā)病階段至少在兩個(gè)以上。各種環(huán)境因素、EBV感染、遺傳和表遺傳學(xué)的改變導(dǎo)致瘤基因過表達(dá)及抑瘤基因表達(dá)下調(diào)或缺失,經(jīng)過癌前病變,最終發(fā)生鼻咽癌。 腫瘤的生成涉及多種基因和基因以外的變化,任何單獨(dú)一種基因的改變不足以致瘤,多種基因變化的積累才能引起控制細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的機(jī)制紊亂,使細(xì)胞的生長(zhǎng)失控而瘤變。在這些基因的變化中,最常發(fā)生兩類基因的異常變化,即瘤基因及腫瘤抑制基因。鼻咽癌的生成同樣涉及多基因的表達(dá)改變。在過去幾十年中,雖然我們對(duì)于鼻咽癌發(fā)生的分子基礎(chǔ)認(rèn)識(shí)已經(jīng)有了很大的提高,但這些認(rèn)識(shí)還是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能完全揭示鼻咽癌的發(fā)病機(jī)理。因此,鼻咽癌相關(guān)新基因的發(fā)現(xiàn)和研究仍將有助于進(jìn)一步揭示鼻咽癌的發(fā)病機(jī)理。 NESG1基因(Genbank AF094758),官方名為CCDC19(NM_012337.1),是本課題組姚開泰教授指導(dǎo)的博士生黎眾魁于1999年利用mRNA差異顯示法,從人正常鼻咽上皮和軟腭口腔上皮中篩選,并結(jié)合3'-RACE和5'-RACE技術(shù),分別擴(kuò)增出長(zhǎng)約1.4kb和0.7kb的片段(其中包含了一段174bp的重疊產(chǎn)物以確認(rèn)擴(kuò)增的特異性),拼接后發(fā)現(xiàn)的一個(gè)全長(zhǎng)約1850bp連續(xù)的cDNA序列。該基因位于1q22。預(yù)測(cè)其編碼框長(zhǎng)1161bp,編碼386個(gè)氨基酸,分子量為46252Da,蛋白質(zhì)等電點(diǎn)為9.99,SOSUI和PSORTⅡ網(wǎng)上預(yù)測(cè)其為可溶性核蛋白。BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn),NESG1的cDNA序列與胎兒肺組織cDNA文庫和Stratagene肺癌cDNA文庫中的兩個(gè)EST序列同源。多組織(包括鼻咽粘膜、氣管、食管、大腦、心臟、膀胱、肝臟、肺臟、胃、腎臟、胸腺和大腸)Northern雜交顯示,該基因特異性的表達(dá)于鼻咽和氣管纖毛柱狀上皮。 本課題在此研究基礎(chǔ)上,對(duì)NESG1基因進(jìn)行重新克隆測(cè)序分析及功能鑒定,并尋找NESG1基因相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,探討該基因在鼻咽癌中的作用機(jī)制,為進(jìn)一步闡明鼻咽癌發(fā)病機(jī)理提供參考。 研究?jī)?nèi)容與方法 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息學(xué)分析 對(duì)NESG1基因進(jìn)行了重新克隆、測(cè)序分析并對(duì)其序列進(jìn)行修正,重新預(yù)測(cè)編碼框。對(duì)新校正序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。 2. NESG1基因在鼻咽癌中表達(dá)水平檢測(cè) (1).NESG1基因mRNA表達(dá)水平 利用RT-PCR和Real-time PCR檢測(cè)NESG1 mRNA在鼻咽癌細(xì)胞、鼻咽癌組織與非癌鼻咽組織中的表達(dá)情況；原位雜交檢測(cè)NESG1基因的mRNA表達(dá)定位。 (2).NESG1兔抗人多克隆抗體制備及NESG1蛋白表達(dá) 構(gòu)建pGEX-4T-1-NESG1-GST原核融合表達(dá)載體。IPTG誘導(dǎo)NESG1-GST基因融合表達(dá)。利用GST抗體純化融合蛋白用于免疫大白兔,約100天后取兔血上清,并親和純化,最后獲得所需的NESG1多克隆抗體。利用免疫組化和Western blot檢測(cè)NESG1蛋白在鼻咽癌組織與非癌鼻咽組織中的表達(dá)情況。利用免疫組化檢測(cè)鼻咽外多組織中NESG1的表達(dá)分布。 3. NESG1基因在鼻咽癌中的功能初步研究 (1).NESG1過表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞5-8F生物學(xué)特性的影響 構(gòu)建與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白融合表達(dá)的NESG1慢病毒載體,利用293FT細(xì)胞包裝成成熟的慢病毒顆粒,感染具有高成瘤和高轉(zhuǎn)移能力的鼻咽癌細(xì)胞5-8F。96孔板有限稀釋法挑選陽性單克隆細(xì)胞,擴(kuò)大培養(yǎng),建立穩(wěn)定過表達(dá)NESG1的鼻咽癌細(xì)胞株,以空載體同時(shí)進(jìn)行病毒包裝及感染鼻咽癌細(xì)胞5-8F,獲得對(duì)照細(xì)胞株。利用MTT法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)NESG1基因在細(xì)胞水平對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、細(xì)胞周期、遷移及侵襲能力的影響；檢測(cè)穩(wěn)定過表達(dá)NESG1的鼻咽癌細(xì)胞裸鼠皮下成瘤能力的改變。 (2).抑制NESG1表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞5-8F生物學(xué)特性的影響 構(gòu)建靶向NESG1的shRNA慢病毒干擾載體,穩(wěn)定干擾過表達(dá)NESG1基因的鼻咽癌細(xì)胞,利用MTT法、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)及Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)等觀察NESG1表達(dá)抑制后細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移及侵襲能力的變化。進(jìn)一步探討NESG1基因在鼻咽癌細(xì)胞中的基本功能。 4. NESG1基因介導(dǎo)的分子基礎(chǔ)初步研究 (1).應(yīng)用Affymetrix全基因組芯片檢測(cè)NESG1基因穩(wěn)定導(dǎo)入前后對(duì)鼻咽癌細(xì)胞基因表達(dá)的影響,尋找差異表達(dá)基因 (2).利用生物信息學(xué)的方法,分析基因芯片差異表達(dá)基因介導(dǎo)的信號(hào)通路 (3).NESG1抑制細(xì)胞周期進(jìn)展的初步分子機(jī)制 由于過表達(dá)的NESG1能阻滯細(xì)胞周期由G1向S期轉(zhuǎn)化,因此,NESG1參與抑制了細(xì)胞周期的進(jìn)展�；诨蛐酒臄�(shù)據(jù),我們利用熒光定量RT-PCR和Western blot驗(yàn)證了S期相關(guān)的幾個(gè)重要基因CCNDl、CCNAl、CDK4、p21、CDK2、CDC2的表達(dá),初步探討了NESG1基因抑制細(xì)胞周期進(jìn)展的機(jī)制。 結(jié)果 1. NESG1基因的序列修正以及新序列的生物信息學(xué)分析 (1).NESG1基因的序列修正 最近,我們對(duì)NESG1基因進(jìn)行重新克隆并測(cè)序分析時(shí)發(fā)現(xiàn),測(cè)序結(jié)果與原提呈的AF094758(NM_012337.1)序列存在兩處差異：A堿基替代了原序列CDS區(qū)第1181位的G堿基、原序列第905位點(diǎn)處有一個(gè)A堿基的插入,從而導(dǎo)致氨基酸編碼框改變。新序列與人類基因組序列比對(duì)顯示了與其完全的一致性。另外,新序列在與其他的人cDNA序列(CR604695、BC089391)和模式生物cDNA序列如NM_001024882.1(褐家鼠)、XM_513919(黑猩猩)、AB168450(食蟹猴)等比對(duì)時(shí)并未發(fā)現(xiàn)1181和905位點(diǎn)有其它類型的堿基改變,這就證實(shí)了新克隆NESG1序列的正確性。由于新序列1181堿基由A替代了G以及905位點(diǎn)A堿基的插入,導(dǎo)致NESG1基因的編碼序列較前發(fā)生了變化。重新預(yù)測(cè)了編碼框,結(jié)果顯示NESG1基因編碼框長(zhǎng)1656bp,編碼551個(gè)氨基酸,這與Macaca fascicularis(食蟹猴)睪丸cDNA中克隆出的NESG1基因(AB168450)的編碼框預(yù)測(cè)長(zhǎng)度一致。向NCBI參考序列部提交修改申請(qǐng)后,Genbank數(shù)據(jù)庫接收了修改意見,使其版本由最初的NM_012337.1升級(jí)為NM_012337.2。 (2).序列修正后NESG1基因的生物信息學(xué)分析 修正后的NESG1基因編碼551個(gè)氨基酸,預(yù)測(cè)分子量為65729,7Da,等電點(diǎn)為8.94。SMART程序預(yù)測(cè)NESG1主要是一個(gè)含卷曲螺旋(coiled-coil)結(jié)構(gòu)的蛋白(157-468aa和498-527aa)。Blast比對(duì)和距離樹進(jìn)化分析顯示,該基因進(jìn)化相對(duì)保守,與許多模式生物都有很高的同源性,而且進(jìn)化越高級(jí),同源性越高。PROSITE分析顯示該蛋白含有一個(gè)N-myristoylation位點(diǎn)、四個(gè)Protein kinase C phosphorylation位點(diǎn)、一個(gè)N-glycosylation位點(diǎn)、七個(gè)Casein kinaseⅡphosphorylation位點(diǎn)、兩個(gè)cAMP and cGMP-dependent protein kinase phosphorylation位點(diǎn)及兩個(gè)Amidation位點(diǎn)。疏水性及跨膜蛋白預(yù)測(cè)結(jié)果顯示NESG1是跨膜蛋白的可能性小。SignalP 3.0軟件信號(hào)肽預(yù)測(cè)結(jié)果顯示NESG1沒有信號(hào)肽序列,因此是分泌蛋白的可能性小。用三種不同軟件預(yù)測(cè)NLS (Nuclear Localization Signal),均在248aa-258aa,以及503aa-521aa附近發(fā)現(xiàn)核定位信號(hào),提示我們NESG1蛋白很可能在細(xì)胞核有表達(dá)。 2. NESG1基因在鼻咽癌中表達(dá)水平檢測(cè) (1).NESGl基因mRNA表達(dá)水平 原位雜交顯示,NESG1基因表達(dá)在鼻咽粘膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞的細(xì)胞核、漿內(nèi)。半定量RT-PCR和熒光定量RT-PCR均顯示,與非癌鼻咽組織相比,NESG1基因在鼻咽癌組織和細(xì)胞中表達(dá)明顯下調(diào)(t=19.819,P0.001)。 (2).NESG1兔抗人多克隆抗體制備及NESG1蛋白表達(dá) 使用新制備的NESG1多克隆抗體,利用Western blot方法在正常鼻咽組織中檢測(cè)到一條表達(dá)很強(qiáng)的約66kD的條帶,表明校正后的NESG1確實(shí)是正確的基因。Western blot檢測(cè)各鼻咽癌細(xì)胞株、鼻咽癌組織以及非癌鼻咽組織中NESG1在蛋白水平的表達(dá)情況,以β-actin為內(nèi)參,根據(jù)各條帶的NESG1灰度值與β-actin灰度值比率計(jì)算各細(xì)胞中NESG1的表達(dá)水平,結(jié)果表明,與非癌鼻咽組織相比,NESG1在鼻咽癌組織和細(xì)胞中表達(dá)均顯著下調(diào)(t=41.116,P0.001)。免疫組化檢測(cè)82例鼻咽癌組織和40例非癌鼻咽組織中NESG1的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,NESG1主要在鼻咽粘膜柱狀、鱗狀上皮細(xì)胞漿中表達(dá),個(gè)別細(xì)胞中也可見核表達(dá)。與非癌鼻咽組織相比,NESG1在鼻咽癌組織中表達(dá)顯著降低(Z=6.852,P0.001)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析,NESG1的表達(dá)與患者的年齡無相關(guān)性(Z=0.506,P=0.613和0.474)；與性別也無相關(guān)性(Z=0.717,P=0.474)；而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著負(fù)相關(guān)(Z=2.110,P=0.035)；與臨床分期顯著負(fù)相關(guān)(χ2=14.660,P=0.001)其他正常組織中的檢測(cè)結(jié)果表明,NESG1主要表達(dá)于甲狀腺導(dǎo)管上皮、乳腺導(dǎo)管上皮、舌鱗狀上皮、細(xì)支氣管柱狀上皮、腸上皮以及胃,在腎小管也有弱表達(dá)。肺泡上皮、胸腺、肝、脾、闌尾、子宮內(nèi)膜、子宮頸鱗狀上皮不表達(dá)。其中在甲狀腺導(dǎo)管上皮、胃小凹以及細(xì)支氣管柱狀上皮中發(fā)現(xiàn)有核表達(dá)。 3. NESG1基因在鼻咽癌中的功能初步研究 (1).NESG1過表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞5-8F生物學(xué)特性的影響 將NESG1導(dǎo)入到鼻咽癌細(xì)胞系5-8F中,建立了穩(wěn)定過表達(dá)NESG1的細(xì)胞系。選取兩株單克隆細(xì)胞2F4和3D8用于后續(xù)功能研究,以空載體單克隆細(xì)胞C6作為對(duì)照。2F4細(xì)胞中NESG1 mRNA的表達(dá)量比3D8細(xì)胞幾乎高2倍,而蛋白表達(dá)則高1.76倍。采用MTT法對(duì)NESG1過表達(dá)后5-8F細(xì)胞體外增殖能力的改變進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,導(dǎo)入NESG1的2F4和3D8細(xì)胞比空載C6細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢,并且NESG1表達(dá)相對(duì)更高的2F4細(xì)胞比3D8細(xì)胞生長(zhǎng)抑制地更明顯。對(duì)3D8、2F4、C6、5-8F組細(xì)胞的增殖情況用析因設(shè)計(jì)的方差分析,四組細(xì)胞的增殖能力具有顯著差異(F=1404.066,P0.001),3D8和2F4細(xì)胞較C6和5-8F細(xì)胞增殖緩慢。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)的結(jié)果同樣顯示3D8、C6、5-8F三組細(xì)胞的克隆形成能力具有顯著差異(F=27.559,P0.001)；2F4、C6、5-8F三組細(xì)胞的克隆形成能力也具有顯著差異(凡50.148,P0.001)。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明NESG1過表達(dá)后,抑制了鼻咽癌細(xì)胞5-8F的體外增殖。采用流式細(xì)胞術(shù)分析過表達(dá)NESG1的單克隆細(xì)胞3D8和2F4的細(xì)胞周期分布,結(jié)果發(fā)現(xiàn),5-8F、C6、3D8和2F4四組細(xì)胞的S期細(xì)胞比例有顯著差異(F=9.086,P=0.006)。與空載對(duì)照單克隆細(xì)胞C6以及未處理細(xì)胞5-8F相比,3D8細(xì)胞S期細(xì)胞比例無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.796、P=0.536),而2F4細(xì)胞S期細(xì)胞比例比C6和5-8F細(xì)胞顯著下降(P=0.003、P=0.002),也就是說,在NESG1表達(dá)更高的2F4細(xì)胞中,細(xì)胞出現(xiàn)了G1向S期轉(zhuǎn)化障礙,細(xì)胞被阻滯在G1期。采用Transwell小室檢測(cè)NESG1過表達(dá)后細(xì)胞體外遷移運(yùn)動(dòng)能力的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)四組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的差異具有顯著性(F=1054.101,P0.001)。與C6和5-8F細(xì)胞相比,2F4和3D8穿過膜的細(xì)胞數(shù)顯著減少,其運(yùn)動(dòng)能力明顯降低。采用Boyden小室的方法分析NESG1過表達(dá)后細(xì)胞體外侵襲能力的變化,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果顯示四組細(xì)胞侵襲能力的差異具有顯著性(F=304.640,P0.001)。與5-8F和C6相比,3D8和2F4細(xì)胞穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)顯著減少,其體外侵襲能力明顯降低。裸鼠皮下成瘤接種后連續(xù)觀察,于第14天處理3D8／C6組6只裸鼠,第18天處理2F4／C6組5只裸鼠。結(jié)果表明,與對(duì)照細(xì)胞C6相比,3D8細(xì)胞組裸鼠皮下成瘤重量有顯著差異(F=8.478,P=0.005),體積也有顯著差異(F=22.199,P=0.004)；同樣,與對(duì)照細(xì)胞C6相比,2F4細(xì)胞組裸鼠皮下成瘤重量有顯著差異(F=2.904,P0.001),體積也有顯著差異(F=7.957,P=0.010)。NESG1基因?qū)?-8F細(xì)胞后,能顯著抑制細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)。 (2).抑制NESG1表達(dá)對(duì)鼻咽癌細(xì)胞5-8F生物學(xué)特性的影響 構(gòu)建靶向NESG1的shRNA慢病毒干擾載體,穩(wěn)定干擾過表達(dá)NESG1基因的鼻咽癌細(xì)胞株2F4,選取兩株單克隆細(xì)胞1C9和1D10用于后續(xù)功能研究,以空載體細(xì)胞C1作為對(duì)照。熒光定量檢測(cè)1C9干擾效率為97.7%,1D10干擾效率為97.8%。采用MTT法對(duì)NESG1基因沉默后2F4細(xì)胞體外增殖能力的改變進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)三組細(xì)胞的體外增殖能力具有顯著差異(F=3764.751,P0.001)。與空載對(duì)照單克隆細(xì)胞C1相比,干擾NESG1后的單克隆細(xì)胞1C9、1D10增殖速度顯著加快。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示三組細(xì)胞的克隆形成能力具有顯著差異(F=140.525,P0.001),干擾NESG1后的單克隆細(xì)胞1C9、1D10的克隆形成能力較空載對(duì)照單克隆細(xì)胞C1強(qiáng)。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明干擾NESG1表達(dá)后,鼻咽癌細(xì)胞的體外增殖能力增強(qiáng)。采用Transwell小室檢測(cè)NESG1干擾后細(xì)胞體外遷移運(yùn)動(dòng)能力的變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三組細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的差異具有顯著性(F=1162.190,P0.001)。與空載體對(duì)照單克隆C1細(xì)胞相比,干擾NESG1后的單克隆細(xì)胞1C9、1D10穿過膜的細(xì)胞數(shù)顯著增加,其運(yùn)動(dòng)能力明顯增強(qiáng)。采用Boyden小室的方法分析NESG1沉默后細(xì)胞體外侵襲能力的變化,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果顯示三組細(xì)胞侵襲能力的差異具有顯著性(F=887.155,P0.001)。與空載體對(duì)照單克隆C1細(xì)胞相比,干擾NESG1后的單克隆細(xì)胞1C9、1D10穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)顯著增加,其體外侵襲能力明顯增強(qiáng)。 4. NESG1基因介導(dǎo)的分子基礎(chǔ)初步研究 (1). Affymetrix全基因組表達(dá)譜芯片 對(duì)NESG1-2F4和C6空載對(duì)照細(xì)胞進(jìn)行Affymetrix全基因組表達(dá)譜芯片檢測(cè),一共檢測(cè)到了2400多個(gè)差異表達(dá)基因,其中上調(diào)基因797個(gè),下調(diào)基因1707個(gè)。將這些差異表達(dá)基因進(jìn)行了初步的Pathway分析,結(jié)果顯示NESG1基因參與多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,其中包括Tight junction、MAPK通路和Cell cycle通路等。 (2).NESG1抑制細(xì)胞周期進(jìn)展初步機(jī)制研究 根據(jù)基因芯片數(shù)據(jù),我們采用熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)NESG1過表達(dá)后S期相關(guān)基因的表達(dá)變化。熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示,CCNAl在2F4、3D8和C6中的表達(dá)有顯著差異(Welch=213.053,P=0.001)；CDK4在2F4、3D8中的表達(dá)與對(duì)照細(xì)胞C6無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.579,P=0.589)；CCND1在2F4、3D8中的表達(dá)與對(duì)照細(xì)胞C6無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.017,P=0.983)；與空載對(duì)照細(xì)胞C6相比,p21在2F4、3D8中表達(dá)顯著增高(F=35.675,P0.001)；CDK2在2F4、3D8中的表達(dá)與對(duì)照C6無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Welch=0.092,P=0.914)；CCD2在2F4、3D8中的表達(dá)與對(duì)照細(xì)胞C6無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.769,P=0.504)。Western blot結(jié)果表明,與空載C6相比,CCNA1在2F4、3D8中表達(dá)顯著下調(diào)(Welch=155.736,P=0.001)；CDK4在2F4、3D8中的表達(dá)與對(duì)照細(xì)胞C6無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.470,P=0.646)；CCND1在2F4、3D8中的表達(dá)與對(duì)照細(xì)胞C6無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=0.558,P=0.600)；與空載細(xì)胞C6相比,p21在2F4、3D8中表達(dá)顯著增高(F=86.359,P0.001)。我們的結(jié)果提示,NESG1可能通過間接抑制CCNA1的表達(dá)和上調(diào)p21的表達(dá),從而阻礙了細(xì)胞周期的進(jìn)展。 結(jié)論 1.修正了NESG1基因的序列,使其在Genbank數(shù)據(jù)庫中的版本由最初的NM_012337.1升級(jí)為NM_012337.2。 2.NESG1穩(wěn)定導(dǎo)入鼻咽癌細(xì)胞5-8F后,細(xì)胞的體內(nèi)、外增殖、遷移和侵襲能力顯著下降,在NESG1表達(dá)更強(qiáng)的2F4細(xì)胞中,細(xì)胞出現(xiàn)了G1向S期轉(zhuǎn)化障礙,細(xì)胞阻滯在G1期。在抑制NESG1表達(dá)后,細(xì)胞增殖能力、遷移和侵襲能力顯著恢復(fù)。這提示,NESG1在鼻咽癌中是一個(gè)腫瘤抑制相關(guān)基因。 NESG1通過抑制CCNA1和上調(diào)p21的表達(dá),參與了鼻咽癌細(xì)胞周期進(jìn)展的調(diào)控。 本研究創(chuàng)新之處 1.修正了NESG1基因的序列,更新了NESG1在Genbank數(shù)據(jù)庫中的版本號(hào)。 2.對(duì)NESG1基因進(jìn)行了表達(dá)定位,在mRNA和蛋白水平證實(shí)了NESG1基因在鼻咽癌中表達(dá)下調(diào),為理解和研究鼻咽癌發(fā)病的分子機(jī)制提供了線索。 3.初步證實(shí)NESG1基因與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),能夠抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力,并且將細(xì)胞阻滯在G1期。 4.基因芯片分析顯示,NESG1參與介導(dǎo)了Tight junction、MAPK和Cell cycle等多條信號(hào)通路,這為研究NESG1在鼻咽癌中介導(dǎo)的信號(hào)通路提供了關(guān)鍵的線索。 5.NESG1抑制CCNA1的表達(dá)和上調(diào)p21的表達(dá),阻礙了鼻咽癌細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)展。 6.NESG1基因是本課題組克隆及修正的鼻咽癌候選抑瘤基因,具有獨(dú)立的知識(shí)產(chǎn)權(quán)。對(duì)該基因的研究能進(jìn)一步闡明鼻咽癌發(fā)病機(jī)理,有重要的研究?jī)r(jià)值。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1487851