本文關(guān)鍵詞： 青蒿素 蒿甲醚 輻射增敏作用 CNE-1細(xì)胞 微核 染色體突變 細(xì)胞周期 wee1 cyclinB1　出處：《蘇州大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的本課題分別研究青蒿素(artemisinin)與蒿甲醚(artemether)對(duì)p53突變型人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞輻射增敏作用及機(jī)制;比較青蒿素與蒿甲醚對(duì)CNE-1細(xì)胞輻射增敏作用的差異性。通過檢測(cè)青蒿素與蒿甲醚的藥物濃度和作用時(shí)間對(duì)CNE-1細(xì)胞的抑制效應(yīng),確定用作輻射增敏實(shí)驗(yàn)的藥物濃度及時(shí)間;通過研究青蒿素與蒿甲醚對(duì)輻射后CNE-1細(xì)胞增殖能力的影響,探討青蒿素與蒿甲醚對(duì)細(xì)胞輻射敏感性的影響;通過對(duì)青蒿素、蒿甲醚及60Coγ射線作用后細(xì)胞周期以及細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白wee1,cyclinB1表達(dá)水平的檢測(cè),對(duì)青蒿素與蒿甲醚輻射增敏機(jī)制進(jìn)行研究。并且,比較分析青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞輻射增敏作用及作用機(jī)理。 方法(1)利用四氮唑鹽比色試驗(yàn)(MTT)分別檢測(cè)青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)的影響;(2)應(yīng)用克隆形成法檢測(cè)青蒿素與蒿甲醚對(duì)細(xì)胞輻射敏感性的影響;(3)胞質(zhì)分裂阻滯微核法(cytokinesis block method,CB法)和常規(guī)染色體畸變分析分別研究青蒿素、蒿甲醚對(duì)60Coγ射線誘導(dǎo)CNE-1細(xì)胞微核率和染色體畸變的影響;(4)利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)60Coγ射線作用后青蒿素與蒿甲醚對(duì)細(xì)胞周期的影響;(5)應(yīng)用Western Blot法觀察60Coγ射線作用后青蒿素、蒿甲醚對(duì)細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白wee1,cyclinB1的影響。 結(jié)果(1)MTT實(shí)驗(yàn)顯示青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率具有濃度及時(shí)間依賴性,其抑制作用隨青蒿素與蒿甲醚濃度和作用時(shí)間的增加而增加;(2)青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率不同,當(dāng)人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率達(dá)到10%左右時(shí),青蒿素與蒿甲醚的作用濃度分別為5μmol/L和20μmol/L;(3)在濃度為5μmol/L青蒿素與20μmol/L蒿甲醚的作用下,細(xì)胞克隆形成率隨照射劑量增加而減少;青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞均具有輻射增敏作用,蒿甲醚較青蒿素對(duì)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞具有更強(qiáng)的輻射增敏作用;(4)對(duì)于CNE-1細(xì)胞,單純照射組和青蒿素+照射組平均致死劑量(D0)分別為5.6Gy、4.4Gy,準(zhǔn)閾劑量(Dq)分別為1.33 Gy、0.285 Gy,輻射增敏比(SER)為1.272;單純照射組和蒿甲醚+照射組平均致死劑量(D0)分別為5.6Gy、3.7Gy,準(zhǔn)閾劑量(Dq)分別為1.33 Gy、0.25 Gy,輻射增敏比(SER)為1.481。蒿甲醚的輻射增敏比(SER=1.481)大于青蒿素的輻射增敏比(SER=1.272),同樣表明蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的輻射增敏作用大于青蒿素;(5)微核和染色體分析顯示:青蒿素與蒿甲醚均能夠提高相同劑量照射誘發(fā)的CNE-1細(xì)胞的微核率和染色體畸變率;相同劑量照射,蒿甲醚作用后CNE-1細(xì)胞的微核率和染色體畸變率均高于青蒿素(P0.01);(6)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn),藥物+照射組與單純照射組相比, G0/G1期細(xì)胞比例上升(P 0.01),G2/M期細(xì)胞比例下降(P 0.01);(7)Western-blot分析,藥物+照射組wee1蛋白較單純照射組減少,cyclinB1蛋白較單純照射組增加。 結(jié)論(1)青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞的抑制率隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長而增加;(2)相同濃度的青蒿素對(duì)人鼻咽癌細(xì)胞的抑制率高于蒿甲醚的抑制率。(3)青蒿素與蒿甲醚對(duì)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞均具有輻射增敏作用。(4)蒿甲醚較青蒿素對(duì)人鼻咽癌CNE-1細(xì)胞具有更強(qiáng)的輻射增敏作用。(5)青蒿素與蒿甲醚對(duì)CNE-1細(xì)胞的輻射增敏作用與其抑制輻射誘導(dǎo)活化的G2/M期阻滯效應(yīng)使受損細(xì)胞沒有經(jīng)過修復(fù)直接進(jìn)入分裂期而發(fā)生死亡有關(guān)。(6)青蒿素和蒿甲醚主要通過誘導(dǎo)CNE-1細(xì)胞中wee1蛋白表達(dá)降低和cyclinB1蛋白表達(dá)增高,從而減弱輻射誘導(dǎo)的G2/M期阻滯效應(yīng),而發(fā)揮其輻射增敏作用。
[Abstract]:Objective To study the effects of artemisinin and artemether on the radiosensitivity of CNE - 1 cells . The effects of artemisinin and artemether on the radiosensitivity of CNE - 1 cells were studied . The effects of artemisinin and artemether on the radiosensitivity of CNE - 1 cells were determined . The effects of artemisinin and artemether on the radiosensitivity of CNE - 1 cells were studied . Methods ( 1 ) The effects of artemisinin and artemether on the survival fraction of human nasopharyngeal carcinoma cells were detected by MTT assay . ( 2 ) The effects of artemisinin and artemether on cell cycle were studied by using colony forming method . ( 4 ) The effects of artemisinin and artemether on cell cycle were studied by flow cytometry . Results ( 1 ) The inhibitory rate of artemisinin and artemether on human nasopharyngeal carcinoma CNE - 1 cells increased with the increase of the concentration of artemisinin and artemether . Conclusion ( 1 ) The inhibitory rate of artemisinin and artemether on human nasopharyngeal carcinoma CNE - 1 cells increases with the increase of drug concentration and the duration of action . ( 2 ) The inhibitory rate of artemisinin and artemether on human nasopharyngeal carcinoma CNE - 1 cells is higher than that of artemether .

【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：1477321